A detailed study was made in this doctoral thesis on the development and differentiation of the vertebrate pituitary gland, with the aim to establish a fate map in Rathke's pouch of the origin of different hormone producing cells present in the adult pituitary gland, that explain if the differences observed in the distribution pattern of different hormone producing cells in the adult is the consecuence of differences in their development. For this reason, the study was made in two vertebrate groups, Mammals and Avian, that present notable differences in their hormone producing cell distribution patterns. The results allowed us to conclude that the origin of different hormone producing cells in Rathke’s pouch determine their definitive distribution in the adult gland. At the same time, the relationship between proliferation and differentiation was studied, showing us that after differentiation, hormone producing cells continue proliferating with a low rate, contributing to the establishment of differentiated populations. Using immunochemicals and in situ hidridization techniques, the expression of different molecules such as hypothalamic releasing factors; different peptides, whose role as modulators in different pituitary axis have been proposed in the adult animal; different calcium binding proteins and transcription factors in relation to the differentiation of different hormone producing cells, was also studied in this work, allowing us to establish different relationships between some of these factors and specific aspects of the development and differentiatin of the pituitary gland.

Orientador: Pedro Duarte Novaes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-10T13:01:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Salmon_CristianeRibeiro_D.pdf: 2931255 bytes, checksum: 8d0caff547f7c76dee5ed900784d683c (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: O ligamento periodontal de incisivos de ratos é um tecido conjuntivo com a função de ancoragem, suporte do dente e provável papel na erupção dental. Esse tecido possui um alto grau de remodelação, cujo colágeno tipo I (Col-1) é um dos seus componentes principais. As metaloproteinases (MMPs) são enzimas que estão presentes no ligamento periodontal e degradam quase todos os constituintes da matriz extracelular. Alterações nas condições funcionais do dente podem provocar mudanças no metabolismo das células do ligamento, modificando o balanço entre a síntese das proteínas da matriz extracelular e a degradação pelas MMPs. O objetivo desse estudo é quantificar a expressão de mRNA de Col-1, MMP-2, MMP- 8, MMP-14, TIMP-1 e TIMP-2, identificar as células que expressam esses mRNAs e a localizar as proteínas no ligamento periodontal de incisivos de ratos submetidos a condições funcionais alteradas experimentalmente. Ratos Lewis machos foram utilizados, subdivididos em 4 grupos de acordo com as seguintes condições funcionais a que os incisivos inferiores foram submetidos por um período de 7 e 14 dias: normofuncional, hiperfuncional, hipofuncional e erupção contida. Os incisivos foram extraídos e o ligamento periodontal coletado por meio de leve raspagem de suas superfícies distal, lingual e mesial. Após a extração do RNA total e a síntese de cDNA, foi feita a quantifição relativa por PCR em Tempo Real. Para a localização do mRNA e das proteínas de interesse no ligamento periodontal foram utilizadas as técnicas de hibridização in situ e imunohistoquímica, utilizando-se 5 ratos para cada condição funcional e por período. Decorridos os tempos os animais foram sacrificados, tiveram as hemimandíbulas removidas, fixadas e processadas para a obtenção de cortes histológicos transversais. A análise da expressão gênica mostrou uma redução nos níveis de mRNA para o Col-1, MMPs e TIMPs em todos os grupos experimentais quando comparados ao normofuncional. Redução significativa foi encontrada nos grupos tratados por 7 dias, e houve aumento dos níveis de mRNA aos 14 dias para os genes estudados. Aumento significante nos níveis de mRNA (p<0,05) foi encontrado somente para MMP-2 no grupo hipofuncional por 7 dias. A redução (p<0,05) dos níveis de MMP- 8 no grupo contido por 7 e 14 dias parece estar relacionada ao aumento do inibidor TIMP-1. As MMPs e TIMPs citadas foram localizadas no ligamento periodontal e os resultados sugerem que esses genes são expressos por fibroblastos, cementoblastos, osteoblastos e osteoclastos. O Col-1 foi imunolocalizado no ligamento periodontal na região junto ao osso alveolar, enquanto a TIMP-2 estava mais concentrada na região adjacente ao dente. Os resultados sugerem que as alterações nas condições funcionais dos incisivos de rato provocam uma modificações no