Submitted by Leonardo Freitas (leonardo.hfreitas@ufpe.br) on 2015-04-09T18:28:06Z No. of bitstreams: 2 TESE MARÍLIA MACIEL.pdf: 3027098 bytes, checksum: 3d287d151c61c2f6ac29afba9e6589a1 (MD5) license_rdf: 9 bytes, checksum: 42dd12a06de379d3ffa39b67dc9c7aff (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-09T18:28:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE MARÍLIA MACIEL.pdf: 3027098 bytes, checksum: 3d287d151c61c2f6ac29afba9e6589a1 (MD5) license_rdf: 9 bytes, checksum: 42dd12a06de379d3ffa39b67dc9c7aff (MD5) Previous issue date: 2013-02-27 / CNPq; EM / As espécies de Aspergillus pertencentes à seção Nigri são caracterizadas pela cor negra da maioria das colônias. A identificação destas espécies é complexa devido à alta diversidade genética. As características morfológicas, fisiológicas, bioquímicas, moleculares e espectrais são ferramentas que podem ser utilizadas na identificação polifásica. Aspergillus niger é a espécie da seção Nigri mais utilizada na indústria. Dentre as enzimas produzidas por este fungo podemos citar as poligalacturonases (PG), que possuem aplicação tecnológica no processamento de alimentos e frutas. Neste trabalho, linhagens de Aspergillus seção Nigri foram avaliadas por uma abordagem polifásica baseada na análise morfológica, bioquímica e espectral por Ionização/Dessorção de Matriz Assistida por Laser Tempo-de-Vôo/Espectrômetro de Massa (MALDI-TOF MS) para sua identificação e caracterização. Os dados obtidos a partir dessa abordagem indicaram que os resultados do MALDI-TOF MS corroboraram os dados da taxonomia clássica e análises bioquímicas. Cerca de 20% e 14% das linhagens de A. niger foram produtoras de ocratoxina A (OTA) e fumonisina B2 (FB2), respectivamente. As linhagens não micotoxigênicas foram avaliadas quanto à capacidade de produzir PG, sendo A. niger URM 5162 que apresentou maiores valores de atividade quando imobilizada em casca de laranja e com o reator operado sem aeração. Após a produção, as PG foram purificadas pelo sistema de duas fases aquosas (SDFA) formado por polietilenoglicol e sais de fosfato (PEG/fosfato). A endopoligalacturonase (endo-PG) e a exo-poligalacturonase (exo-PG) tiveram preferência pela fase superior do sistema (rica em PEG). Para as duas enzimas, os melhores resultados para o coeficiente de partição (K=1,23 para endo-PG e 2,40 para exo-PG), rendimento em atividade (Y=74,04% para endo-PG e 33,33% para exo-PG) e fator de purificação (FP=8,18 para endo-PG e 1,98 para exo-PG), foram obtidos com 12,5% (m/m) de PEG 8000 (g/mol) e concentração de fosfato de 25% (m/m) a pH 6,0, sendo esta a condição considerada como a mais adequada para a purificação das PG produzidas por A. niger URM 5162. A concentração de fosfato e a massa molar do PEG foram as variáveis independentes que mais influenciaram nos valores de K, Y e FP durante a purificação da endo- e exo-poligalacturonase, respectivamente. Diante dos resultados obtidos, observa-se que a utilização de uma abordagem polifásica consistindo de análise morfológica, bioquímica e proteômica, permite uma identificação mais precisa das espécies da seção Nigri. Aspergillus niger URM 5162 é a linhagem promissora para produção de PG, sendo o SDFA uma alternativa interessante e de baixo custo para a purificação destas enzimas.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-05-11T14:03:23Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertacao Final.pdf: 3056948 bytes, checksum: c1f1bdb2193095261e3561f1c0508bd9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-11T14:03:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertacao Final.pdf: 3056948 bytes, checksum: c1f1bdb2193095261e3561f1c0508bd9 (MD5) Previous issue date: 2015-02-20 / CNPq / Piedra branca é uma infecção de etiologia fúngica caracterizada pela formação de nódulos restritos a porção extrafolicular dos pelos e cabelos, sendo ocasionada por leveduras do gênero Trichosporon. O diagnóstico é clínico e laboratorial micológico, sendo concluído com a identificação precisa do agente etiológico. Esta pesquisa teve como objetivo elaborar um modelo de infecção in vitro da piedra branca, analisar os aspectos morfológicos e ultraestruturais dos nódulos e seus agentes, e autenticar taxonomicamente os isolados por meio de uma abordagem de identificação polifásica. A infecção dos cabelos foi induzida utilizando 18 isolados do gênero Trichosporon, mantidos na Coleção de Culturas Micoteca URM. Para confirmação taxonômica dos isolados, foi adotada métodos empregados na taxonomia clássica, Espectroscopia de Massa (MALDI-TOF MS) e sequenciamento das regiões ITS (ITS1–5.8s-ITS2), IGS1 (Intergenic spacer) e domínios D1/D2 do rDNA. Foi verificado que 15 (83,33%) dos isolados de levedura foram identificados por meio da Espectrometria de Massa MALDI-TOF MS. Os métodos moleculares foram considerados os mais precisos, possibilitando a identificação dos isolados de levedura como: T. asahii (8), T. faecale (3), T. montevideense (5), T. mycotoxinivorans (1) e Hyphopichia burtonii (1). Os nódulos típicos foram formados por 12 isolados, seis formaram nódulo atípico (Quatro de T. asahii e dois de T. montevideense) e dois não formaram nódulo (um de T. montevideense e um de T. faecale). Os constituintes químicos detectados nos nódulos foram carbono, oxigênio, sódio, cálcio, manganês e magnésio. A consistência friável dos nódulos está relacionada com as baixas concentrações de cálcio e enxofre, conferindo a facilidade de rompimento do nódulo. Neste modelo, foi verificado que temperaturas elevadas e umidade excessiva não estão relacionadas com o desenvolvimento desta tricopatia. / White piedra is a fungal infection caused by Trichosporon species. The clinical condition of this mycosis is the production of white nodules adhered to the hair shaft. The diagnosis take in account the clinical feature and mycological laboratory results, which is finalized with the precise etiologic agent identification. This research aimed to develop an in vitro infection model of white piedra, analyzing the morphological and ultrastructural aspects of nodules and aetiological agents, and to identify the isolates by a polyphase approach. The infection of the hair was induced using 18 isolates of the genus Trichosporon, from the Culture Collection Micoteca URM. To taxonomic confirmation of the Trichosporon isolates, were adopted methods used in the classical taxonomy, Mass Spectroscopy (MALDI-TOF MS) and sequencing of the ITS (ITS1-5.8s-ITS2), IGS1 (Intergenic spacer) and D1/D2 domains of rDNA regions. A total of 15 (83.33%) yeast isolates were identified by mass spectrometry MALDI-TOF MS. Molecular tols were considered more accurate, allowing the identification of all yeast isolates as: T. asahii (8), T. faecale (3), T. montevideense (5), T. mycotoxinivorans (1) and Hyphopichia burtonii (1). Typical nodules were formed by 12 isolates, 6 isolates formed atypical nodules (T. asahii (4) and T. montevideense (2)) and 2 isolates did not formed nodules (T. montevideense (1) and T. faecale (1)). The chemical constituents detected in the nodules were carbon, oxygen, sodium, calcium, manganese and magnesium. The softh consistency of the nodules is associated with the low concentrations of calcium and sulfur, that providing ease disruption of the nodule. In this in vitro infection model, it was observed that the temperatures and humidity were not related to the development of this tricopatia.