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Valorisation de l'huile de Galba (Calophyllum calaba L.) : isolement, caractérisation et propriétés biologiques de ses actifs / Valorization of Galba oil (Calophyllum calaba L.) : isolation, characterization and biological properties of its active part

Lesaffre, Leïla 21 July 2016 (has links)
Dans un contexte de valorisation de la biodiversité, certaines espèces oléagineuses représentent une source intéressante de métabolites actifs. C’est le cas par exemple des espèces du genre Calophyllum qui sont utilisées en médecine traditionnelle pour leurs diverses propriétés. Elles ont déjà fait l’objet de nombreuses études afin de préciser leurs caractéristiques chimiques en relation avec leurs usages traditionnels. En Guadeloupe l’espèce la plus représentée est Calophyllum calaba L. ; l’huile de ses graines est utilisée pour traiter certaines affections dermatologiques (plaies, brûlures…) et lutter contre le vieillissement cutané. Au cours de ce travail, une méthode d’extraction a été mise au point afin de concentrer les métabolites secondaires de l’huile dans une partie appelée « résine ». Une étude chimique approfondie de cette résine a été réalisée par différentes techniques séparatives, analytiques et spectroscopiques. Des fractionnements successifs par chromatographie liquide/solide sur colonne de silice ont conduit à l’isolement de 14 composés. Des études analytiques et spectroscopiques ont permis de déterminer les structures de ces molécules, essentiellement de type pyranochromanone. Parmi ces composés, 4 correspondent à de nouvelles structures identifiées et décrites pour la première fois .L’huile de Galba, ses fractions et produits purs ont ensuite été testés pour leurs activités biologiques relatives à la sphère dermatologique. Leurs propriétés anti-oxydantes ont été déterminées par différentes méthodes in vitro : ORAC, DPPH, BCBT. L’activité anti-inflammatoire a été évaluée par dosage des nitrites et du TNF-α dans une culture cellulaire de macrophages stimulés par le LPS. La mesure de la concentration minimale inhibitrice de ces extraits sur 5 souches bactériennes impliquées dans des pathologies cutanées a permis d’évaluer leur activité antimicrobienne. Leur potentiel cicatrisant a été mis en évidence sur des cultures cellulaires de fibroblastes humains et de kératinocytes HaCaT, de même que leur influence sur la mélanogénèse. Enfin, l’évaluation de la capacité de certaines fractions à inhiber l’élastase et la collagénase montre l’intérêt de l’utilisation de l’huile pour ses propriétés anti-âge. Notre étude a permis de montrer que les activités biologiques de l’huile de Galba sont principalement liées aux métabolites secondaires de la résine. De plus, des précisions ont pu être apportées sur la nature des constituants impliqués dans les différentes activités biologiques étudiées.Ces résultats constituent un appui scientifique à l’utilisation traditionnelle de l’huile de Galba et permettent d’élargir son champ d’application dans le domaine dermocosmétique. / In the context of biodiversity’s valorization, some oleaginous species are a good source of active metabolites. This is the case of Calophyllum species that are used in traditional medicine for their various properties. Many studies have been done on this botanical genus to clarify the chemical composition but also the biological activities of various parts of these plants. In Guadeloupe, Calophyllum calaba L. is the most widespread species, the oil from its seeds is used to treat certain skin problems (wounds, burns ...) and prevent skin aging.During this study, a method of extraction was developed to concentrate the secondary metabolites of the oil in a part called "resin".A thorough study of the chemical compounds of the resin was carried out by various analytical and spectroscopic techniques. Successive fractionations by liquid/solid chromatography on silica column led to the isolation of fourteen compounds. Extensive analytical and spectroscopic studies allowed to know the structures of these molecules which were essentially pyranochromanone type. Among these compounds, four of them correspond to new structures identified and described for the first time.Galba Oil, its fractions and pure products were then tested for different biological activities relative to the dermatological field. The antioxidant properties were determined by various in vitro methods: ORAC, DPPH, BCBT. The anti-inflammatory activity was assessed by determination of nitrite and TNF-α in cell culture of macrophages stimulated by LPS. The measurement of the minimal inhibitory concentration of these extracts on 5 bacterial strains involved in cutaneous pathologies allowed to know their antimicrobial activity. Their wound-healing potential has been demonstrated in cell cultures of human fibroblasts and keratinocytes HaCaT, as well as their action on melanogenesis. Finally, the ability of certain fractions to inhibit elastase and collagenase may be related to the use of this oil for its anti-aging properties.Our study has shown that most of biological activities were linked to the secondary metabolites of the resin. In addition, some clarifications were made on the nature of the constituents involved in the different biological activities which were studied.These results provide scientific support to the traditional use of Galba oil and broaden its use in the dermocosmetic area.
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Extraction, caractérisation physicochimique, profil lipidique et activité cytoprotectrice d'huiles de Chardon-Marie de Tunisie / Extraction, physicochemical characterization, lipid profile and cytoprotective activity of milk thistle seeds oil from Tunisia

