Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El género pestivirus pertenece a la familia Flaviviridae e incluye a virus que afectan a rumiantes domésticos como bovinos, ovinos, caprinos y camélidos sudamericanos así como también a rumiantes silvestres y cerdos. En los últimos años, en la literatura internacional, se han descrito cuatro especies de pestivirus: virus de la diarrea viral bovina genotipo 1 y 2 (VDVB-1 y VDVB-2), virus de la enfermedad de la frontera (VEF) y virus de la peste porcina clásica (VPPC). Dentro del género pestivirus, el VDVB es de distribución mundial, produce cuadros clínicos de distinta gravedad y produce grandes pérdidas económicas sobre todo por el daño a nivel reproductivo que causa en el ganado y por la presencia de animales persistentemente infectados los que actúan como reservorio de la enfermedad. Por medio de estudios moleculares, se han determinado varios subgrupos dentro de cada especie viral de pestivirus, así como también, se han propuesto nuevos pestivirus propios de especies silvestres lo que ha incentivado estudios para determinar si pequeños rumiantes y especies silvestres han sufrido contagio desde el ganado bovino vía interespecies, o bien, poseen especies virales propias de pestivirus. El objetivo de esta memoria de título fue determinar el parentesco genético de aislados de pestivirus obtenidos de ovejas, cabras, alpacas y llamas naturalmente infectadas mediante el análisis de una fracción del gen de la proteína E2. Para esto, se trabajó con 25 aislados de pestivirus, los cuales fueron reactivados por medio de sucesivos pasajes por cultivos celulares y posteriormente confirmados como positivos por prueba de inmunofluorescencia directa. Se realizó extracción del ARN viral de los aislados, para poder realizar la amplificación por RT-PCR, utilizando partidores específicos. Finalmente, se realizó alineamiento de secuencias nucleotídicas y análisis filogenético, el que incluyó cepas de referencia internacionales y secuencias de aislados de bovinos chilenos. El análisis por filogenia molecular determinó que del total de 25 aislados analizados, 21 (84%) corresponden al subgrupo VDVB-1e. Los 4 aislados restantes (16%) fueron clasificados dentro del subgrupo VDVB-1b. Esto permite concluir que en pequeños rumiantes en Chile se encuentran presentes los subgrupos 1b y 1e del VDVB, estrechamente relacionados genéticamente con los aislados bovinos nacionales. / Proyecto FONDECYT 1080130

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La identificación y control de agentes infecciosos son parte fundamental del manejo sanitario en animales silvestres en cautiverio. El Virus Diarrea Viral Bovina y el Herpesvirus bovino tipo 1 son reconocidos agentes virales que poseen la capacidad de infectar a múltiples especies de ungulados tanto domésticos como silvestres. Así, en este estudio se realizó un análisis serológico para ambos agentes infecciosos en artiodáctilos presentes en el Parque Zoológico Buin Zoo, ubicado en la comuna de Buin, Región Metropolitana. Estos correspondieron a 112 animales de las familias Bovidae, Cervidae, Camelidae, Giraffidae y Suidae, cuyas muestras de suero fueron recolectadas en dos ocasiones, entre Julio del año 2011 y Enero del año 2013. Siete pudúes, tres alpacas y un guanaco resultaron seropositivos a Virus Diarrea Viral Bovina (Pestivirus), correspondiendo al 9,82%, mientras que ningún animal resultó seropositivo a Herpesvirus bovino tipo 1 (Alfaherpesvirus). El hallazgo de resultados positivos en algunos animales que nacieron en el parque y la presencia de seroconversión en otros, permitieron concluir que la infección con pestivirus ocurrió dentro del recinto. La presencia de anticuerpos en todos los ejemplares de pudú con la excepción de uno, llevó a la sospecha de que el animal seronegativo se trataba de un persistentemente infectado, lo cual fue confirmado posteriormente mediante PCR. El hallazgo de un pudú persistentemente infectado establece un nuevo precedente respecto a la epidemiología de los pestivirus, donde ésta especie podría actuar como reservorio. Para comprender mejor este aspecto son necesarios estudios futuros, así como también, para conocer el rol de los Pestivirus como agente patógeno en los pudúes y como amenaza en su conservación.

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / Se evalúa la hipótesis que camélidos sudamericanos (CS) introducidos en la Región Metropolitana de Chile estén infectados con pestivirus. Para realizar el aislamiento viral se tomaron muestras de 79 CS (42 alpacas vivas, 30 llamas vivas, una llama muerta, un feto de llama abortado, cuatro guanacos vivos y un guanaco muerto) procedentes de cinco rebaños sospechosos de estar infectados con pestivirus. Las muestras se inocularon en cultivos primarios de células de pulmón fetal bovino libre de virus diarrea viral bovina (VDVB) y se hicieron cinco pasajes antes de ser analizados por las pruebas de inmunofluorescencia directa e inmunoperoxidasa indirecta para detectar la presencia de antígenos de pestivirus. Para la caracterización molecular un fragmento de la región no traducida 5’ (5’- UTR) del ARN de cada aislado fue amplificado por transcripción reversa de reacción en cadena de las polimerasas (RT-PCR) y tratado con las enzimas de restricción Pst I, Bgl I y Xho I para identificar la especie de los virus Los resultados muestran que 37 CS (17 alpacas, 16 llamas y cuatro guanacos de los cinco rebaños) estaban infectados con pestivirus. Todos los aislados fueron no citopatogénicos. El VDVB genotipo 1 (VDVB-1) fue aislado de 6 alpacas y VDVB genotipo 2 (VDVB-2) fue aislado de 11 alpacas, 16 llamas y 4 guanacos. Los aislados virales fueron obtenidos de 14 alpacas sanas, 3 alpacas que abortaron, 13 llamas sanas, dos llamas con aborto, una llama muerta sin antecedentes clínicos y tres guanacos con enfermedad respiratoria y uno muerto con enfermedad respiratoria. Se concluye que alpacas, llamas y guanacos de la Región Metropolitana de Chile están infectados con VDVB-1 y VDVB-2 / Proyecto Fondecyt 1981193