Orientador: Everardo Magalhaes Carneiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T06:09:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_Fabiano_M.pdf: 3302549 bytes, checksum: c3ba9da824c1686ac3b1a46a714aeaa2 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Sabe-se que 50% da insulina secretada no periodo pós-prandial imediato depende da estimulação colinérgica e que no diabetes tipo 2, a fase rápida da secreção de insulina é a primeira a desaparecer. Ilhotas de ratos desnutridos também apresentam perfil de secreção de insulina sem o padrão bifásico. Até o momento, pouco se sabe a respeito da regulação autonômica, especialmente da modulação colinérgica da secreção de insulina, em ilhotas de Langerhans de ratos submetidos à restrição protéica. Assim, o presente projeto tem como objetivo estudar o efeito da restrição protéica sobre a modulação colinérgica da secreção de insulina em ilhotas isoladas de ratos. Os animais foram divididos em dois grupos experimentais, um grupo controle tratado com dieta normoprotéica (NP) (17%) e outro grupo desnutrido tratado com dieta hipoprotéica (LP) (6%). Após dois meses de desnutrição os animais foram sacrificados para o início dos experimentos. Nossos resultados indicaram que a dieta hipoprotéica induz uma diminuição na massa corpórea dos animais. A albuminemia está diminuída no grupo tratado com dieta hipoprotéica. O grupo LP mostrou níveis de ácidos graxos livres aumentados no plasma e redução dos níveis de proteínas totais em relação ao grupo NP, caracterizando o quadro de desnutrição. A insulinemia está reduzida nos animais LP e a glicemia mantida, sugerindo uma maior sensibilidade dos animais LP ao hormônio. A resposta secretória de insulina pelas ilhotas LP foi menor que a resposta secretória das ilhotas NP, quando estimuladas com o agonista muscarinico carbacol (CCh) e o forbol éster (PMA) em presença glicose (G). A curva dose resposta para o carbacol mostrou que as ilhotas de ratos submetidos a restrição protéica são menos sensíveis que as ilhotas dos animais controle (LP Ecso= 4.64:t0.98 e NP Ecso= 2.15:tO.70 (p<0.05)). Quando as ilhotas foram estimuladas com PMA (200"M) the increased in insulin secretion was higher in NP islets (3.04 fold for 8.3 mM ofG and 1.50 fold for 16.7 mM of G) (p<0.05). A monitoração do efluxo de cálcio mostrou um maior efluxo de cálcio nas ilhotas de animais LP estimuladas com CCh e PMA em presença de glicose. A técnica de imunohistoquímica, mostrou uma diminuição na quantidade da proteína quinase C alfa (pKCa) que foi confirmada utilizando-se a técnica de Western Blotting, onde encontramos PKCa e fosfolipase C betal (PLC_I) diminuídas em ilhotas isoladas de ratos LP (p<0.05). o RT -PCR mostrou uma diminuição na quantidade de mRNA para a enzima PKCa, o que nos sugeriu uma possível relação entre a restrição protéica a qual o animal foi submetido e alterações na transcrição de genes que codificam enzimas relacionadas com o processo secretório estimulado com glicose e potencializadas com CCh. Até o momento podemos concluir que, a alteração no conteúdo destas enzimas neste modelo experimental permite explicar, pelo menos em parte, a pobre resposta secretória encontrada frente a G, e a associação de CCh e PMA. Mais ainda, a restrição protéica efetuada no período pós desmame poderia estar induzindo modificações importantes em enzimas envolvidas com a transdução de sinais no sistema colinérgico da ilhota, repercutindo na fase adulta do animal. / Abstract: We studied the effects of carbamy1choline (CCh) and Phorbol 12-Myristate 13 Acetate (PMA), in insulin secretion of isolated Largerhans islets of male Wistar rats maintained with normal protein diet (17% of protein =NP) or low protein diet (6% of protein =LP). Islets isolated by collagenase digestion of pancreata, were incubated (lh) in Krebs medium with 8.3 mM or 16.7 mM of glucose (G), with or without CCh and PMA. The insulin content of media was available by radioimunoassay. Concentrations of CCh (O, l-I 000 j..lM) increased insulin secretion in both groups. Stimulation with CCh shifted the LP dose-response curve to the right (LP Ecso = 4.64:tO,98 and NP Ecso = 2.15 0,70) (p<0,05). When the islets were stimulated with PMA (20011M) the increased in insulin secretion was higher Ín NP islets (3.04 fold for 8.3 mM ofG and 1.50 fold for 16.7 mM of