Yau Wing Yiu, Winifred. / On t.p. "alpha"s appear as the Greek letter. / Thesis submitted in: October 2006. / Thesis (M.Phil.)--Chinese University of Hong Kong, 2007. / Includes bibliographical references (leaves 91-98). / Abstracts in English and Chinese. / Abstract --- p.i / Abstract (Chinese version) --- p.iv / Acknowledgements --- p.vi / Table of Contents --- p.vii / List of Abbreviations --- p.xii / List of Figures --- p.xiv / List of Tables --- p.xvi / Chapter Chapter 1 --- Introduction --- p.1 / Chapter 1.1 --- Peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) --- p.1 / Chapter 1.1.1 --- What are PPARs? --- p.1 / Chapter 1.1.2 --- PPAR ligands - peroxisome proliferators --- p.1 / Chapter 1.1.3 --- PPAR isoforms --- p.2 / Chapter 1.2 --- Biological roles of PPARα --- p.3 / Chapter 1.2.1 --- Lipid metabolism --- p.3 / Chapter 1.2.2 --- Glucose metabolism --- p.4 / Chapter 1.2.3 --- Inflammation --- p.5 / Chapter 1.2.4 --- Oxidative stress --- p.5 / Chapter 1.2.5 --- Cell proliferation and apoptosis --- p.6 / Chapter 1.3 --- PPARα in health and diseases --- p.6 / Chapter 1.3.1 --- Wound-healing --- p.6 / Chapter 1.3.2 --- Anti-atherogenesis --- p.7 / Chapter 1.3.3 --- Neuroprotection --- p.7 / Chapter 1.3.4 --- Carcineogenesis --- p.7 / Chapter 1.4 --- PPARα-regulated and starvation inducible gene (PPSIG) --- p.8 / Chapter 1.4.1 --- PPSIG is a PPARα target gene --- p.8 / Chapter 1.4.2 --- Computer-assisted predictions on PPSIG --- p.9 / Chapter 1.4.3 --- Current characterization of PPSIG --- p.10 / Chapter 1.5 --- Objectives of the present study --- p.11 / Chapter Chapter 2 --- Materials and Methods --- p.12 / Chapter 2.1 --- Materials --- p.12 / Chapter 2.2 --- Animals and treatment --- p.13 / Chapter 2.3 --- Cloning of PPSIG into pThioHis and pTYB expression vectors --- p.13 / Chapter 2.3.1 --- PCR amplification of PPSIG cDNA insert --- p.13 / Chapter 2.3.1.1 --- PPSIG cDNA insert for pThioHis vector --- p.13 / Chapter 2.3.1.2 --- PPSIG cDNA insert for pTYB vector --- p.15 / Chapter 2.3.2 --- Restriction enzyme digestion of PPSIG cDNA insert and pThioHis vector --- p.18 / Chapter 2.3.3 --- Restriction enzyme digestion of PPSIG cDNA insert and pTYB vector --- p.20 / Chapter 2.3.4 --- Ligation and transformation --- p.20 / Chapter 2.3.5 --- Screening for recombinants by phenol/chloroform method --- p.21 / Chapter 2.3.6 --- Confirmation of recombinant plasmid by restriction enzyme digestion --- p.22 / Chapter 2.3.6.1 --- Digestion of pThioHis-PPSIG plasmid with Xba I and Sac II --- p.22 / Chapter 2.3.6.2 --- Digestion of pTYB-PPSIG plasmid with EcoR V --- p.22 / Chapter 2.3.7 --- Transformation into expression E. coli strains --- p.23 / Chapter 2.4 --- Over expression of PPSIG proteins in E. coli --- p.23 / Chapter 2.5 --- Semi-purification of PPSIG fusion proteins by preparative SDS-PAGE --- p.24 / Chapter 2.6 --- Rabbit immunization --- p.25 / Chapter 2.7 --- Northern blotting analysis --- p.26 / Chapter 2.7.1 --- Probe preparation --- p.26 / Chapter 2.7.2 --- "Formaldehyde-agarose gel electrophoresis, blotting of RNA and hybridization" --- p.26 / Chapter 2.8 --- Subcellular fractionation --- p.29 / Chapter 2.9 --- Western blotting of liver microsomes --- p.31 / Chapter 2.10 --- Immunoprecipitation --- p.32 / Chapter 2.11 --- Mass spectrometry --- p.33 / Chapter 2.11.1 --- Trypsin digestion and peptide extraction --- p.33 / Chapter 2.11.2 --- Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight (MALDI-TOF) mass spectrometry --- p.34 / Chapter Chapter 3 --- Results --- p.36 / Chapter 3.1 --- Cloning of PPSIG into pThioHis and pTYB vectors --- p.36 / Chapter 3.1.1 --- Cloning of PPSIG into pThioHis vector --- p.36 / Chapter 3.1.2 --- Cloning of PPSIG into pTYB vector --- p.36 / Chapter 3.2 --- Protein expression of Thio-PPSIG and Intein-PPSIG --- p.41 / Chapter 3.3 --- Identification of recombinant Thio-PPSIG and Intein-PPSIG by mass spectrometry --- p.49 / Chapter 3.4 --- Preparation and characterization of Thio-PPSIG and Intein-PPSIG antisera --- p.61 / Chapter 3.5 --- Identification of native PPSIG and its induction pattern --- p.65 / Chapter 3.5.1 --- PPSIG was highly inducible upon 72-h starvation in a PPARα dependent manner --- p.65 / Chapter 3.5.2 --- "PPSIG showed slight induction