Orientador: Mario Jose Abdalla Saad / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-23T04:48:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lalli_CristinaAlba_M.pdf: 5295392 bytes, checksum: 7dd3cf83b36bb9510760e89d3d7f8ec5 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: A insulina estimula a capacidade quinase de seu receptor, que se autofosforila e estimula a fosforilação de substratos citoplasmáticos, IRS-I e IRS-2. Estes, por sua vez, associam-se e ativam a enzima fosfatidilinositol 3-quinase (pI 3-quinase), que é importante no transporte de glicose. Animais alimentados com dietas ricas em lípides apresentam resistência à ação insulínica, ainda que os mecanismos moleculares dessa alteração não estejam esclarecidos. Esse estudo avaliou as etapas iniciais da ação insulínica em figado e músculo de ratos alimentados durante 4 semanas com uma dieta hiperlipídica, contendo 59% de lípides saturados. Utilizou-se extração de tecidos hepático e muscular após estimulação com insulina e imunoprecipitação seguida de "immunoblotting" com anticorpos anti receptor de insulina anti-IRS-l, antifosfotirosina e anti-PI 3-quinase. Os resultados mostraram que tanto a concentração como a autofosforilação do receptor de insulina estimulada pela insulina em tecidos hepático e muscular, permaneceram inalteradas nos dois grupos, alimentados com a dieta hiperlipídica e com ração convencional. Em figado, a concentração do IRS-I aumentou 51:t17% (p<O,05) nos animais alimentados com a dieta hiperlipídica e a fosforilação desse substrato, avaliada através da imunoprecipitação com anticorpo antiIRS-1 e immunoblotting com anticorpo antifosfotirosina, aumentou 64:t22% (p<O,05) no mesmo grupo. Ao contrário, em tecido muscular observou-se diminuição de 50:t12% (p<O,05) na fosforilação do IRS-I estimulada pela insulina no grupo da dieta hiperlipídica, ainda que a concentração do substrato não tenha apresentado alteração significativa. Os níveis protéicos da PI 3-quinase não se alteraram em ambos os tecidos hepático e muscular dos dois grupos, mas a associação IRS-l/PI 3-quinase no músculo dos animais tratados com a dieta rica em lípides diminuiu para 52:tll% (p<O,05). Em tecido hepático não houve alteração na associação IRS-l/PI 3-quinase. Tais resultados sugerem que alterações nas etapas iniciais da ação da insulina, principalmente em tecido muscuIaresquelético, podem estar envolvidas na resistência insulinica apresentada nesse modelo animal / Abstract: Insulin stimulates the tyrosine kinase activity of its receptor resulting in the tyrosine phosphorylation of the cytosolic substrate, insulin receptor substrate-1 (IRS-I ), which in tum associates with and activates phosphatidylinositol 3-kinase (PI 3-kinase). Feeding diets high in fat content causes insulin resistance. However, the exact molecular mechanism is unknown. In the present study we have examined the levels and phosphorylation status of the insulin receptor, IRS-I, as well as the association between IRS-1/PI 3-kinase, in the tiver and musc1e of rats fed high-fat diet (59% saturated fat) by immunoblotting with specific antibodies. The levels and the insulin-stimulated autophosphorylation of the insulin receptor, as determined by immunoblotting with an antiphosphotyrosine antibody, are similar in the liver and musc1e in both the high fat-diet fed and chow-diet fed rats. In the liver, the IRS-I protein levels increased 51:1:17% (p<0,05) and in samples previously immunoprecipitated with anti-IRS-1 antibody and blotted with antiphosphotyrosine antibody, there was a increase in the insulin stimulated IRS-1 phosphorylation levels to 64:t22% (p<0,05) in the high fat-diet fed animaIs. In contrast, the insulin-stimulated phosphorylation of IRS-I in musc1e of high fat-diet fed rats was reduced to 50:1:12% (p<0,05), although there was no change in protein levels. The insulin-stimulated IRS-I association with PI 3-kinase decreased to 52:1:11% (p<0,05) in musc1e of the rats fed high fat-diet, but was no change in the liver. These data suggest that changes in the early steps of insulin signal transduction may have a role in the insulin resistance observed in high fat-fed animaIs / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Orientadores: Debora de Queiroz Tavares, Mario Jose Abdalla Saad / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-23T23:02:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ueno_Mirian_M.pdf: 4566379 bytes, checksum: de600b70bad71937752ee999906cc05f (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: A insulina estimula a atividade tiro sina quinase de seu receptor levando à fosforilação de proteínas citoplasmáticas, como a pp185 que é constituída de pelo menos dois substratos: os substratos 1 e 2 do receptor de insulina (IRS-1 e IRS-2). Os substratos, por sua vez, associam-se à fosfatidilinositol 3-quinase (PI 3-quinase), ativando-a. Sabe-se que animais alimentados com dietas ricas em frutose apresentam resistência insulínica, entretanto o mecanismo molecular envolvido nesta situação não está totalmente esclarecido. No presente estudo, investigaram-se os níveis teciduais e o grau de fosforilação, produzidos após o estímulo insulínico do receptor de insulina e da pp185 (IRS-1 e 2) no fígado e músculo de ratos Wistar alimentados com dieta rica em frutose (66% das calorias totais provenientes de frutose), por immunoblotting com anticorpos específicos. A alimentação com a dieta rica em frutose por 28 dias induziu discreta resistência à insulina, a qual foi demonstrada pela diminuição significativa da velocidade de redução dos níveis de glicose. Os animais deste grupo apresentaram níveis séricos elevados de triglicérides, e ausência de alterações significativas dos níveis de glicemia, insulinemia ou colesterol, quando comparados ao grupo controle. Não ocorreu variação no número de receptores de insulina nos tecidos hepático e muscular dos dois grupos, alimentados com a dieta rica em frutose e com a ração comercial. Entretanto, em amostras previamente imunoprecipitadas com anticorpo anti-IR e incubadas com anticorpo antifosfotirosina, a autofosforilação do receptor, estimulada pela insulina, mostrou-se reduzida para 72 +- 4% (p<0,000l) no fígado de ratos alimentados com a dieta rica em frutose. O nível protéico do IRS-1, como determinado por immunoblotting com anticorpo anti-IRS-1, não apresentou alterações nos dois tecidos do grupo que recebeu a dieta rica em frutose, comparado com o grupo controle. Em contraste, após estímulo insulínico, os ratos alimentados com a dieta rica em frutose demonstraram redução significativa do grau de fosforilação da pp185 (IRS-1 e 2), tendo atingido 83 +- 5% (p<0,05) no fígado, e 77 +- 4% (p<0,000l) no músculo. Os dados sugerem que estas alterações das etapas iniciais da transmissão do sinal insulínico possam ter significado importante no mecanismo de resistência à insulina encontrada neste modelo animal / Abstract: Insulin stimulates the tyrosine kinase activity of its receptor resulting in the tyrosine phosphorylation of cytoplasmic proteins called pp185, which contain at least two substrates: insulin receptor substrate-l (IRS-l) and insulin receptor substrate-2 (IRS-2). These two substrates in tum associate with phosphatidylinositol 3-kinase (PI 3-kinase), thereby activating the latter. Feeding animals with high fructose diets results in insulin resistance. However the exact molecular mechanism is unknown. In the present study, we have investigated the levels and phosphorylation status of the insulin receptor and pp185 (IRS-l/2) protein, in both liver and muscle of Wistar rats fed a high fructose diet (66% total calories as fructose) by immunoblotting with specific antibodies. Feeding fructose for 28 days induced a discrete insulin resistance, as demonstrated by the insulin tolerance test (ITT). Plasma glucose, serum insulin and cholesterol of the two groups of rats (fructose and control) were similar, whereas the plasma triglyceride concentrations increased significantly in the rats eating the fructose diet (p<0.05). There were no changes in the insulin receptor concentration in the liver and muscle of both the high-fructose and the commercial chow fed rats. However, in samples previously immunoprecipitated with anti-IR antibody and blotted with antiphosphotyrosine antibody, insulin-stimulated receptor autophosphorylation was reduced by 72 +- 4% (p<0.000l) in the liver of rats fed high-fructose diet. The IRS-l protein levels, as determined by immunoblotting with anti-IRS-l antibody, were similar in both liver and muscle of the two groups of rats. In contrast, there was a significant decrease in pp185 (IRS-l/2) phosphorylation, to 83 +- 5% (p<0.05) in liver and 77 +- 4% (p<0.000l) in muscle, after insulin stimulation of the rats fed high fructose diet. These data suggest that changes in the early steps of insulin signal transduction may have an important role in the insulin resistance observed in animals treated with high-fructose diet / Mestrado / Mestre em Ciência da Nutrição