G) (p<0.05). Immunocitoquemical showed a decrease in PKCa content in LP islets and Western blot analysis revealed that PKCa and PLCf31 expression in LP isolated rat islets, after 2.5 h of incubation in 8.3 mM glucose media, were lower than NP (p<0.05) and RTPCR showed a decrease in rnRNA levels to PKCa (p<0.05). Low protein intake is associated with a lowered PKCa and PLCf31 expression in Langerhans islets. This alteration may be one factor involved in reduced insulin secretion by LP animals isolated islets, when stimulated with CCh and PMA in presence of glucose. / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Licio Augusto Velloso / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T04:07:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bertelli_DanielaFaleiros_D.pdf: 2445017 bytes, checksum: 2a78cdd0f1bc8fc197cb47c83deb0c0b (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A enzima fosfatidilinositol 3-quinase (PI3-kinase) exerce uma importante função na transdução dos sinais anorexigênicos e termogênicos enviados pela insulina e leptina em primeira ordem aos neurônios do núcleo arqueado no hipotálamo. A cascata de sinais intracelulares gerados pela ativação da PI3-kinase depende da atividade coordenada de inositol-fosfatases específicas. Neste trabalho, mostramos que a phosphoinositide-specific inositol polyphosphate 5-phosphatase IV (5ptase IV) está altamente expressa em neurônios do núcleo arqueado e lateral do hipotálamo. Submetido ao tratamento intracerebroventricular (ICV) com insulina, a 5ptase IV sofre fosforilação em tirosina de acordo com um padrão tempo-dependente, a qual segue os mesmos moldes da sinalização da insulina através do seu receptor (IR), seu substrato-2 (IRS2) e da PI3-kinase. Para avaliar a participação da 5ptase IV na ação da insulina no hipotálamo, trabalhamos com um oligonucleotídeo antisense específico para esta enzima. O tratamento dos ratos com este oligonucleotídeo durante quatro dias reduziu a expressão hipotalâmica da 5ptase IV em aproximadamente 80%. Tal fato foi acompanhado pela redução de 70% na sua fosforilação induzida pela insulina, e ainda pelo aumento na quantidade basal dos inositóis fosforilados no hipotálamo. Finalmente, a inibição da expressão da 5ptase IV no hipotálamo pelo oligonucleotídeo antisense, resultou na redução da ingestão média diária de alimentos, na perda de massa corporal e ainda na redução da ingestão alimentar em 12 horas. Desta forma, a 5ptase IV é um potente regulador da sinalização através da PI3kinase no hipotálamo e pode tornar-se um alvo interessante para a terapêutica da obesidade e para as desordens relacionadas / Abstract: The enzyme phosphatidylinositol 3-kinase (PI 3-kinase) exerts an important role in the transduction of the anorexigenic and thermogenic signals delivered by insulin and leptin to first-order neurons of the arcuate nucleus in the hypothalamus. The termination of the intracellular signals generated by the activation of PI 3-kinase depends on the coordinated activity of specific inositol phosphatases. Here, we show that phosphoinositide-specific inositol polyphosphate 5-phosphatase IV (5ptase IV) is highly expressed in neurons of the arcuate and lateral nuclei of the hypothalamus. Upon intracerebroventicular (ICV) treatment with insulin, 5ptase IV undergoes a time-dependent tyrosine phosphorylation, which follows the same patterns of canonical insulin signaling through the insulin receptor, IRS-2, and PI 3-kinase. To evaluate the participation of 5ptase IV in insulin action in hypothalamus, we employed a phosphorthioate modified antisense oligonucleotide specific for this enzyme. The treatment of rats with this oligonucleotide for four days reduced the hypothalamic expression of 5ptase IV by ~80%. This was accompanied by a ~70% reduction of insulin-induced tyrosine phosphorylation of 5ptase IV and by an increase in basal accumulation of phosphorylated inositols in the hypothalamus. Finally, inhibition of hypothalamic 5ptase IV expression by the antisense approach resulted in reduced daily food intake, body weight loss and decreased 12 h spontaneous food intake. Thus, 5ptase IV is a powerful regulator of signaling through PI 3-kinase in hypothalamus and may become an interesting target for therapeutics of obesity and related disorders / Doutorado / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Doutor em Fisiopatologia Medica

