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Analysis of the Human Cytomegalovirus Transcriptome and Identification and Characterization of a HCMV gene involved in disruption of Interferon Signaling

Raghavan, Bindu 11 September 2008 (has links)
No description available.
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Investigation of MCMV-induced suppression of TNF production in vitro and in vivo

Martín, Sara Rodríguez January 2010 (has links)
The murine cytomegalovirus (MCMV) immediate early 1 (IE1) protein has been described as a trans-activator of viral and host gene expression. However, the precise role that IE1 plays in the viral life cycle, and in particular its effect on the host immune response is not known. This thesis investigates the functional relationship of the IE1 protein and the immune response induced after infection. By using an ie1-deletion mutant MCMV (MCMVdie1) it was demonstrated that, early after infection, tumor necrosis factor (tnf ) gene activation and protein production was significantly induced in infected-primary macrophages (M ) to a much greater extent than its wild type counterpart. In addition, preliminary studies on the signalling pathways activated upon infection were carried out in order to gain information about the pathways that might be involved in MCMVinduced modulation of tnf activation. Initial observations on the MAPK family members Erk1/2, p38 and JNK did not revealed any differential activation in the absence of IE1. However, due to a number of limitations, it was not possible to draw any firm conclusions from this study. Investigation of the role of IE1 in the in vivo production of TNF were also performed in both susceptible (BALB/c) and resistant (C57Bl/6) mice. These experiments confirmed the attenuated phenotype of MCMVdie1 in vivo, whereby the mutant strain grew to much lower titers than wild type. When cytokine production was assessed in relation to PFU levels a significant production of TNF after infection is observed in different organs of both mice strains. This raises the question whether IE1 contributes to MCMV modulation of TNF production in the natural host. Although, because it is still unclear whether the phenotype of MCMVdie1 in vivo is due to a defect in the virus or the result of a immune response, it was not possible to conclude unequivocally that IE1 is responsible for dampening this cytokine response. This thesis also tested whether the attenuated replication of MCMVdie1 in vivo was due to the increased TNF production induced after infection. An initial investigation in tnf depleted mice revealed that the MCMVdie1 growth phenotype is not due to TNF response. Overall, this study has provided insight into a potential immune modulatory function by MCMV associated with IE1 protein and the regulation of TNF in vivo and in vitro.
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Analyse transcriptionnelle des phases précoces de l'infection par le baculovirus AcMNPV et exploitation d'une banque d'ADN complémentaire issue de sa cellule-hôte, Sf9

Landais, Igor 16 December 2002 (has links) (PDF)
Le lépidoptère Spodoptera frugiperda est un ravageur important des cultures mais aussi l'organisme source de la lignée cellulaire Sf9, utilisée pour la production de protéines recombinantes dans le système d'expression baculovirus/cellule d'insecte. Dans la première partie de ce travail, nous avons étudié la transcription chez le baculovirus AcMNPV aux temps précoces de l'infection. Nous montrons tout d'abord que les régions homologues (hrs) portées par le génome de ce virus contiennent de nombreux motifs de reconnaissance pour des facteurs de transcription de type AP1/CREB, et que ces sites fixent spécifiquement des protéines de la cellule-hôte, Sf9. Par ailleurs, dans le contexte de l'infection, ces sites sont nécessaires à la transactivation médiée par le facteur viral très précoce IE1 qui se fixe lui aussi sur les hrs. Cette étude montre pour la première fois l'implication de facteurs cellulaires dans ce mécanisme de transactivation virale. La progression de ces travaux a cependant été freinée par le peu de données disponibles sur les gènes exprimés par Sf9. Pour en faciliter l'accès, nous avons donc construit une banque d'ADNc, dont l'exploitation fait l'objet de la deuxième partie de ce mémoire. Son criblage a permis d'obtenir la séquence complète de l'ADN complémentaire du gène hsp90 chez S. frugiperda, et d'en déterminer les principales caractéristiques. Par ailleurs, le séquençage à grande échelle de la banque a conduit à la constitution d'une banque d'ESTs, permettant l'identification de la quasi-totalité des gènes de protéines ribosomales. L'analyse de leur séquence a révélé l'existence de particularités qui semblent restreintes aux insectes et aux lépidoptères, un résultat inattendu compte tenu de la grande conservation de ces gènes entre espèces.

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