metabolismo do ligamento periodontal pelas mudanças nos níveis de expressão de Col-1, MMPs e TIMPs, ocorrendo picos de aumento ou redução da expressão com tendência de retorno à normalidade. O balanço entre a produção de Col-1, MMPs e TIMPS parece ter um importante papel no controle da taxa de erupção dos incisivos de ratos / Abstract: Periodontal ligament is a connective tissue that provides anchorage and support to the tooth, and it has a probable role in the tooth eruption. The extracelular matrix consists predominantly of collagen type I (Col-1) and the turnouver of collagen fibers is intense. Matrix metalloproteinases (MMPs) are members of a family of enzymes capable to degrade almost all components of the extracellular matrix. They are present in the periodontal ligament. It is supposed that tooth functional conditions alterations may promote changes in the metabolism of periodontal ligament cells, modifying the balance between the synthesis of extracellular matrix proteins and their degradation by MMPs. The aim of the present study is to quantify the levels of mRNA of Col-1, MMP-2, MMP-8, MMP-14, TIMP-1 and TIMP-2, identify the cells expressing these mRNA and locate these proteins in the periodontal ligament of rat incisors submitted to altered functional conditions. Lewis male rats were randomly assigned to 4 groups and their lower incisors were submitted to different functional conditions: normofunctional, hipofunctional, hiperfunctional and restraint, during 7 or 14 days. The teeth were extracted and the periodontal ligament was collected by gently scaling of the distal, lingual and mesial tooth surface. Total RNA was extracted and the synthesis of the cDNA was performed for Relative PCR Quantification. In situ hybridization and immunohistochemistry were performed to detect the cell expression and the proteins localization in the periodontal ligament. Five rats for each functional condition were sacrified after 7 and 14 experimental days.The rat hemimandubles were removed for histological processing to obtain 3µm transversal sections. Analysis of the expression of Col-1, MMPs and TIMPs showed a down-regulation for all genes in the groups studied in relation to the normofuctional group. Significant down-regulation (p<0,05) was found in the groups treated during 7 days, and increased levels of mRNA was related to 14 days of treatment. Significant increased levels of mRNA (p<0,05) were found only for MMP-2 to the hipofunctional group at 7 days. Reduction (p<0,05) of the levels of mRNA for MMP-8 in the restraint group at 7 and 14 days seems to be related to the increased levels of its inhibitor, TIMP-1. MMPs and TIMPs were found been expressed in the periodontal ligament by fibroblasts, cementoblasts, osteoblasts and osteoclasts. Col-1 was localized at the region adjacent to the alveolar bone, whereas TIMP-2 was concentrated adjacent to the tooth region of the periodontal ligament. The results obtained suggest that the alterations on the functional conditions of the rat incisors produce changes in the metabolism of the periodontal ligament tissue by changing the levels of COL-1, MMPs and TIMPs. Up-regulation peaks or downregulation peaks seem to be conduced to the normal levels of expression along the experimental time. The balance between production of Col-1, MMPs and TIMPs may have an important role in the control of the eruption rate of rat incisors / Doutorado / Histologia e Embriologia / Doutor em Biologia Buco-Dental

Orientador: Marcelo Carnier Dornelas / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-12T20:30:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cazoto_JulianaLacorte_M.pdf: 1128689 bytes, checksum: 95594f5893e4e8ee4fb64f1d168d493e (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Espécies do gênero Bryophyllum, pertencentes à família Crassulaceae, apresentam uma característica pouco encontrada na natureza: as regiões da margem foliar sofrem diferenciação e desenvolvem pequenas estruturas, que se desprendem da planta e dão origem a novos indivíduos. Tais formações são chamadas de 'propágulos foliares' ou 'bulbilhos'. Entretanto, o estudo da morfologia e desenvolvimento de tais estruturas permitiu que alguns autores as considerassem como embriões, e não apenas 'brotos' foliares. A formação natural de embriões somáticos é um fenômeno morfogênico restrito a poucas espécies vegetais. Em Bryophyllum, entretanto, eles parecem fazer parte da ontogenia da folha. O presente estudo caracterizou morfológica e anatomicamente essas estruturas foliares em Bryophyllum tubiflorum Harv. e Bryophyllum pinnatum Lam., nas diferentes fases de seu desenvolvimento, através de microscopia eletrônica de varredura e