upon 2-wk Wy-14,643 treatment" --- p.71 / Chapter 3.6 --- Confirmation of the specificity of PPSIG antiserum --- p.74 / Chapter Chapter 4 --- Discussion --- p.81 / References --- p.91 / Appendix A Deduced amino acid sequences of PPSIG fusion proteins --- p.99 / Chapter A1 --- Deduced amino acid sequence of Thio-PPSIG from pThioHis-PPSIG plasmid --- p.99 / Chapter A2 --- Deduced amino acid sequence of Intein-PPSIG from pTYB-PPSIG plasmid --- p.101 / Appendix B Mass spectra of trypsin digested native PPSIG --- p.104 / Chapter B1 --- Mass spectrum of trypsin digested native PPSIG immunoprecipitated from liver microsomes from PPARα wild-type mice fed with normal diet (starvation experiment) --- p.104 / Chapter B2 --- Mass spectrum of trypsin digested native PPSIG immunoprecipitated from liver microsomes from PPARα wild-type mice starved for 72 hours (starvation experiment) --- p.105 / Chapter B3 --- "Mass spectrum of trypsin digested native PPSIG immunoprecipitated from liver microsomes from PPARα wild-type mice fed with control diet (Wy-14,643 feeding experiment)" --- p.106 / Chapter B4 --- "Mass spectrum of trypsin digested native PPSIG immunoprecipitated from liver microsomes from PPARα wild-type mice fed with 0.1% (w/w) Wy-14,643 for 2 weeks (Wy-14,643 feeding experiment)" --- p.107

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:28:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T13:56:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:25:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:03:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 06046.pdf: 3970338 bytes, checksum: 788afd1d8690f2f3f60fc44aeaac9f41 (MD5) / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Submitted by Claudinei Pracidelli (cpracide@ipen.br) on 2015-05-20T17:41:51Z No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2015-05-20T17:41:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Tese (Doutorado em Tecnologia Nuclear) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Submitted by Claudinei Pracidelli (cpracide@ipen.br) on 2016-02-03T11:52:39Z No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2016-02-03T11:52:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Submitted by Claudinei Pracidelli (cpracide@ipen.br) on 2016-04-08T13:26:34Z No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2016-04-08T13:26:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:28:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T13:56:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / No presente estudo valores de referência para Br (0,0008 - 0,0056 gL-1), Ca (0,089 - 0,369 gL-1), Cl (2,10 - 3,26 gL-1), Fe (0,381 - 0,689 gL-1), I (0,00018 - 0,00266 gL-1), K (1,14 - 2,74 gL-1), Mg (0,030 - 0,074 gL-1), Na (1,36 - 2,80 gL-1), P (<1,99 gL-1), S (0,99 - 2,79 gL-1) e Zn (0,0012 - 0,0048 gL-1) bem como a matriz de correlação em sangue de eqüinos da Raça Crioula foram determinados utilizando metodologia nuclear (técnica de Análise por Ativação com Nêutrons). Estes dados permitiram identificar alterações fisiológicas relacionadas ao gênero e regime de exercício em que se enquadram estes animais (produção de soros hiperimunes no Instituto Butantan, São Paulo, Brasil). Para realização dessas análises foram utilizados 20 cavalos adultos (8 machos e 12 fêmeas) sadios, na faixa etária de 1 a 3 anos e peso médio de 350 kg, mantidos na Fazenda São Joaquim do Instituto Butantan (São Paulo). Outro grupo recém imunizados, composto por 6 cavalos machos (mesmo peso e idade) foram também analisados. Estes dados auxiliaram na interpretação das funções fisiológicas desses elementos no sangue destes animais durante o processo de imunização para produção de soros. / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:25:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:03:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 06046.pdf: 3970338 bytes, checksum: 788afd1d8690f2f3f60fc44aeaac9f41 (MD5) / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:27:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:06:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Os acidentes ofídicos representam um sério problema de Saúde Pública, principalmente em países subtropicais. No Brasil, segundo o Ministério da