Orientador: Cesar Costapinto Santana / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-22T05:29:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cruz_JoelMesquita_M.pdf: 3075196 bytes, checksum: 14f575c3065110e2fa537bc466cdee75 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: A insulina é uma proteína de baixo peso molecular útil no tratamento da diabete. A insulina é obtida tradicionalmente do tecido pancreático suíno e bovino, e através de modificações químicas para transforma-la em insulina humana. Um das atuais fontes importantes de insulina humana consiste na produção através de bactérias e de técnicas de DNA recombinante. Uma vez que as impurezas contidas nas preparações de insulina provocam forte resposta imunológica nos pacientes, uma etapa de primordial importância na produção deste composto é a sua purificação. A adsorção e eluição em resinas são métodos particularmente adequados para a obtenção e recuperação eficiente com altos níveis de purificação dessa biomolécula. A utilização de leitos fixos e fluidizados de partículas contendo grupos funcionais baseados na troca iônica apresenta altas capacidades de adsorção com cinética favorável. A ampliação de escala do processo bem como o desenvolvimento de novos adsorventes trazem a necessidade da obtenção de dados de processo como a determinação de isotermas de adsorção, de curvas cinéticas e também de curvas de ruptura (curvas de ¿breakthrough¿) e de eluição. No presente trabalho foram determinadas as isotermas de adsorção utilizando experimentos em tanques agitados e em coluna de adsorção (leito fixo e leito expandido), bem como as curvas cinéticas e de ruptura para diversas concentrações de insulina utilizando-se a resina Accel Plus OMA como adsorvente... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Insulin is a low molecular weight protein widely used in the treatment of diabetes mellitus. Insulin preparations have traditionally been obtained from suine and bovine pancreatic tissue extracts chemically converted into human insulin. Human insulin may also be produced through recombinant DNA technology. Since impurities normally present in insulin preparations can cause serius immunological response, the use of adequate purification process is of fundamental importance in insulin production. In this context, process involving insulin adsorption on resins and the subsequent elution are suited for the recovery of highly purified insulin preparations. The use of fixed and fluidized beds containing ion exchangers is particularly suited for insulin purification, presenting high adsorptive capacity and favorable kinetic properties. The need for scaling up purification process and the development of new adsorbents involve the attainment of data related to adsorption isoterms as well as data concerning to the kinetic behavior of the system. In this work, experiments with insulin were carried out in order to assess the feasibility of the use of fluidized beds for the recovery and purification of this protein by adsorption on the ion exchanger resin Accel Plus QMA. Initially, the effect of the pH of the buffering solution was studied to determine the conditions of maximum insulin adsorption on the resin... Note: The complete abstract is available with the full electronic dissertations / Mestrado / Engenharia de Processos / Mestre em Engenharia Química

Orientador: Mario Jose Abdalla Saad / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-23T02:50:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_OlgaMariaFernandesde_D.pdf: 5088489 bytes, checksum: c39b531b63bc9ea9453d24625b77b369 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: A insulina, ao se ligar à subunidade a. de seu receptor heterotetramérico, dá inicio à uma série de ações imediatas e tardias, metabólicas e promotoras de crescimento. Tais eventos ocorrem através da estimulação da subunidade J3 transmembrana do receptor, que se autofosforila e ativa a fosforilação de substratos endógenos intracelulares, dos quais o mais estudado é o IRS-1. Esta proteína de peso molecular 185 kDa pode ser bem caracterizada como um substrato direto do receptor de insulina e quando fosforilada se associa à enzima fosfatidilinositol 3-quinase, ativando-a. Utilizando-se técnicas de immunoblotting com anticorpos