microscopia óptica. A expressão diferencial de homólogos aos genes WUSCHEL, MONOPTEROS, CUP SHAPED COTYLEDON, YABBY e LEAFY COTYLEDON1 também foi analisada durante o desenvolvimento dos 'propágulos', com a utilização de técnicas de hibridização in situ. Os resultados da análise do padrão de expressão gênicas, unidos aos da análise morfo-anatômica do desenvolvimento dos 'propágulos' permitem classificar essas estruturas como embriões somáticos in planta ao menos na espécie B. tubiflorum. / Abstract: Bryophyllum species from the Crassulaceae family show a rare feature: the margin of the leaf develops structures which detach from the mother plant and give rise to a new organism. These structures are known as 'leaf-plantlets' or 'bulbils'. However, morphological and developmental studies allowed some authors to classify such structures as embryos, and not just foliar buds. The natural formation of somatic embryos is a phenomenon restrict to a few plant species. Nevertheless in Bryophyllum this event seems to be part of the leaf ontogeny. This study aimed on the morphological and anatomical characterization of these leaf structures, in their different developmental stages, through scanning electronic microscopy and optical microscopy, in both Bryophyllum tubiflorum Harv. and Bryophyllum pinnatum Lam. The differential pattern of gene expression was also analyzed for the homologs of WUSCHEL, MONOPTEROS, CUP SHAPED COTYLEDON, YABBY e LEAFY COTYLEDON1 during the development of the leaf 'bulbils' by in situ hybridization. Taken together, the result of gene expression analyzes and those from morphoanatomy of plantlet development allow the classification of these structures as in planta somatic embryos, at least for B. tubiflorum. / Mestrado / Mestre em Biologia Vegetal

O vírus Epstein-Barr (EBV) é um herpes vírus humano que estabelece infecção persistente e está associado com várias doenças, como mononucleose infecciosa, linfomas, carcinoma de nasofaringe e leucoplasia pilosa, afetando principalmente pacientes imunossuprimidos. Leucoplasia pilosa é uma lesão epitelial não maligna associada ao EBV que ocorre principalmente nas bordas laterais de língua. É comum em indivíduos infectados pelo HIV e em pacientes que recebem medicações imunossupressoras. Histopatologicamente, a leucoplasia pilosa é caracterizada por hiperparaqueratose, acantose, células semelhantes a coilócitos ou células balonizantes, e discreto ou nenhum infiltrado inflamatório. As características histopatológicas da lesão não são patognomônicas, sendo necessária a detecção do EBV para o diagnóstico final de acordo com vários autores. O objetivo desse estudo foi verificar a presença do EBV, por meio da técnica de hibridização in situ, em lesões diagnosticadas histológicamente como sugestivas de leucoplasia pilosa e comparar esses resultados com algumas características histopatológicas.Trinta e seis espécimes foram selecionados do Serviço de Patologia Cirúrgica da Disciplina de Patologia Bucal. Todos foram submetidos à reação de hibridização in situ, e 27 casos (75%) foram positivos, confirmando o diagnóstico anterior. Nenhuma das características histológicas analisadas puderam se correlacionar com a hibridização in situ. Pudemos concluir que a análise histopatológica ao H&E não pode substituir a hibridização in situ no diagnóstico final da leucoplasia pilosa / Epstein-Barr virus (EBV) is a human herpesvirus that estabilishes persistent infection and is associated with many diseases, including infectious mononucleosis syndrome, lymphomas, nasopharyngeal carcinoma, and oral hairy leukoplakia, affecting principaly immunocompromised patients. Oral hairy leukoplakia is a non malignant, EBV-associated, epithelial disease that typically occurs on the lateral tongue borders. It is common in individuals with HIV infection and in patients receiving iatrogenic immunossupression. Histologically, hairy leukoplakia is characterized by shaggy hyperparakeratosis, acanthosis, “koilocyte"-like or ballon cells, and a paucity of inflamation. The histologically features of hairy leukoplakia are not patognomonic, and for the many authors definitive diagnosis requires demonstration of EBV. The aim of this study were to verify the presence of EBV, by in situ hibridization, in lesions diagnosed histologically suggestive of hairy leukoplakia and compare this results with histologically features. Thirty six biopsy specimens from lesions histologically suggestive of hairy leukoplakia were selected from the Department of Stomatology’s Oral Pathology Service archives. EBV in situ hibridization was performed on all 36 cases, and 27 cases (75%) were positive, confirmed the diagnose of oral hairy leukoplakia. Histopatologically features did not agree well with EBV in situ hibridization. We concluded that H&E histopathology should not be used as a substitute for in situ hibridization in the definitive diagnosis of hairy leukoplakia