Saúde, foram notificados cerca de 26 000 acidentes em 2008. O gênero Crotalus (cascavéis) é responsável por aproximadamente 7% do total, porém apresenta um alto índice de letalidade, sendo que 72% dos casos de acidentados sem o tratamento adequado com soro específico (soro anticrotálico) chegam ao óbito. A produção de soro no Brasil, único tratamento eficaz nos casos de acidentes ofídicos, utiliza equinos que, apesar do grande porte, apresentam diminuição da longevidade quando comparado com os cavalos não imunizados. A radiação ionizante tem se mostrado como excelente ferramenta na diminuição da toxicidade de venenos e toxinas isoladas e tem resultado na obtenção de melhores imunógenos para a produção de soro, além de contribuir para o bem estar dos animais soro-produtores. Visto que a ação da radiação gama em toxinas ainda não está totalmente esclarecida do ponto de vista estrutural, foi proposto neste trabalho, a caracterização de duas proteínas da espécie Crotalus durissus terrificus: a crotoxina e a crotamina. Após o isolamento das toxinas de interesse por técnicas cromatográficas, estas foram submetidas às análises estruturais com a aplicação das seguintes metodologias: Fluorescência, Dicroísmo Circular, Calorimetria Diferencial e Espectroscopia Infravermelho. Estas análises mostraram que tanto a crotamina como a crotoxina, quando submetidas à radiação gama, apresentaram alterações na conformação estrutural em comparação com as amostras no estado nativo. Tais alterações possivelmente ocorrem na estrutura terciária e secundária das proteínas e podem explicar as modificações quanto à atividade biológica destas toxinas. / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Submitted by Claudinei Pracidelli (cpracide@ipen.br) on 2015-05-20T17:41:51Z No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2015-05-20T17:41:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / A produção de soro no Brasil, único tratamento eficaz nos casos de acidentes ofídicos, utiliza equinos que apesar do grande porte, apresentam diminuição da longevidade quando comparado com os cavalos não imunizados. A radiação ionizante tem se mostrado como excelente ferramenta na diminuição da toxicidade de venenos e toxinas isoladas, além de promover a obtenção de melhores imunógenos para a produção de soro. Sabe-se, contudo, que os efeitos da radiação ionizante em materiais protéicos caracterizam-se por diversas alterações químicas, como fragmentação, cross-linking, agregação e oxidação devido aos produtos gerados pela radiólise da água. Porém, a ação da radiação gama em toxinas ainda não está totalmente esclarecida do ponto de vista estrutural e farmacológico, fato que impede a aplicação de tal metodologia no processo de produção do soro. Assim, foi proposto nesse trabalho a caracterização da crotamina, uma das principais proteínas do veneno da espécie Crotalus durissus terrificus, irradiada com raios gama de 60Co. Após o isolamento da toxina por técnicas cromatográficas e a realização de testes para comprovar a obtenção da crotamina pura, a toxina, nos estados nativo e irradiado, foi submetida às análises estruturais de Fluorescência e Dicroísmo Circular. Testes utilizando altas pressões hidrostáticas também foram realizados com o intuito de verificar se as alterações conformacionais causadas pela radiação sofreriam modificações sob altas pressões. Do ponto de vista farmacológico, testes de contração muscular foram realizados com o objetivo de delimitar a ação da crotamina em musculatura lisa, bem como a mudança na ação da toxina frente às alterações estruturais ocasionadas. As análises de Fluorescência e Dicroísmo Circular mostraram que há mudanças na conformação da crotamina quando submetida à radiação gama e que tais alterações possivelmente ocorrem na estrutura terciária e secundária da proteína. O observado nos testes farmacológicos mostraram que a crotamina irradiada foi menos eficaz na diminuição da contração muscular do ducto deferente de ratos em comparação com a crotamina nativa. Além disso, o comportamento da toxina irradiada na contração tônica, modulada por noradrenalina, foi distinto daquele observado para a toxina nativa. / Tese (Doutorado em Tecnologia Nuclear) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP