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Caracterização citogenética e molecular em acessos do gênero Arachis

MARTINS, Maria Isabel Gomes 22 February 2010 (has links)
Submitted by (ana.araujo@ufrpe.br) on 2017-02-20T18:08:38Z No. of bitstreams: 1 Maria Isabel Gomes Martins.pdf: 909875 bytes, checksum: 9a09e0cba454d77aa80b64325afc8841 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-20T18:08:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria Isabel Gomes Martins.pdf: 909875 bytes, checksum: 9a09e0cba454d77aa80b64325afc8841 (MD5) Previous issue date: 2010-02-22 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The Arachis genus has been the target of several studies due to its importance in human and animal food and because its seeds are recognized as source of protein and oil of vegetal origin, besides its use as ornamental plants. Arachis breeding programs have as main objective the introduction of new varieties and increase of genetic variability through crosses and selection to obtain important agronomic characters. Cytogenetic techniques such as conventional staining, chromosome banding with fluorochromes and FISH were used to analyze four species of Heteranthae: Arachis pusilla, A. giacomettii, A. dardani and A. sylvestris. All species had a diploid chromosome number 2n = 20, A. pusilla and A. dardani presented a karyotypic formula 18m + 2sm and satellite type 2, while A. giacomettii and A. sylvestris had 16m + 4sm and satellite type 10. Flumachromes CMA and DAPI revealed in A. pusilla a large number of blocks rich in Guanine and Cytosine, located in eight chromosomal pairs in the pericentromeric position. DAPI + blocks were observed in the proximal region in most chromosomes of the analyzed accesses of this species after the FISH technique. Arachis dardani presented two large subterranean CMA + blocks. A. giacomettii and A. dardani presented only two CMA + blocks, in the terminal region of the satelite chromosome pair. In situ hybridization demonstrated in A. giacomettii two hybridization signals in the terminal region of a chromosomal pair and in A. pusilla four 45S rDNA sites in two chromosomal pairs and two adjacent 5S rDNA sites. In A. giacomettii, two hybridization signals were visualized in the terminal region of a chromosomal pair, coinciding with the CMA + blocks, but not visualized, but 5S rDNA sites. For the molecular technique, 35 oligonucleotide primers from legume expression libraries were used, which were applied in two contrasting peanut lines, "BR1" and "LVIPE-06" accessions, commonly used in the formation of segregating populations. Objective of obtaining a panel of endonucleases recommended to generate polymorphic markers useful for the genetic improvement of peanuts or for genetic mapping purposes. From the total of oligonucleotide primers, three generated polymorphisms directly from PCR between the accesses investigated. Of the monomorphic amplicons, ten were purified, sequenced and aligned for the identification of candidate SNPs for the generation of restriction and conversion maps in molecular tags. / O gênero Arachis tem sido alvo de diversos estudos devido à sua importância na alimentação humana e animal e por suas sementes serem reconhecidas como fonte de proteína e óleo de origem vegetal, além do seu uso como plantas ornamentais. Os programas de melhoramento genético de Arachis têm por objetivo principal a introdução de novas variedades e aumento da variabilidade genética via cruzamentos e seleção para obtenção de caracteres agronômicos importantes. Técnicas citogenéticas como coloração convencional, bandeamento cromossômico com fluorocromos e FISH foram empregadas para analisar quatro espécies da seção Heteranthae: Arachis pusilla, A. giacomettii, A. dardani e A. sylvestris. Todas as espécies apresentaram número cromossômico diplóide 2n=20, A. pusilla e A. dardani apresentaram fórmula cariotípica 18m+2sm e satélite tipo 2, enquanto que A. giacomettii e A. sylvestris possuem 16m+4sm e satélite tipo 10. A coloração com fluorocromos CMA e DAPI revelou em A. pusilla um grande número de blocos ricos em Guanina e Citosina, localizados em oito pares cromossômicos na posição pericentromérica. Blocos DAPI+ foram observados na região proximal na maioria dos cromossomos dos acessos analisados dessa espécie após a técnica de FISH. Arachis dardani apresentou dois grandes blocos subterminais CMA+. A. giacomettii e A. dardani apresentaram apenas dois blocos CMA+, na região terminal do par cromossômico satelitato. A técnica de Hibridização in situ evidenciou em A. giacomettii dois sinais de hibridização na região terminal de um par cromossômico e em A. pusilla quatro sítios de DNAr 45S em dois pares cromossômicos e dois sítios de DNAr 5S adjacentes. Já em A. giacomettii foram visualizados dois sinais de hibridização na região terminal de um par cromossômico, coincidindo com os blocos CMA+, não sendo visualizados, porém sítios DNAr 5S. Para a técnica de molecular foram utilizados 35 oligonucleotídeos iniciadores, provenientes de bibliotecas de expressão de leguminosas, estes foram aplicados em duas linhagens contrastantes de amendoim, acessos „BR1‟ e „LVIPE-06‟, comumente utilizados na formação de populações segregantes, com o objetivo de obter um painel de endonucleases recomendadas para gerar marcas polimórficas úteis ao melhoramento genético de amendoim ou para fins de mapeamento genético. Do total de oligonucleotídeos iniciadores, três geraram polimorfismos diretamente da PCR entre os acessos investigados. Dos amplicons monomórficos, dez foram purificados, sequenciados e alinhados para a identificação dos SNPs candidatos a geração dos mapas de restrição e conversão em marcas moleculares.
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Caracterização citogenética, molecular e morfológica de acessos do gênero Arachis com ênfase na seção Heteranthae

