Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Grapevines are one of the most cultivated fruits in the world, and many factors can affect its potential income and longevity, including pathogens attack. In 1990, black foot disease of grapevine began to worry producers and agronomists in various places of the planet where the crop was grown. Since 1999, plants with disease symptoms have been observed in Brazil. However, little is known about this disease in the southern region of the country. Thus, this study aimed to: 1) characterize isolates of the Ilyonectria spp. and Campylocarpon pseudofasciculare associated with black foot disease and study their pathogenicity; 2) evaluate Bacillus subtilis and Trichoderma spp. on the control in vitro and in vivo of Ilyonectria macrodidyma. For that, symptomatic plants were collected in georeferenced vineyards of Rio Grande do Sul. Isolation of the pathogen occurred from necrotic fragments of roots and crown for further study of the etiology and pathogenicity. In vitro tests (volatile metabolites and pairing of cultures) and in vivo (Vitis vinifera cv. Merlot grafted on Paulsen 1103) were performed to evaluate the control efficiency of Bacillus subtilis and Trichoderma spp., obtained from different commercial products, over Ilyonectria macrodidyma. Morphological characterization and multi-gene analysis of three regions (ITS, β-tubulin and histone H3) confirmed the existence of Ilyonectria macrodidyma, Ilyonectria robusta, "Cylindrocarpon" pauciseptatum and Campylocarpon pseudofasciculare associated with black foot disease. All 20 isolates were pathogenic to Vitis labrusca cv. Bordô, resulting in reduced mass of roots and shoots, roots and crown necrosis, vascular lesions, wilting of shoots and plant death. Bacillus subtilis and Trichoderma spp. were effective in inhibiting the mycelial growth of I. macrodidyma through volatile metabolites and pairing of culture tests. / A videira é uma das principais frutíferas cultivadas no mundo, sendo que diversos fatores podem afetar seu potencial de rendimento e longevidade, incluindo o ataque de patógenos. A partir da década de 90, a doença pé-preto da videira começou a preocupar viticultores e técnicos em várias locais do planeta onde a cultura é cultivada. Desde 1999, vem sendo observadas plantas com sintomas da doença no Brasil. Porém, pouco se conhece sobre essa enfermidade na região sul do país. Assim, este trabalho objetivou: 1) caracterizar isolados de Ilyonectria spp. e Campylocarpon pseudofasciculare associados à doença pé-preto, bem como estudar sua patogenicidade e 2) avaliar Bacillus subtilis e Trichoderma spp. no controle in vitro e in vivo de Ilyonectria macrodidyma. Para isso, plantas sintomáticas foram coletadas em vinhedos georreferenciados do Rio Grande do Sul. Isolamento do patógeno se deu a partir de fragmentos necrosados de raízes e colo para posteriores estudos de etiologia e patogenicidade. Foram realizados testes in vitro (metabólitos voláteis e pareamento de culturas) e in vivo (Vitis vinifera cv. Merlot enxertada em Paulsen 1103) para avaliar a eficiência de Bacillus subtilis e Trichoderma spp., obtidos de diferentes produtos comerciais no controle de Ilyonectria macrodidyma. O estudo de caracterização morfológica e análise multi-gene de três regiões (ITS, β-tubulina e histona H3) confirmaram a existência de Ilyonectria macrodidyma, Ilyonectria robusta, Cylindrocarpon pauciseptatum e Campylocarpon pseudofasciculare associados à doença pé-preto. Todos os 20 isolados foram patogênicos a Vitis labrusca cv. Bordô, resultando em redução de massa de raízes e parte aérea, necrose no colo e raízes, lesões vasculares, murchamento de parte aérea e morte de plantas. Bacillus subtilis e Trichoderma spp. foram eficazes na inibição do crescimento micelial de I. macrodidyma através de testes de metabólitos voláteis e pareamento de culturas.