Objetivo: Determinar los niveles de insulina post ingesta de edulcorantes en adultos sanos. Materiales y métodos: Tipo de estudio Analítico, Experimental, Longitudinal y Prospectivo. Se utilizaron bebidas edulcoradas con Aspartame, Sucralosa, Sacarina, Esteviósido y Sacarosa. Se realizó la medición directa de los valores de insulina en sangre en tiempo basal, al minuto, a los 20 minutos, a los 30 minutos, a los 60 minutos y a los 90 minutos. Resultados: El aspartame fue el edulcorante artificial que presentó los mayores valores de insulina mientras que la sacarosa fue el edulcorante natural que presentó mayores niveles de insulina. Conclusiones: La Sacarosa indujo a los mayores niveles de insulina seguida del Aspartame.

GOMES, B. A.; Contribuição ao conhecimento químico de plantas do Nordeste: Cissus verticillata L. (Vitaceae). 2012. 114 f. Dissertação (Mestrado em Química) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2012. / Submitted by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2014-10-17T18:12:03Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_bagomes.pdf: 3852147 bytes, checksum: 4b535f4f3fae61bbf501ea1c0171a3e9 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2014-11-11T23:27:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_bagomes.pdf: 3852147 bytes, checksum: 4b535f4f3fae61bbf501ea1c0171a3e9 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-11T23:27:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_bagomes.pdf: 3852147 bytes, checksum: 4b535f4f3fae61bbf501ea1c0171a3e9 (MD5) Previous issue date: 2012 / The presente work describe the results of chemical study of Cissus verticillata (Vitaceae), plant known as insulin and commonly used as anti-diabetic. Using column chromatography on silica gel from the hexane extract of the stems was isolated a steroid (β-sitosterol), while the hexane extract of leaves provided an alcohol (tetracosonol) and a pentaciclic triterpene (3β-taraxerol). In addition, from the original constituents, using classical chemical reactions (acetylation, oxidation and formulation), derivatives were prepared in order to compare the original constituents with the derivatives with respect to anticholinesterase activity. We also studied the composition of fatty acids present in the hexane extract of the stems through the process of saponification followed by methylation and analised using gas chromatography coupled to mass spectrometry. All compounds original constituents and derivatives) were characterized by spectrometric methods, nuclear magnetic resonance (NMR) 1H and 13C, infra-red and mass spectroscopic. / O presente trabalho descreve o estudo da espécie botânica Cissus verticillata (Vitaceae) conhecida como “insulina vegetal” que é utilizada popularmente como anti-diabética. Através de cromatografia gravitacional utilizando gel de sílica como fase estacionária foi isolado um constituinte esteróidal, β-Sitosterol a partir do extrato hexânico dos talos e do extrato hexânico das folhas foi isolado um álcool primário conhecido como n-tetracosanol e um triterpeno chamado 3β-taraxerol. Em adição, foram efetuadas algumas reações clássicas para obtenção de derivados, inclusive com o objetivo de comparar a atividade biológica desses derivados com a do constituinte original. Assim, foram realizados testes de atividade anticolinesterásica do constituinte original e dos produtos das reações de acetilação, formilação e oxidação. O estudo do extrato hexânico dos talos e das folhas de C. verticillata L. após saponificação com KOH/MeOH seguida de metilação, forneceu uma mistura de ésteres metílicos que foram identificados por CG/EM. Os principais componentes foram o ácido hexadecanóico, ácido 9,12 octadecadienóico, ácido octadecanóico, ácido eicosanóico, ácido docosanóico. Na caracterização dos metabólitos secundários isolados, assim como, de seus produtos reacionais, foram empregadas técnicas espectrométricas de análise de ressonância magnética nuclear (RMN) de 1H e 13C, infravermelho (IV) e espectrometria de massa (EM).