anti-receptor de insulina, anti-IRS-1, antifosfotirosina e anti-PI 3-quinase é possível analisar o grau de fosforilação do receptor de insulina, da pp 185, do IRS-l, a concentração destas proteínas e a associação do IRS-1 com a PI 3-quinase, ou seja, as ações iniciais da insulina. Neste estudo investigamos estas três etapas da atividade insulínica no tecido adiposo em quatro modelos animais de resistência à insulina: o jejum prolongado, o envelhecimento, o uso agudo de adrenalina e o uso crônico de dexametasona. Foram utilizadas as técnicas de immunoblotting de extratos totais e de imunoprecipitação com anticorpos específicos. Os resultados demonstram que em todas as situações estudadas foram observadas reduções no grau de fosforilação do receptor de insulina, da pp185, do IRS-1 e na associação IRS-1/PI 3-K. É interessante ressaltar que nos animais idosos, além da redução no grau de fosforilação destas proteínas, houve uma diminuição marcante nos níveis protéicos do receptor de insulina e do IRS-1. Com exceção do jejum prolongado, os resultados obtidos são sinú1ares aos encontrados em tecidos hepático, muscular e renal. Tais achados sugerem que a regulação das ações insulínicas seja específica não somente em cada situação avaliada mas também em cada tecido. Outro dado importante deste estudo foi o encontro de uma proteína de peso molecular de 60 kDa, que se encontra fosforilada após o estímulo com insulina, de maneira semelhante ao receptor e à pp185 e que até o momento só tem sido evidenciada no tecido adiposo / Abstract: Insulin stimulates the tyrosine kinase activity of it' s receptor resulting in the phosphorylation of it' s cytosolic substrate, insulin receptor substrate 1 (IRS-l), which in tum associates with and activates PI 3-kinase. Using antipeptide antibodies to insulin receptor, to pp 185, to IRS-l, to PI 3-kinase and antiphosphotyrosine antibodies it is possible to study insulin-stimulated receptor autophosphorylation, pp 185 or IRS-l phosphorylation and the associationlactivation IRS-l/PI 3-kinase. It's also possible to quantify the leveI ofinsulin receptor and IRS-l. In the present study we have exa.min,ed this three early steps of insulin action in adipose tissue in four animal models of insulin resistance: 72 hours fasting (hipoinsWinemia), aging and effect of chronic treatment with dexametasone (hiperinsulinemia) and the effect of acute epinephrine treatment (normoinsulinemia). We use immunoblotting technics of total extracts and immunoprecipitates with specific antibodies. Fasting showed a deqrease in insulin receptor, IRS-l, pp 185 and pp 60 phosphorylation to 64 +/- 8% (p<0,05), 45 +/- 90,/0 (p<0,001), 40+/- 6% (p<0,001) and 17+/- 8% (p< 0,05), respectively. The IRS-l/ PI 3-K association was also decreased to 61'+/-13% (p<0,05). In old rats (20 months) we observed a decrease in IR and IRS-l protein levels to 8 +/- 3% (p<0,05) and 11 +/- 4% (p<0,05). There was a simultaneous decrease in IR, pp 185, IRS-l and pp 60 phosphorylation, after insulin stimulation, to 73 +/- 6% (p<0,05), 38+/-5% ~p<O,OOI), 20% and 64 +/- 10% (p<0,05), respectively. In the group of rats treated acutely with epinephrine our results demontrated also a decrease in the early events ef insulin action, mostly in protein phosphorylation , showing reductions to 60 :t 9% (p<0,05) in IR autophosphorylation, to 38 :t 9% (p<0,05) in pp 185 phosphorylation, to 50% in pp 60 phosphorylation and to 37 :t 3% (p<0,05) in IRS-l phosphorylation. IRS-l/PI 3-K interaction was reduced to 55% in this group. Finnaly, chronic (6 days) dexametasone treatment promoted a decrease in IR, pp 185, pp 60 and IRS-l phosphorylation levels to 61 :t 10% (p<0,001), 51 :t 8% (p<0,05), 50 :t 6% (p<0,05). These findings differs from other studies in hepatic, renal and muscular tissues, where in fasting there is an increase in this phase of insulin action, suggesting that the regulation of this early steps should be specific for each situation and tissue. Another important finding of this work is the evidence of a 60 kDa protein, phosphorylated after insulin stimulation, in a similar way to the receptor and it' s substrate. This protein is observed only in adipose tissue until the moment, was recently cloned and is now called IRS-3 / Doutorado / Medicina Interna / Doutor em Medicina