Las enfermedades de la madera se encuentran entre las patologías más dañinas que afectan al cultivo de la vid. El pie negro es una de las más destacadas, afectando a las plantas en vivero y en plantaciones jóvenes. Los agentes causales están incluidos dentro de los géneros Campylocarpon, ¿Cylindrocarpon¿, Cylindrocladiella e Ilyonectria. Éstos se caracterizan por ser habitantes del suelo y, se ha demostrado que permanecen en él, infectando al material de propagación cultivado en campos de vivero. La presencia de hongos asociados al pie negro en vivero, así como sus fuentes potenciales de inóculo en suelos de vivero y de viñedos comerciales, no han sido nunca estudiados en España. En este sentido, el objetivo de esta Tesis ha sido estudiar la epidemiología de hongos que causan el pie negro de la vid en España. En primer lugar, las distintas fases del proceso viverístico se evaluaron como fuentes potenciales de inóculo de estos patógenos. Se tomaron muestras en cuatro fases del proceso de propagación de las que se extrajo el ADN, detectándose las especies causantes del pie negro de la vid mediante multiplex, nested PCR. En las fases estudiadas se detectaron I. liriodendri y el complejo I. macrodidyma. También se estudió la detección de especies de Ilyonectria en material de propagación de vid, antes y después de la fase de enraizamiento en campos de vivero, mediante técnicas de aislamiento y multiplex, nested PCR. Este estudio confirmó que el número de plantas infectadas con estos patógenos aumenta durante el proceso de enraizamiento en campos de vivero. Ilyonectria torresensis fue la única especie aislada de las plantas tras la inducción del callo. Sin embargo, las especies I. liriodendri, I. novozelandica e I. torresensis se aislaron frecuentemente tras el período de cultivo en campos de vivero. Respecto a la detección molecular, se detectaron un número elevado de muestras positivas en planta tras la inducción del callo y después del proceso de enraizamiento. Mediante el uso de cuatro técnicas diferentes, aislamiento fúngico a partir de raíces de plántulas de vid utilizadas como plantas trampa, aislamiento a partir de raíces de malas hierbas, multiplex, nested PCR y qPCR, se estudió el suelo de campos de plantas madre como fuente de inóculo de estos patógenos. De las raíces de plantas trampa se aislaron las especies I. alcacerensis, I. macrodidyma, I. novozelandica e I. torresensis. ¿Cylindrocarpon¿ macrodidymum fue la única especie aislada de las raíces de malas hierbas. En los análisis de suelos realizados mediante multiplex, nested PCR así como mediante qPCR se observó un elevado porcentaje de detección del complejo I. macrodidyma en muestras de ADN de suelo, mientras que el porcentaje de detección de I. liriodendri fue menor. Las mismas técnicas descritas para campos de plantas madre se utilizaron para estudiar los suelos de campos de vivero y de viñedos comerciales. Los resultados obtenidos en estos dos tipos de campos fueron similares a los obtenidos en campos de plantas madre. Finalmente, se estudió el efecto de la temperatura, pH y potencial osmótico (¿s) sobre el crecimiento miceliar, la esporulación y la producción de clamidosporas de ¿C.¿ liriodendri, ¿C.¿ macrodidymum y ¿C.¿ pauciseptatum, con el objetivo de mejorar el conocimiento de los factores que afectan al crecimiento, reproducción y supervivencia de estos patógenos. Todos los aislados estudiados crecieron en un rango de temperaturas comprendido entre 5 y 30ºC. Se observó crecimiento miceliar en un rango de pH comprendido entre 4 y 8. Respecto al efecto del ¿s, el crecimiento miceliar fue mejor en medio de cultivo PDA ajustado a -0,5, -1,0 y/o -2,0 MPa en comparación con el crecimiento miceliar observado en PDA sin ajustar a ningún ¿s (-0,3 MPA). La mayoría de los aislados de ¿Cylindrocarpon¿ esporularon a todas las temperaturas, pHs y valores de ¿s estudiados. En general, la producción de clamidosporas no se vio afectada por la temperatura, el pH y el ¿s. / Agustí Brisach, C. (2013). Studies on the epidemiology of black-foot disease of grapevine in Spain [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/27598 / TESIS