GOMES, B. A. Contribuição ao conhecimento químico de plantas do Nordeste: Cissus verticillata L. (Vitaceae). 2012. 114 f. Dissertação (Mestrado em Química Orgânica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2012. / Submitted by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2014-10-31T20:39:53Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_bagomes.pdf: 3852147 bytes, checksum: 4b535f4f3fae61bbf501ea1c0171a3e9 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-03-11T21:52:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_bagomes.pdf: 3852147 bytes, checksum: 4b535f4f3fae61bbf501ea1c0171a3e9 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-11T21:52:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_bagomes.pdf: 3852147 bytes, checksum: 4b535f4f3fae61bbf501ea1c0171a3e9 (MD5) Previous issue date: 2012 / The presente work describe the results of chemical study of Cissus verticillata (Vitaceae), plant known as insulin and commonly used as anti-diabetic. Using column chromatography on silica gel from the hexane extract of the stems was isolated a steroid (β-sitosterol), while the hexane extract of leaves provided an alcohol (tetracosonol) and a pentaciclic triterpene (3β-taraxerol). In addition, from the original constituents, using classical chemical reactions (acetylation, oxidation and formulation), derivatives were prepared in order to compare the original constituents with the derivatives with respect to anticholinesterase activity. We also studied the composition of fatty acids present in the hexane extract of the stems through the process of saponification followed by methylation and analised using gas chromatography coupled to mass spectrometry. All compounds original constituents and derivatives) were characterized by spectrometric methods, nuclear magnetic resonance (NMR) 1H and 13C, infra-red and mass spectroscopic. / O presente trabalho descreve o estudo da espécie botânica Cissus verticillata (Vitaceae) conhecida como “insulina vegetal” que é utilizada popularmente como anti-diabética. Através de cromatografia gravitacional utilizando gel de sílica como fase estacionária foi isolado um constituinte esteróidal, β-Sitosterol a partir do extrato hexânico dos talos e do extrato hexânico das folhas foi isolado um álcool primário conhecido como n-tetracosanol e um triterpeno chamado 3β-taraxerol. Em adição, foram efetuadas algumas reações clássicas para obtenção de derivados, inclusive com o objetivo de comparar a atividade biológica desses derivados com a do constituinte original. Assim, foram realizados testes de atividade anticolinesterásica do constituinte original e dos produtos das reações de acetilação, formilação e oxidação. O estudo do extrato hexânico dos talos e das folhas de C. verticillata L. após saponificação com KOH/MeOH seguida de metilação, forneceu uma mistura de ésteres metílicos que foram identificados por CG/EM. Os principais componentes foram o ácido hexadecanóico, ácido 9,12 octadecadienóico, ácido octadecanóico, ácido eicosanóico, ácido docosanóico. Na caracterização dos metabólitos secundários isolados, assim como, de seus produtos reacionais, foram empregadas técnicas espectrométricas de análise de ressonância magnética nuclear (RMN) de 1H e 13C, infravermelho (IV) e espectrometria de massa (EM).

