Submitted by Liliane Ferreira (ljuvencia30@gmail.com) on 2018-07-12T13:37:44Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rayanny Gomes de Andrade - 2018.pdf: 3411156 bytes, checksum: cfec02b05834f880d1758da75f7a6436 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-07-13T10:34:52Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rayanny Gomes de Andrade - 2018.pdf: 3411156 bytes, checksum: cfec02b05834f880d1758da75f7a6436 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-13T10:34:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rayanny Gomes de Andrade - 2018.pdf: 3411156 bytes, checksum: cfec02b05834f880d1758da75f7a6436 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-06-12 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Mycobacterium tuberculosis is the etiological agent of tuberculosis (TB), which is responsible in 2015 for 10.4 million new cases and 1.8 million casualties registered worldwide. To be able to avoid the defense barriers of the host, the bacteria evolved mechanisms to modulate or change the environment it is in, thereby, the secretion of bioactive molecules is an efficient strategy to do so. Among the bioactive molecules produced by M. tuberculosis, proteases have a crucial role to a successful infection, as they are involved in several important biological processes of the bacteria, such as DNA replication, cell proliferation and antigen processing. Thus, proteases are good targets for the development of new anti-TB drugs or as possible vaccine antigens. This work aimed to clone and express the gene Rv2467, a putative protease with aminopeptidase activity from M. tuberculosis. To achieve this goal, oligonucleotides design were made to amplify the gene Rv2467 by Polimerase Chain Reaction (PCR), which was cloned in the pGEM-T easy vector. The clone Rv2467 gene was then transfere to the expression vector pET-28a. The recombinant protein was expressed from the recombinant plasmid pET-28a/Rv2467 in Escherichia coli BL21 (DE3) pLysS through induction with IPTG. The recombinant protein, with the expected size of 94KDa, was expressed and subjected to the purification process by nickel affinity chromatography. The recombinant protein was partially purified only in its denatured form. The low yield of purified recombinant protein raised the possibility of histidine tail loss. To verify that, Western Blotting with anti-histidine antibody was made and it was verified that the antibody did not recognize the target Rv2467 protein, which made it impossible to acquire the pure protein, not allowing further characterization tests. Additionally, a literature review was performed about Mycobacterium tuberculosis proteases that are involved in virulence mechanisms to make a manuscript to be submitted to a scientific journal / Mycobacterium tuberculosis é o agente etiológico da tuberculose (TB), que provocou em 2015, 10,4 milhões de novos casos e 1,8 milhões de mortes registrados mundialmente. Para conseguir evadir as barreiras de defesa do hospedeiro, a bactéria evoluiu criando mecanismos que modulam ou modificam o ambiente no qual ela está inserida, sendo a secreção de moléculas bioativas uma estratégia eficiente para isso. Dentre as moléculas bioativas produzidas por M. tuberculosis, as proteases desempenham papel crucial para o sucesso da infecção, pois estão envolvidas em diversos processos biológicos importantes para a bactéria, tais como replicação do DNA, proliferação celular, processamento de antígeno, entre outros. Deste modo, as proteases se apresentam como alvo para novas drogas anti-TB ou como possíveis antígenos vacinais. Com isso, o foco deste trabalho foi clonar e expressar o produto do gene Rv2467, uma suposta protease com atividade aminopeptidase de M. tuberculosis. Para tanto foi realizado o desenho dos oligonucleotídeos iniciadores para amplificar o gene Rv2467 por Reação da Polimerase em Cadeia (PCR) que foi clonado no vetor pGEM-T easy. O inserto correspondendo ao gene Rv2467 foi retirado do vetor de clonagem e inserido no vetor de expressão pET-28a. A proteína recombinante foi expressa a partir do plasmídeo recombinante pET-28a/Rv2467 em Escherichia coli BL21 (DE3) pLysS através de indução com IPTG. A proteína recombinante, apresentando o tamanho esperado de 94 KDa, foi expressa e submetida ao processo de purificação por cromatografia de afinidade ao níquel. A purificação parcial da proteína recombinante somente foi possível de forma desnaturada, sendo que as tentativas de obtê-la de forma nativa para testar atividade resultaram improdutivas. O baixo rendimento de purificação da proteína recombinante levou a suspeitar da possível perda da cauda de histidina e, para tanto, realizou-se um Western Blotting com anticorpo anti-histidina. Ao ver a revelação na membrana verificou-se que o anticorpo não reconheceu a proteína Rv2467 o que impossibilitou obter a proteína pura não podendo seguir para futuros testes de caracterização. Além de testes para obter a proteína em sua forma nativa foi escrito um manuscrito científico de revisão da literatura sobre proteases de Mycobacterium tuberculosis envolvidas no mecanismo de virulência.