Orientador: Maria Alice Rostom de Mello / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-26T05:56:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Prada_FranciscoJoseAndriotti_M.pdf: 5275405 bytes, checksum: 6f7afeaab8f89a3df921843a387031ab (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: A desnutrição infantil pode predispor ao diabetes em adultos, pois afeta a secreção de insulina e o metabolismo de carboidratos. Por outro lado estudos com ratos mostram que a desnutrição protéica pode atenuar a manifestação do diabetes aloxânico. O presente estudo tem como objetivo ampliar o conhecimento sobre os efeitos da ingestão crônica precoce da dieta hipoprotéica sobre a ação diabetogênica da aloxana, em modelo experimental. Foram utilizados ratos Wistar (21 dias), separados em 2 grupos, de acordo com a dieta recebida: controle (C)- dieta normo (17%) e desnutridos (D)- dieta hipo (6%) protéica, por 60 dias. Ao final, parte dos animais recebeu injeção de aloxana (40mg/kg,i.v.) para indução do diabetes. Foram avaliados in vivo: ganho de peso corporal, glicemia basal, insulinemia basal, ingestão hídrica, ingestão alimentar, incidência de diabetes (glicemia > 13,75 mM), área sob a curva de glicose (AG) e insulina (AI), taxa de remoção da glicose (KITT), insulina do soro e do pâncreas. Em ilhotas isoladas tratadas in vitro com aloxana verificamos: secreção de insulina estimulada por glicose e por arginina e oxidação de glicose. O ganho de peso foi maior nos animais O (1,49 :!: 0,42) do que nos C (-0,57 :t 0,72 g). A glicemia basal foi menor nos D (106,6 :!: 5,86) que nos C (351,6 :!: 49,7 mg/dl) e a insulinemia semelhante nos 2 grupos (C= 0,80 :!: 0,10; 0= 1,05 :!: 0,12 ng/ml). A ingestão hídrica foi maior no grupo C (116,6 :!: 44,7) do que no O (81,9 :!: 14,7 ml/kg), assim como a ingestão alimentar neste grupo (C= 95,4 :!: 44,1; 0= 47,2 :!: 16,9 g/kg). A incidência de diabetes foi maior no C(84,6%) do que no 0(25%). A insulina do pâncreas foi maior no grupo O (36,52 :!: 11,88) do que no grupo C (12,05 :!: 4,65 ng/mL). A AG após administração de aloxana foi maior no grupo C(41889,9 :!: 9264) do que no grupo 0(17858,2 :!: 2974,5 mmol/U120 min.), não havendo diferença significativa entre os AI de ambos os grupos (C = 83,3:!: 13,6 e D = 78,4:!: 19,1 mmol/U120 min.). O tratamento com aloxana in vitro reduziu: (1) a liberação de insulina pelas ilhotas C (78%) e O (47%), estimuladas por glicose 22.0 mM; (2) a oxidação de glicose pelas ilhotas C (53%) e D (33%) na presença de glicose 16.7 mM e (3) a liberação de insulina pelas ilhotas C (53%) e D (33%) estimuladas por arginina (20.0 mM).Este resultados sugerem que a restrição protéica precoce atenuou a severidade do diabetes manifestado pelos animais em conseqüência de adaptações tanto no processo secretório de insulina pelas ilhotas pancreáticas quanto na ação periférica do hormônio / Abstract: In the present study we examined the effect of protein dietary levei on pancreatic function evaluated by measurements, of serum glucose levels in the fed state, serum glucose and insulin levels during an oral glucose tolerance test, and serum glucose levels during a subcutaneous insulin tolerance test performed after administration of a single endovenous, dose or alloxan to rats fed a low (6%) or a normo (17%) protein. In a separate set of experiments, we examined insulin release in response to glucose and arginine and glucose oxidation rates in pancreatic islets treated "in vitro" with alloxan, isolated from rats fed the low and the normo protein diets. After alloxan administration the incidence of mild hyperglycemia in the fed state (diabetes) was higher among rats fed normo protein diet than among those fed low protein diet. After glucose load the area under serum glucose cUlve (AG) was lower in low protein rats than in normal proteins rats, while then were no differences between the two groups in the area under serum insulin curve (AI). In addition, after an insulin load, the serum glucose disappearance rate (KITT) was higher in lower protein than in normal protein rats. Alloxan induced significant decrease in glucose oxidation and in glucose induced and arginine induced insulin release by islets isolated from normal and low protein rats. The decrease in both insulin release and glucose oxidation was greater in normo than in low protein rat islets. In summary, alloxan was less