SILVA, Silvokleio da Costa 28 February 2007 (has links)
Submitted by (ana.araujo@ufrpe.br) on 2017-02-21T18:15:32Z No. of bitstreams: 1 Silvoklelo da Costa Silva.pdf: 1073501 bytes, checksum: 45a8440998a76cd876dc6505f469cdcc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-21T18:15:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silvoklelo da Costa Silva.pdf: 1073501 bytes, checksum: 45a8440998a76cd876dc6505f469cdcc (MD5) Previous issue date: 2007-02-28 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The genus Arachis have been mainly objective of several studies due to your importance in the feeding and as forage.Your wild species present high genetic variability and find contained in nine taxonomic sections. Of these, the Heteranthae section stands out for being endemic of Brazil, especially in the Northest area and in stats of Goiás and Minas Gerais. Although dont't have very spread use, many of your species present potential for use as forage.being considered the plasticity in this genus, efforts shold be addressed seeking to intensify the employment of native species and your respective conservation in situ and ex situ, especially the one of the Heteranthae section by your potentiality and representative regional, because your players can come to serve as alternative for employment as forage and/ou of genes of agronomic interest.This way, the present work had for objective to analyze species of the Heteranthae section of the cytogenetic and molecular, beyon morphologic analyzes.Besed in cytogenetics data, was verified that all the accesses present chromosome number 2n=20, with metacentric (in the majority of the chromosomes) the submetacentric morphology. Arachis dardani, A. pusilla and A.interrupta present 18m+2sm and satellite type 2, whereas A.sylvestris and A.giacomettii present 16m+4sm and satellite type 10.Divergences in relation to the heterocromatic regions CMA had been detected between the species.A pusilla present the biggest number of rich blocks in GC localized in all the chromosomes of the complement.In accordance with the gotten data, the species are suggested that A.dardani and A. interrupta are most primitive with base moderate asymmetry and satellite type.Data related to the type of satellite of the A.interrupta are different of literature. In A. pusilla, the constitutive heterocromatin perishes to have sufferd recent modifications in its constitution.The molecular data generatad way ISSR congregated the species in three groups, being the tho first ones consisting by species of the section Heteranthae, whereas third it was represented by species of the section Arachis. Such infformation in accordance with is given of found taxonômica classification in literature.Already the morphologic analyses, based in vegetative and reproductive describers, make possible to group the majority of the acesses of the section Heteranthae as taxonomic classification,except for the species A. pusilla that it possibly presented fenologic divergences attributed to the ambient factors or the genetic variability intrinseca of this genotype. / O gênero Arachis tem sido alvo de diversos estudos devido à sua importância principalmente na alimentação humana e como forragem. Suas espécies silvestres apresentam alta variabilidade genética e se encontram agrupadas em nove seções taxonômicas.Destas, a seção Heteranthae destaca-se por ser endêmica do Brasil,ocorrendo especialmente na região Nordeste e nos Estados de Goiás e Minas Gerais.Embora não tenha uso muito difundido, muitas de suas espécies apresentam potencial para uso forrageiro. Considerando-se a plasticidade encontrada neste gênero, esforços devem ser direcionados visando potencializar o emprego das espécies nativas e sua respectiva conservação in situ e ex situ, em especial as da seção Heteranthae mediante sua potencialidade e representatividade regional, visto que seus representantes poderão vir a servir como alternativa para emprego como forragem e/ou de genes de interesse agronômico.O presente trebalho teve por objetivo analisar espécies do gênero Arachis, enfatizando a seção Heteranthae, via técnicas citogenéticas e moleculares, além de añálise morfológica. Com base nos dados citogenéticos, verificou-se que todos os acessos apresentaram número cromossômico diplóide 2=20 com morfologia metacêntrica (maioria dos cromossomos) a submetacêntrica.Arachis dardani,A. pusilla e A. interrupta apresentam fórmula cariotípica 18m+2sm e satélite tipo 2, enquanto que A. sylvestris e A. giacomettii possuem 16m+4sm e satélite tipo 10.Divergências em relação às regiões heterocromáticas CMA foram detectadas entre as espécies.A. pusilla apresentou o amior número de blocos ricos em GC localizados em todos os cromossomos do complemento. De acordo com os dados obtidos, sugeriu-se que as espécies A.dardani e A. interrupta são as mais primitivas com base na assimetria moderada e tipo de satélite. Dados relacionados ao tipo de satélite de A. interrupta divergem da literatura. Ao menos em A. pusilla, a heterocromatina constitutiva parece ter sofrido modificações recentes na sua constituição que, ao contrário das demais espécies, apresentou-se formando blocos pericentroméricos CMA em todo o complemento cromossômico. Os dados moleculares gerados via ISSR reuniu as espécies em três grupos, sendo os dois primeiros constituídos por espécies da seção Heteranthae, enquanto que o terceiro foi representado por espécies da seção Arachis. Tais informações estão de acordo com os dados de classificação taxonômica encontrada na literatura. As análises morfológicas, baseadas em descritores vegetativos e reprodutivos, possibilitaram agrupar a maioria dos acessos da seção Heteranthae conforme classificação taxonômica, exceto para a espécie A. pusilla que apresentou divergências fenológicas possivelmente atribuídas a fatores ambientais locais ou a variabilidade genética intrinseca deste genótipo.

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