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2016-12-16T09:36:11Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thais Yoshida - 2016.pdf: 2049015 bytes, checksum: 4c0db77258728ea13cbc289c1d269fc0 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2016-12-16T13:53:27Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thais Yoshida - 2016.pdf: 2049015 bytes, checksum: 4c0db77258728ea13cbc289c1d269fc0 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-16T13:53:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thais Yoshida - 2016.pdf: 2049015 bytes, checksum: 4c0db77258728ea13cbc289c1d269fc0 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-04-15 / INTRODUCTION: Primary bloodstream infections related to central venous access(CVA) are among the most frequent infections related to the health assistance and are associated to a longer hospitalization time, high mortality risk and higher costs to health services. Preventive measurements as bundles can reduce the recurring cases of hospitalization and other complications. OBJECTIVES: To analyze the use of a prevention bundle on primary laboratory bloodstream infection related to central venous access on Intensive Care Units in a public hospital in Goiás, from 2012 to 2015. METHODOLOGY: Retrospective study performed on adult and kids intensive care units(ICU) through the analyses of secondary data of the physical and electronic data archives from the Medical Infection Control Service. The following tests were used: Shapiro-Wilk test to check the normal quantitative variables; test of U-Mann-Whitney and Fisher to compare the median differences and proportions of the ICU’s. Two models were used to achieve the objectives. To evaluate the effect of the bundle implementation two periods were compared, these periods were determined as pre intervention period ( prior to bundle implementation) and post intervention. In the adult ICU the pre intervention period corresponds from January 2012 until October 2014 and at the kids ICU, from January 2012 to August 2014. The post intervention phase corresponded of data between November 2014 to December 2015 on the adult’s ICU and from September 2014 to December 2015 on the kids ICU. To evaluate the bundle process indicators, two periods were taken in comparison (2014 and 2015), 2014 being the year that the bundle was implemented. Indicators and variables found on the pre and post intervention period were compared using the regression models of Poisson. <0,05 p rates were considered statistically significant. Confidence intervals of 95% were calculated to the indicators. The analyses were performed on the STATA software, 12.0 version and the graphics were built on the Graph Pad Prism software, 6.07 version. The project was approved by the Ethic Committee, 011/2012 protocol number. RESULTS: A non significant reduction on the IPCSL/CVC in adults ICU’s (RR:0,75; IC 95%: 0,15-3,60; p = 0,723), even though there was high bundle use on the post intervention period. On the other hand, there was a non significant increase on the kids ICU’s(RR: 1,17; IC 95%: 0,26-5,27; p = 0,834). Low bundle total conformity on the kids ICU’’s . Insertion and removal of the catheter were the two least adhered methods adopted on both ICU’s. CONCLUSION: This study did not find significant reduction on the IPCSL/CVC density after bundle implementation, which suggests the need of reviewing the use process, just as the need of continuous professional training to apply bundle and ways to measure the use of the processes with the assistance team. / INTRODUÇÃO: As Infecções Primárias da Corrente Sanguínea associadas ao Cateter Venoso Central (IPCSL/CVC) estão entre as Infecções Relacionadas à Assistência à Saúde frequentes e associadas a maior tempo de internação, elevada morbimortalidade e custos para serviços de saúde. Medidas de prevenção como a adoção de bundles podem diminuir a sua incidência. OBJETIVO: Analisar a utilização de bundle de prevenção de Infecção Primária de Corrente Sanguínea Laboratorial relacionada a Cateter Venoso Central em Unidades de Terapia Intensiva de um hospital público de Goiás, durante o período de 2012 a 2015. METODOLOGIA: Estudo de coorte retrospectivo realizado em unidades de terapia intensiva (UTI) adulto e pediátrica, por meio de análise de dados secundários dos arquivos físicos e eletrônicos do Serviço de Controle de Infecção Hospitalar. Foram utilizados os seguintes testes: Teste Shapiro-Wilk para verificar a normalidade das variáveis quantitativas; testes de U-Mann-Whitney ou exato de Fisher para comparar as diferenças nas medianas e proporções das variáveis entre as UTI, respectivamente. Para avaliar o efeito da implementação do bundle foram comparados dois períodos, denominados pré-intervenção (anterior à aplicação do bundle) em pós-intervenção. Na UTI adulto o período de pré-intervenção correspondeu aos meses de janeiro de 2012 a outubro de 2014 e na UTI pediátrica, de janeiro de 2012 a agosto de 2014. A fase de pós-intervenção correspondeu ao período de novembro de 2014 a dezembro de 2015 na UTI adulto e de setembro de 2014 a dezembro de 2015 na UTI pediátrica. Para avaliar os indicadores de processo do bundle foram comparados os anos de 2014 e 2015, sendo 2014 o ano da implantação da bundle. Variáveis e indicadores encontrados nos períodos de pré e pós-intervenção do bundle foram comparados usando modelos de regressão de Poisson. Valores de p < 0,05 foram considerados estatisticamente significantes. Foram calculados intervalos de confiança de 95% para os indicadores. Análises foram realizadas no STATA software, versão 12.0 e gráficos construídos no Graph Pad Prism software, versão 6.07. RESULTADOS: Verificou-se uma redução não-significativa na incidência de IPCSL/CVC na UTI adulto (RR: 0,75; IC 95%: 0,15-3,60; p = 0,723), apesar da alta taxa de aplicação do bundle no período pós-intervenção. Por outro lado, houve aumento não significativo na densidade de incidência na UTI pediátrica (RR: 1,17; IC 95%: 0,26-5,27; p = 0,834). Observou-se baixa conformidade total dos bundles na UTI pediátrica. Inserção e retirada do cateter foram as etapas com menor adesão nas UTI. CONCLUSÃO: Este estudo não encontrou redução significativa na densidade de IPCSL/CVC após implantação do bundle, sugerindo a necessidade de revisão do processo de utilização, assim como capacitação contínua para a aplicação do bundle e mensuração da adesão com discussão dos indicadores do processo junto à equipe assistencial.