effective in producing hyperglycemia (diabetes) in rats fed low protein diet than normo protein diet. This protection was associated to an increased peripheral sensibility to insulin action and a better préservation of glucose oxidation and glucose induced insulin release by pancreatic islets exposed to alloxan in protein restricted than in normal protein rats / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores: Felix Guillermo Reyes Reyes, Licio Augusto Velloso / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-26T11:51:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reis_MariseAuxiliadoradeBarros_D.pdf: 5281331 bytes, checksum: 6c96857352a7bfbd197d71302dadb4d7 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Vários estudos têm demonstrado que o magnésio desempenha papel importante na homeostase glicêmica. Assim, no presente trabalho foi avaliado o efeito da deficiência de magnésio, da sua duração e da interação entre estes dois fatores na secreção e ação da insulina. Ratos foram alimentados com dieta deficiente em magnésio durante 6 (DF-6) ou 11 (DF-11) semanas e comparados com ratos alimentados com dieta controle durante os mesmos períodos de tempo (CO-6 e CO-11). Os ratos dos grupos DF-6 e DF-lI apresentaram níveis de magnésio sérico mais baixos do que os CO-6 e CO-lI, porém a homeostase glicêmica entre os grupos DF-6, CO-6 e CO-II não foi diferente. Os animais do grupo DF-lI apresentaram maior velocidade de decaimento da glicose (Kg) e redução da área total sob a curva de glicose, quando comparados aos animais dos grupos CO-6, CO11 e DF-6, assim como menor área total sob a curva de insulina quando comparados com os ratos CO-II e DF-6, indicando um aumento da sensibilidade à insulina. Com a finalidade de avaliar o efeito da suplementação de magnésio, ratos alimentados com dieta controle ou com dieta deficiente durante 6 semanas receberam, ao final desse período e durante 5 semanas adicionais, uma dieta suplementada com magnésio (grupos SCO e SDF, respectivamente). No grupo SDF os níveis de magnésio sérico, a velocidade de decaimento da glicose e áreas totais sob as curvas de glicose e insulina, não foram significativamente diferentes daqueles apresentados pelo grupo CO-lI, indicando que a suplementação com magnésio evitou o aumento da sensibilidade à insulina. Não foi verificada diferença na velocidade de decaimento da glicose (Kitt) durante o teste venoso de tolerância à insulina, assim como na sinalização da insulina no músculo e figado dos grupos DF-6 e CO-6. Entre os grupos alimentados durante 11 semanas, o DF-lI apresentou maior velocidade de decaimento da glicose, enquanto que este mesmo parâmetro nos grupos SDF e SCO não se diferenciou dos ratos CO-II. Nenhuma diferença foi observada na sinalização da insulina no músculo dos animais dos grupos CO-11, DF-lI e SDF. No figado de ratos DF-11, o nível protéico e o grau de fosforilação do receptor de insulina e do substrato-I desse receptor apresentaram-se aumentados, assim como verificou-se maior associação entre o substrato-I do receptor e a subunidade p85 do fosfatidilinositol 3-quinase, quando comparados com ratos CO-II. Nenhuma diferença foi encontrada nas etapas iniciais da ação da insulina nos grupos SDF e CO-ll. Estes resultados sugerem que as mudanças nas etapas iniciais da transmissão do sinal insulínico no figado, induzidas por diferentes níveis séricos de magnésio, podem ter um papel fundamental na homeostase glicêmica / Abstract: Numerous studies have demonstrated a major role for magnesium in insulin action and secretion. Therefore, we investigated the effect ofMg deficiency, duration of feeding, and the interaction between these factors on the secretion and action of insulin. Rats fed a Mgdeficient diet for 6 (DF-6) or 11 (DF-lI) weeks, and rats fed a control diet for the same periods (CO-6 and CO-ll groups) were compared. DF-6 and DF-lI rats had serum Mg levels lower than the control groups, but no change in glucose homeostasis was observed among DF-6, CO-6 and CO-II rats. DF-lI rats showed a greater glucose desappearance rate (Kg) and a reduced total area under the glucose curve compared to CO-6, CO-II and DF-6 rats, as well as a reduced total area under the insulin curve compared to the CO-ll and DF-6 rats, indicating increased sensitivity to insulin. In order to evaluate the effect of