Orientador : Jane Megid / Resumo: O diagnóstico da raiva baseia-se na reação de Imunofluorescência direta (IFD) e Inoculação intracerebral em camundongos (IC). Atualmente vários trabalhos vem sendo realizados utilizando a reação em cadeia pela polimerase (PCR) no diagnóstico da raiva com resultados promissores. O presente trabalho pretendeu estudar a distribuição do vírus rábico utilizando a reação de PCR, em camundongos inoculados experimentalmente. Foram inoculados 150 camundongos, por via intramuscular, com vírus rábico de rua. Grupos de cinco animais foram sacrificados em diferentes tempos, sendo colhidos fragmentos de músculos dos membros posteriores e anteriores direitos e esquerdos, bexiga, rim direito e esquerdo, baço, fígado, pulmão, glândula salivar, cérebro e medula. Os materiais foram processados pelas técnicas de IFD, IC e PCR. Resultados positivos foram obtidos a partir do 5º dia pós-inoculação em medula, seguida pela detecção em cérebro, glândula salivar, membros, pulmão, fígado, baço, bexiga, língua e rim direito no 10º dia pós-inoculação utilizando as diferentes técnicas. A reação de PCR demonstrou ser eficaz para o estudo da distribuição viral. / Abstract: Rabies diagnosis is routinely based in Fluorescent Antibody Technique (FAT) and Intracerebral Mouse Inoculation Technique (MIT). Recently, the Polymerase Chain Reaction (PCR) has been evaluated as a diagnostic method with good results. The aim of this work was to evaluate rabies virus distribution in mice experimentally inoculated using the Polymerase Chain Reaction. It was realized the inoculation of 150 mice with street rabies virus using intramuscular route. Groups of 5 animals were sacrificed in different moments and several tissues and organs were collected. The materials were processed by FAT, MIT and PCR. Rabies virus was detected first at spinal cord on the 5th day post inoculation , followed by brain, salivary gland, lung, kidney, foot pad, spleen, bladder and tongue after the 10th day. The Polymerase Chain Reaction demonstrated efficacy for rabies virus distribution study. / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003Bitstream added on 2014-06-13T18:40:05Z : No. of bitstreams: 1 lima_kc_me_botfmvz.pdf: 1188419 bytes, checksum: 263365a53e5ce27a2a87870e0819f969 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O diagnóstico da raiva baseia-se na reação de Imunofluorescência direta (IFD) e Inoculação intracerebral em camundongos (IC). Atualmente vários trabalhos vem sendo realizados utilizando a reação em cadeia pela polimerase (PCR) no diagnóstico da raiva com resultados promissores. O presente trabalho pretendeu estudar a distribuição do vírus rábico utilizando a reação de PCR, em camundongos inoculados experimentalmente. Foram inoculados 150 camundongos, por via intramuscular, com vírus rábico de rua. Grupos de cinco animais foram sacrificados em diferentes tempos, sendo colhidos fragmentos de músculos dos membros posteriores e anteriores direitos e esquerdos, bexiga, rim direito e esquerdo, baço, fígado, pulmão, glândula salivar, cérebro e medula. Os materiais foram processados pelas técnicas de IFD, IC e PCR. Resultados positivos foram obtidos a partir do 5º dia pós-inoculação em medula, seguida pela detecção em cérebro, glândula salivar, membros, pulmão, fígado, baço, bexiga, língua e rim direito no 10º dia pós-inoculação utilizando as diferentes técnicas. A reação de PCR demonstrou ser eficaz para o estudo da distribuição viral. / Rabies diagnosis is routinely based in Fluorescent Antibody Technique (FAT) and Intracerebral Mouse Inoculation Technique (MIT). Recently, the Polymerase Chain Reaction (PCR) has been evaluated as a diagnostic method with good results. The aim of this work was to evaluate rabies virus distribution in mice experimentally inoculated using the Polymerase Chain Reaction. It was realized the inoculation of 150 mice with street rabies virus using intramuscular route. Groups of 5 animals were sacrificed in different moments and several tissues and organs were collected. The materials were processed by FAT, MIT and PCR. Rabies virus was detected first at spinal cord on the 5th day post inoculation , followed by brain, salivary gland, lung, kidney, foot pad, spleen, bladder and tongue after the 10th day. The Polymerase Chain Reaction demonstrated efficacy for rabies virus distribution study.