O vírus Epstein-Barr (EBV) é um herpes vírus humano que estabelece infecção persistente e está associado com várias doenças, como mononucleose infecciosa, linfomas, carcinoma de nasofaringe e leucoplasia pilosa, afetando principalmente pacientes imunossuprimidos. Leucoplasia pilosa é uma lesão epitelial não maligna associada ao EBV que ocorre principalmente nas bordas laterais de língua. É comum em indivíduos infectados pelo HIV e em pacientes que recebem medicações imunossupressoras. Histopatologicamente, a leucoplasia pilosa é caracterizada por hiperparaqueratose, acantose, células semelhantes a coilócitos ou células balonizantes, e discreto ou nenhum infiltrado inflamatório. As características histopatológicas da lesão não são patognomônicas, sendo necessária a detecção do EBV para o diagnóstico final de acordo com vários autores. O objetivo desse estudo foi verificar a presença do EBV, por meio da técnica de hibridização in situ, em lesões diagnosticadas histológicamente como sugestivas de leucoplasia pilosa e comparar esses resultados com algumas características histopatológicas.Trinta e seis espécimes foram selecionados do Serviço de Patologia Cirúrgica da Disciplina de Patologia Bucal. Todos foram submetidos à reação de hibridização in situ, e 27 casos (75%) foram positivos, confirmando o diagnóstico anterior. Nenhuma das características histológicas analisadas puderam se correlacionar com a hibridização in situ. Pudemos concluir que a análise histopatológica ao H&E não pode substituir a hibridização in situ no diagnóstico final da leucoplasia pilosa / Epstein-Barr virus (EBV) is a human herpesvirus that estabilishes persistent infection and is associated with many diseases, including infectious mononucleosis syndrome, lymphomas, nasopharyngeal carcinoma, and oral hairy leukoplakia, affecting principaly immunocompromised patients. Oral hairy leukoplakia is a non malignant, EBV-associated, epithelial disease that typically occurs on the lateral tongue borders. It is common in individuals with HIV infection and in patients receiving iatrogenic immunossupression. Histologically, hairy leukoplakia is characterized by shaggy hyperparakeratosis, acanthosis, “koilocyte”-like or ballon cells, and a paucity of inflamation. The histologically features of hairy leukoplakia are not patognomonic, and for the many authors definitive diagnosis requires demonstration of EBV. The aim of this study were to verify the presence of EBV, by in situ hibridization, in lesions diagnosed histologically suggestive of hairy leukoplakia and compare this results with histologically features. Thirty six biopsy specimens from lesions histologically suggestive of hairy leukoplakia were selected from the Department of Stomatology’s Oral Pathology Service archives. EBV in situ hibridization was performed on all 36 cases, and 27 cases (75%) were positive, confirmed the diagnose of oral hairy leukoplakia. Histopatologically features did not agree well with EBV in situ hibridization. We concluded that H&E histopathology should not be used as a substitute for in situ hibridization in the definitive diagnosis of hairy leukoplakia

O sistema renina-angiotensina (SRA) é de fundamental importância para a manutenção da homeostasia cardiovascular. A enzima conversora de angiotensina I (ECA) é um elemento crítico na cascata de ativação das diversas substâncias ativas do SRA. Evidências obtidas em nosso laboratório por análise de genômica comparativa e confirmadas através de clonagem de segmentos de cDNA sugerem que esta família de proteínas está incompleta. Nossos dados apontam para existência de duas novas isoformas da ECA, que aqui denominaremos Variante-3 (Var-3) e Variante-4 (Var-4), localizadas no mesmo locus da ECA. Neste trabalho, analisamos simultaneamente o padrão de expressão das 4 Variantes da ECA e ECA2 em 30 tecidos do rato utilizando a técnica de qRT-PCR. A Variante 4, cuja ação ainda é desconhecida e está sendo investigada em nosso laboratório, apresenta predominantemente expressão no testículo e em quantidade relativamente baixa no ventrículo esquerdo. Utilizando a técnica de hibridização in situ no testículo, verificamos que a marcação positiva da Var- 4 pode ou não ser co-localizada com a Var-2 dependendo do estágio celular em que se encontra no túbulo seminífero. Verificou-se que as espermátides redondas são as células que expressam a Var-4 nos túbulos seminíferos. Em conjunto, estes dados mostram que as Variantes 1, 2, 3 e 4 