Meddeb, Wiem 04 December 2018 (has links)
La famille des Astéracées est économiquement très importante, car beaucoup de ses plantessont cultivées principalement pour leurs valeurs alimentaires dont la laitue (Lactuca), lachicorée (Cichorium) et le tournesol (Heliantus annuus) cultivé pour son huile. Une despropriétés typiques de cette famille, dont fait partie le Silybum marianum, est la richesse deses huiles en divers composés naturels bénéfiques pour la santé. Actuellement et pour lesdécennies à venir, les maladies liées à l’âge constituent un problème majeur de santépublique. Prévenir leur apparition ou s'opposer à leur évolution est un objectif majeur. Dansce contexte, les activités cytoprotectrices de l'huile de graines de Silybum marianumoriginaires de différentes régions de la Tunisie ont été étudiées sur le modèled’oligodendrocytes murins 158N en utilisant le 7-cétocholestérol (7KC) comme agentcytotoxique. Le 7KC a été utilisé car il est augmenté dans le plasma, le liquide céphalorachidienet/ou certains tissus (paroi vasculaire et intestinale, rétine, cristallin, cerveau) depatients atteints de maladies liées à l’âge (maladies cardiovasculaires, maladie d'Alzheimer,dégénérescence maculaire liée à l’âge, cataracte) ou de maladies inflammatoires évolutives del’intestin. Le 24S-hydroxycholestérol (24S-OHC) a aussi été utilisé car il est augmenté dans lecerveau aux stades précoces de la maladie d’Alzheimer. Afin de déterminer la composition del'huile de Silybum marianum (acides gras, tocophérols, polyphénols, phytostérols) diversestechniques physicochimiques et de chromatographie liquide et gazeuse ont été utilisées. Lespropriétés anti-oxydantes de l'huile de Silybum marianum ont été définies par les tests KRL,FRAP et DPPH et les propriétés cytoprotectrices par des techniques complémentaires demicroscopie, de cytométrie en flux et de biochimie. Les études sur la compositionphysicochimique des huiles des graines de Silybum marianum de différentes régions de laTunisie (Bizerte, Sousse, Zaghouan) ont montré que ces dernières sont riches en Vitamine E(α-tocophérol) et sont fortement anti-oxydantes. Les acides gras majeurs sont l'acidelinoléique (C18:2) (valeurs comprises entre 57,0% et 60,3%) et l'acide oléique (C18:1) (lesvaleurs se situent entre 15,5% et 22,4%). Trois acides phénoliques ont également étéidentifiés (vanillique, p-coumarique et silybine), avec une prédominance de l'acide vanillique.Sur les cellules 158N, ces huiles atténuent la cytotoxicité du 7KC et du 24S-OHC: perted'adhérence cellulaire, altération de la membrane plasmique, dysfonctionnementmitochondrial, surproduction d’espèces réactives de l’oxygène, induction de l'apoptose(condensation et / ou fragmentation nucléaire, activation de la caspase-3 et clivage PARP) etautophagie (activation de LC3-I en LC3-II). L'atténuation des effets cytotoxiques du 7KC etdu 24S-OHC observée avec les huiles de Silybum marianum est de l'ordre de celle observéeavec l’α-tocophérol utilisé comme témoin positif. La composition chimique et les résultatsobtenus cellules 158N sont en faveur d’effets bénéfiques de l’huile de Chardon-Marie sur lasanté humaine et la prévention de certaines maladies liées à l’âge. / The family Asteraceae is economically very important because many of its plants are grownmainly for their food values including lettuce (Lactuca), chicory (Cichorium) and sunflower(Heliantus annuus) grown for its oil. One of the typical properties of this family, whichincludes Silybum marianum, is the richness of its oils in various natural compounds beneficialto health. Currently and for decades to come, age-related diseases are a major public healthproblem. Preventing their appearance or opposing their evolution is a major objective. In thiscontext, the cytoprotective activities of Silybum marianum seed oil originating from differentarea of Tunisia were studied on the 158N murine oligodendrocyte model using 7-ketocholesterol (7KC) and 24S-hydroxycholesterol (24S-OHC) as a cytotoxic agent. The 7KChas been used because it is increased in plasma, cerebrospinal fluid and / or tissues (vascularand intestinal wall, retina, lens, brain) of patients with age-related diseases (cardiovasculardiseases, Alzheimer's disease, age-related macular degeneration, cataract) or inflammatorybowel disease. The 24S-OHC was used because it is increased in the brain at the early stagesof Alzheimer’s disease. In order to determine the composition of Silybum marianum oil (fattyacids, tocopherols, polyphenols, phytosterols) various liquid and gas chromatographytechniques were used. The anti-oxidant properties of Silybum marianum oil were defined byKRL, FRAP and DPPH tests and cytoprotective properties by complementary microscopy,flow cytometry and biochemistry techniques. Studies on the physicochemical composition ofSilybum marianum seeds oils from different regions of Tunisia (Bizerte, Sousse, Zaghouan)have shown that the latter are rich in vitamin E (α-tocopherol) and are strongly antioxidant.The major fatty acids are linoleic acid (C18:2) (values between 57.0% and 60.3%) and oleicacid (C18:1) (values between 15.5% and 22.4%).. Three phenolic acids have also beenidentified (vanillic, p-coumaric and silybin), with a predominance of vanillic acid. On 158Ncells, these oils attenuate the cytotoxicity of 7KC and 24S-OHC: loss of cell adhesion,alteration of the plasma membrane, mitochondrial dysfunction, overproduction of reactiveoxygen species, induction of apoptosis (nuclear condensation and / or fragmentation). ,activation of caspase-3 and PARP cleavage) and autophagy (activation of LC3-I in LC3-II).The attenuation of cytotoxic effects of 7KC and 24S-OHC observed with Silybum marianumoils is of the order of that observed with α-tocopherol used as a positive control. The chemicalcomposition and results obtained on 158N cells are in favor of the beneficial effects of milkthistle oil on human health and on its ability to prevent some age-related diseases.

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