Orientador: Jane Megid / Banca: Hélio Langoni / Banca: Marcos Bryan Heinemann / Resumo: A utilização de métodos sensíveis e específicos para o diagnóstico da raiva constitui uma importante ferramenta para o controle e profilaxia dessa enfermidade. A Reação em Cadeia pela Polimerase através de Transcriptase-Reversa (RT-PCR) tem sido utilizada com bons resultados no diagnóstico do vírus rábico, mesmo quando as amostras estão em estágio de decomposição. Adicionalmente as técnicas moleculares têm sido utilizadas para estudos epidemiológicos possibilitando um melhor conhecimento da epidemiologia viral. O presente trabalho teve como objetivo avaliar as técnicas de RT-PCR e hnRT-PCR para a detecção do vírus rábico em estudos retrospectivos, para isso foram avaliadas 101 amostras cerebrais de diferentes espécies animais armazenadas por diferentes períodos, recém-descongeladas e mantidas em temperatura ambiente por 72 horas para decomposição. Os resultados das técnicas de RT-PCR e hnRT-PCR foram comparados com resultados prévios da Imunofluorescência Direta (IFD) e Inoculação Intracerebral em Camundongos (IC). Das 50 amostras positivas testadas, 26 (52%) apresentaram resultados positivos para a RT-PCR e 45 (90%) com a associação da hnRT-PCR quando realizadas em amostras recentemente descongeladas. Das amostras em decomposição foram analisadas 48 previamente positivas; onde 17 (34,3%) apresentaram resultado positivo para a RT-PCR e 36 (75%) com a associação da hnRT-PCR. Não foram encontrados resultados falso-positivos nas amostras negativas submetidas às técnicas de biologia molecular. A hnRT-PCR apresentou maior sensibilidade em relação à RT-PCR nas amostras recém-descongeladas e em decomposição. Os resultados sugerem a viabilidade de sua aplicação em estudos retrospectivos em materiais descongelados e decompostos. / Abstract: The use of methods, both sensitive and specific, for rabies diagnosis are important tools for the control and prophylaxis of the disease. Reverse-Transcriptase Polymerse Chain Reaction (RT-PCR) has been used in rabies diagnosis with good results, even in decomposed materials. Additionally, molecular techniques have been used for epidemiological studies and better knowledge of viral epidemiology. The aim of this work was to evaluate the RT-PCR and hnRT-PCR in rabies virus detection in retrospectives studies. RT-PCR and hnRT-PCR were evaluated in 151 brain samples from different animal species, thawed and left at room temperature for 72 hours for decomposition. The RT-PCR and hnRT-PCR results were compared with preview results from Fluorescent Antibody Test and Mouse Inoculation Test. From the 50 positive fresh samples, 26 (52%) were positive for RT-PCR and 45 (90%) for hnRT-PCR. From the 48 positive decomposed samples, 17 (34, 3%) were positive for RT-PCR and 36 (75%) for hnRT-PCR. No false-positives results were found in the negatives samples submitted to the molecular techniques. These results show that the hnRT-PCR was more sensitive than RT-PCR, and both techniques presented lower sensibility in decomposed samples. The hnRT-PCR presented greater sensibility than the standards techniques (IFD e IC) in decomposed materials for rabies diagnosis. These results suggest the viability of the application of molecular techniques in thawed and decomposed materials for retrospective studies. / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-06-21Bitstream added on 2014-06-13T18:59:02Z : No. of bitstreams: 1 araujo_db_me_botfmvz.pdf: 249258 bytes, checksum: 539ad5602bdd6df582591ea9174f378e (MD5) / Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (FUNDUNESP) / A utilização de métodos sensíveis e específicos para o diagnóstico da raiva constitui uma importante ferramenta para o controle e profilaxia dessa enfermidade. A Reação em Cadeia pela Polimerase através de Transcriptase-Reversa (RT-PCR) tem sido utilizada com bons resultados no diagnóstico do vírus rábico, mesmo quando as amostras estão em estágio de decomposição. Adicionalmente as técnicas moleculares têm sido utilizadas para estudos epidemiológicos possibilitando um melhor conhecimento da epidemiologia viral. O presente trabalho teve como objetivo avaliar as técnicas de RT-PCR e hnRT-PCR para a detecção do vírus rábico em estudos retrospectivos, para isso foram avaliadas 101 amostras cerebrais de diferentes espécies animais armazenadas por diferentes períodos, recém-descongeladas e mantidas em temperatura ambiente por 72 horas para decomposição. Os resultados das técnicas de RT-PCR e hnRT-PCR foram comparados com resultados prévios da Imunofluorescência Direta (IFD) e Inoculação Intracerebral em Camundongos (IC). Das 50 amostras positivas testadas, 26 (52%) apresentaram resultados positivos para a RT-PCR e 45 (90%) com a associação da hnRT-PCR quando realizadas em amostras recentemente descongeladas. Das amostras em decomposição foram analisadas 48 previamente positivas; onde 17 (34,3%) apresentaram resultado positivo para a RT-PCR e 36 (75%) com a associação da hnRT-PCR. Não foram encontrados resultados falso-positivos nas amostras negativas submetidas às técnicas de biologia molecular. A hnRT-PCR apresentou maior sensibilidade em relação à RT-PCR nas amostras recém-descongeladas e em decomposição. Os resultados sugerem a viabilidade de sua aplicação em estudos retrospectivos em materiais descongelados e decompostos. / The use of methods, both sensitive and specific, for rabies diagnosis are important tools for the control and prophylaxis of the disease. Reverse-Transcriptase Polymerse Chain Reaction (RT-PCR) has been used in rabies diagnosis with good results, even in decomposed materials. Additionally, molecular techniques have been used for epidemiological studies and better knowledge of viral epidemiology. The aim of this work was to evaluate the RT-PCR and hnRT-PCR in rabies virus detection in retrospectives studies. RT-PCR and hnRT-PCR were evaluated in 151 brain samples from different animal species, thawed and left at room temperature for 72 hours for decomposition. The RT-PCR and hnRT-PCR results were compared with preview results from Fluorescent Antibody Test and Mouse Inoculation Test. From the 50 positive fresh samples, 26 (52%) were positive for RT-PCR and 45 (90%) for hnRT-PCR. From the 48 positive decomposed samples, 17 (34, 3%) were positive for RT-PCR and 36 (75%) for hnRT-PCR. No false-positives results were found in the negatives samples submitted to the molecular techniques. These results show that the hnRT-PCR was more sensitive than RT-PCR, and both techniques presented lower sensibility in decomposed samples. The hnRT-PCR presented greater sensibility than the standards techniques (IFD e IC) in decomposed materials for rabies diagnosis. These results suggest the viability of the application of molecular techniques in thawed and decomposed materials for retrospective studies.