Orientador: Antonio Carlos Boschero / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-29T00:26:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nunes_WiltonMarlindoSantana_M.pdf: 2015825 bytes, checksum: 6eb45e8857bc5c00df750d8c4caf8378 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Dentre os vários compostos inorgânicos que mimetizam as ações da insulina os derivados do vanadato são, sem dúvida, os mais estudados. No presente trabalho, analisamos os efeitos de um desses derivados, o tungstato de sódio, sobre a homeostasia da glicose e a secreção de insulina em ilhotas de Langerhans isoladas de ratos tornados resistentes à insulina pela dexametasona. Quinze dias antes dos experimentos, ratos machos adultos da linhagem Wistar foram distribuídos casualmente em quatro grupos, a saber: controle, dexametasona, tungstato e dexametasona + tungstato. Durante os quinze dias, os ratos dos grupos controle e dexametasona tiveram livre acesso à água e ração. Os ratos dos grupos tungstato e dexametasona + tungstato receberam tungstato de sódio (2mg/ml), dissolvido na água de beber. Nos últimos 5 dias que precederam os experimentos, os ratos dos grupos dexametasona e dexametasona + tungstato receberam, via intraperitoneal, doses diárias de dexametasona (1 mg/kg- / Abstract: Among the severa I inorganic compounds that mimic the effect of insulin vanadium derivatives are the most widely studied. In the present work we have analyzed the effects of tungstate on glucose homeostasis and insulin secretion in healthy and in insulin resistant rats by dexamethasone. Fifteen days before the experiments the rats were randomly distributed in four groups: control, dexamethasone, tungstate and dexamethasone + tungstate. Control and dexamethasone groups had free access to water. Tungstate and dexamethasone + tungstate groups received tungstate dissolved in the drink water (2mg/ml). The dexamethasone and dexamethasone + tungstate groups received during the last 5 days daily doses of 1 mg/Kg-1 of dexamethasone, intraperitoneally. In insulin resistant rats, tungstate treatment normalized plasma glucose whereas plasma insulin and triglycerides remained significantly higher than controls. The glucose disappearance rate after an ivlTT and the glucose uptake by soleus muscle of insulin resistant rats were lower compared to control rats and was normalized by tungstate. The dose-response curve of insulin secretion (5.6 to 27.7 mM glucose) in isolated islets from dexamethasone-treated rats was shifted to the left compared to control islets. Administration of tungstate to these animais induced a dose-response curve closar to contrai islets. The EC50 for the dose-response curves were 13.7, 7.9, 15.7 and 11.8 mM glucose for contrai, ...J dexamethasone, tungstate and dexamethasone + tungstate-treated rats, respectively. In conclusion, tungstate-induced plasma glucose normalization seems to be, at least in part, dependent on the restoration of glucose uptake by muscle cells of insulin resistant rats / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Adilson Leite / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T11:42:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DeLucca_PauloCezar_D.pdf: 7782446 bytes, checksum: 8dbda68a65cf0d9fd8525d58e18bebdd (MD5) Previous issue date: 2003 / Doutorado

Orientadores: Everardo Magalhães Carneiro, Antonio Carlos Boschero / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T16:39:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Augusto_VivianeDelghingaro_D.pdf: 2803493 bytes, checksum: 92f60886fa849e38a8b5362410514fe2 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: A biossíntese e secreção de insulina pelas células beta pancreáticas são reguladas por fatores humorais. estímulos nervosos e interações celulares. Alterações nutricionais durante os períodos fetais e/ou infância. induzidos por restrição protéica ou calórica. têm sido relacionadas a mudanças estruturais e nmcionais do pâncreas. Neste estudo. utilizando a técnica de "cDNA array". avaliamos a expressão gênica de ilhotas pancreáticas de ratos alimentados. durante dois meses. pós-desmame. com dieta isocalórica de baixo teor protéico (6%: LP) ou normoprotéica (17%: NP). Nossos resultados mostraram alterações na expressão de 32 genes. sendo que a maior parte das proteínas codificadas por esses genes eram relacionadas à biossíntese/secreção de insulina e remodelamento celular. Numa seglmda etapa. através de RT-PCR e / Abstract: The biosynthesis and insulin secretion by pancreatic B cells are regulated by hlUllOral tàctors. nervous stimulus and intercellular interactions. Nutritional alterations during fetal and early postnatal periods. induced by either low protein or caloric restriction diets. have been related to changes in the structure and function of pancreas. ln this smdy. using cDNA array technique. we evaluated the panern 01' gene expression in pancreatic islets tTorn rats fed an isocaloric low (6%. LP) and normal (17%. NP) protein diet. after weaning. Our results show 32 genes ""ith altered expression. and the majority of them encode for proteins related to biosynthesis/insulin secretion and cellular remodeling. By RT-PCR and Westem blot. we evaluated the gene expression 01' proteins related to insulin secretion. and we also observed reduction in GLliT-2. PK.I / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores: Debora de Queiroz Tavares, Mario Jose Abdala Saad / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-24T11:20:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_MariaSebastiana_D.pdf: 7063799 bytes, checksum: 5870721e0b647312dd48780c756e2fee (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: O resumo, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The abstract is available with the full electronic document / Doutorado / Doutor em Ciência da Nutrição

Orientador : Antonio Carlos Boschero / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T01:29:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_SilvanaAuxiliadoraBordinda_M.pdf: 2794180 bytes, checksum: a36289fea292edb0b2f888ff2a0df4b8 (MD5) Previous issue date: 1991 / Resumo: O presente trabalho teve como objetivo comparar os efeitos da glicose sobre a secreção de insulina e os fluxos de CA 2+, em ilhotas de ratos recém-isoladas ou mantidas em cultura. Para isto, ilhotas de ratos Wistar adultas foram isoladas por digestão com colagenase. Parte destas ilhotas foi mantida em cultura por 5 a 7 dias, numa mistura dos meios BME e DMEM, na proporção de 5/2 (v/v), Acrescida de 10% (v/v) de soro de boi recém-nascido, com concentração final de glicose de 10,5 nM. As ilhotas foram mantidas a 37°C, em atmosfera com 5% de CO2. O meio de cultura foi renovado a cada 48 horas. Imediatamente após o isolamento ou o cultivo, as ilhotas foram levadas 2 vezes com tampão bicarbonato. Para a execução dos protocolos, dois métodos foram utilizados: (a) Perfusão de ilhotas recém-isoladas ou cultivadas, para análise da dinâmica do efluxo do 45 CA e da secreção de insulina; (b) Incubação de células isoladas, provenientes de ilhotas frescas ou cultivadas, para medida da concentração itoplasmática de CA 2+, utilizando-se o Fura 2 como marcador do CA 2+. Os resultados mostraram que: 1. A capacidade da glicose em promover a secreção de insulina foi severamente reduzida nas ilhotas cultivadas. 2. Na ausência do CA2+ extracelular, a glicose provocou uma marcante redução no efluxo do 45CA, tanto em ilhotas recém-isoladas quanto em ilhotas cultivadas. ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The present study aimed at comparing the effects of glucose on ionic and secretoty events in freshly isolated and cultured rat pancreatic islets. For this pourpose islets from female adult fed Wistar rats were isolated by collagenase digestion. Part of these islets were cultured for 5 to 7 days in a mixture of BME basal medium and Dulbecco's modified medium used in a 5/2 volumetric ratio, and supplemented with 10% newborn calf serum to yield a final concentration of glucose close to 10.5 mM. The culture medium was renewed every 48 hours. The islets were maintained at 37ºC in a 5% C2 atmosphere. Immediately before the experiments, the freshly isolated or cultured islets were washed twice with a bicarbonate-buffered solution. The methods used were: (a) Perifusion of freshly isolated or cultured islets to measure the 45CA outflow and insulin release; (b) Incubation of isolated cells, obtained from freshly or cultured islets, to measure the citosolic CA 2+ concentration, using the Fura 2 as an intracellular CA 2+ indicator. The results show that: 1. The capacity of glucose to provoke insulin release was severely reduced in islets maintained in culture. 2. Wheter in freshly in isolated or cultured islets, glucose provoked a marked and sustained decrease in 45CA out-flow from islets deprived of extracellular CA 2+. ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Ciências Biológicas