da ECA apresentam expressão tecido-específica. O padrão de expressão da Var-4, principal objeto deste trabalho, é consistente com a idéia de que esta variante gênica pode estar envolvida com o controle da espermatogênese e em processos cardíacos, até então não caracterizados / The renin-angiotensin system (RAS) is essential to maintain the cardiovascular homeostasis. The angiotensin-converting enzyme (ACE) is a critical point in the biochemical activation of several active substances, notably angiotensin II. Evidence obtained in our laboratory using comparative genomic analysis and confirmed by cDNA cloning suggests that this protein family is incomplete and point to the existence of two new isoforms of ACE that from now on are denominated Variant-3 (Var-3) and Variant-4 (Var-4), located within the same ACE locus. In the present work we simultaneously analyzed the expression pattern of the 4 ACE gene variants in 30 different tissues of rats. The variant 4, whose mechanism of action remains unknown and it is being presently investigated in our laboratory is mainly expressed in testis and in relatively low quantity in left ventricle. Using in situ hybridization technique in testis, we verified that positive labeling of Var-4 is distinct from Var-2, suggesting that they may play distinct functions during the spermatogenesis process. Taking together, we provide direct evidence that the ACE gene locus contain, 4 variants instead of 2 and they show a specific cell tissue pattern of expression. Mostly important, the Var-4 is primarily expressed in testis and the data suggest that it may be involved with spermatogenesis control, and in cardiac processes presently unknown

O sistema renina-angiotensina (SRA) é de fundamental importância para a manutenção da homeostasia cardiovascular. A enzima conversora de angiotensina I (ECA) é um elemento crítico na cascata de ativação das diversas substâncias ativas do SRA. Evidências obtidas em nosso laboratório por análise de genômica comparativa e confirmadas através de clonagem de segmentos de cDNA sugerem que esta família de proteínas está incompleta. Nossos dados apontam para existência de duas novas isoformas da ECA, que aqui denominaremos Variante-3 (Var-3) e Variante-4 (Var-4), localizadas no mesmo locus da ECA. Neste trabalho, analisamos simultaneamente o padrão de expressão das 4 Variantes da ECA e ECA2 em 30 tecidos do rato utilizando a técnica de qRT-PCR. A Variante 4, cuja ação ainda é desconhecida e está sendo investigada em nosso laboratório, apresenta predominantemente expressão no testículo e em quantidade relativamente baixa no ventrículo esquerdo. Utilizando a técnica de hibridização in situ no testículo, verificamos que a marcação positiva da Var- 4 pode ou não ser co-localizada com a Var-2 dependendo do estágio celular em que se encontra no túbulo seminífero. Verificou-se que as espermátides redondas são as células que expressam a Var-4 nos túbulos seminíferos. Em conjunto, estes dados mostram que as Variantes 1, 2, 3 e 4 da ECA apresentam expressão tecido-específica. O padrão de expressão da Var-4, principal objeto deste trabalho, é consistente com a idéia de que esta variante gênica pode estar envolvida com o controle da espermatogênese e em processos cardíacos, até então não caracterizados / The renin-angiotensin system (RAS) is essential to maintain the cardiovascular homeostasis. The angiotensin-converting enzyme (ACE) is a critical point in the biochemical activation of several active substances, notably angiotensin II. Evidence obtained in our laboratory using comparative genomic analysis and confirmed by cDNA cloning suggests that this protein family is incomplete and point to the existence of two new isoforms of ACE that from now on are denominated Variant-3 (Var-3) and Variant-4 (Var-4), located within the same ACE locus. In the present work we simultaneously analyzed the expression pattern of the 4 ACE gene variants in 30 different tissues of rats. The variant 4, whose mechanism of action remains unknown and it is being presently investigated in our laboratory is mainly expressed in testis and in relatively low quantity in left ventricle. Using in situ hybridization technique in testis, we verified that positive labeling of Var-4 is distinct from Var-2, suggesting that they may play distinct functions during the spermatogenesis process. Taking together, we provide direct evidence that the ACE gene locus contain, 4 variants instead of 2 and they show a specific cell tissue pattern of expression. Mostly important, the Var-4 is primarily expressed in testis and the data suggest that it may be involved with spermatogenesis control, and in cardiac processes presently unknown