supplementation, rats fed a control or Mg-deficient diet for 6 weeks were then fed a Mgsupplemented diet for 5 weeks (SCO and SDF groups, respectively). In the SDF rats, the serum Mg levels, glucose disappearance rate and total area under the glucose and insulin curves were restored to control values, indicating that the Mg supplementation prevented the increase in sensitivity to insulin. No differences were found in the glucose desappearance rate during an i. v. insulin tolerance test (Kitt), as well as in the insulin signaling in muscle and liver ITom DF-6 and CO-6. Among the groups of rats fed for 11 weeks, the DF-ll group had a significantly greater glucose desappearance rate while the rate of the SDF and SCO groups did not differ ITom CO-II rats. No differences were observed in muscle insulin signaling of rats ITom the CO-ll, DF-lI and SDF. In DF-ll rats, insulin receptor and insulin receptor substrate-I protein and phosphorylation levels were elevated in liver and there was a greater association between the insulin receptor substrate-I and p85 subunit of phosphatidylinositol 3-kinase compared with CO-II rats. No diferences were found in the early steps of insulin action in SDF and CO-II rats. These results suggest that the changes in the early steps of insulin signal transduction in the liver, induced for different serum Mg levels, may play an important role in the glucose homeostasis / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores: Licio Augusto Velloso, Mario Jose Abdalla Saad / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-26T22:47:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernandes_MariaLuizadeLimaAguilar_D.pdf: 2848766 bytes, checksum: 4e790a5436936ff2a950c65443b1ea1c (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: A insulina, agindo através do seu receptor (IR) pertencente à família dos receptores com atividade tiro sina quinase, desencadeia uma série de respostas tecido-específicas mediadas por diferentes vias intracelulares. Uma destas vias, com atividade predominantemente ligada a crescimento celular e mitogênese envolve as proteínas SHC e GRB2. No presente estudo avaliou-se a sinalização da insulina através da vias SHC/GRB2 em sistema nervoso central (SNC) de ratos. Inicialmente determinou-se presença e quantidades de IR, SHC e GRB2 em córtex cerebral e cerebelar. As três proteínas foram encontradas em concentrações similares em ambos os tecidos. Entretanto, quando os animais experimentais foram submetidos a tratamento agudo com insulina detectou-se aumento significativo da fosforilação de IR e SHC e da associação SHC/GRB2 somente em cerebelo e não em córtex cerebral. Em seguida avaliou-se a variação da concentração de IR, SHC, GRB2 e da tirosina fosfata'Se SHP2, desde o primeiro dia até a sexagésima semana de vida. Com relação ao nível de expressão protéica somente SHP2 sofreu queda significativa no período avaliado, mantendo-se as demais proteínas em níveis estáveis. Sob tratamento agudo com insulina observou-se que no decorrer do período avaliado ocorreu uma queda progressiva da fosforilação basal ou insulino-dependente de IR e SHC e da associação entre SHC/GRB2 tanto em cérebro quanto em cerebelo. Conclui-se que elementos participantes de uma das vias intra-celulares de sinalização da insulina estão presentes em SNC, que sua atividade sofre modulação de acordo com a idade e que existem diferenças funcionais entre córtex cerebral e cerebelar na resposta à insulina / Abstract: Insulin, acting through its protein tyrosine kinase receptor (IR), induces a series of tissue specific responses that are mediated by different intracelIular pathways. One of these pathways, which promotes mitogenic and growth-related effects involve SHC and GRB2. In the present study insulin signaling was evaluated through the SHC/GRB2 pathway in the central nervous system (CNS) of rats. InitialIy we determined the presence and amounts of IR, SHC and GRB2 in forebrain cortex and cerebelIum. AlI three proteins were found at similar concentrations in both tissues. However, when the experimental animaIs were submitted to treatment withinsulin we found significant increase in IR and SHC phosphorylation and SHC/GRB2 association only in cerebelIum, but not in forebrain cortex. Next we determined the IR, SHC, GRB2 and SHP2 concentrations during postnatal development. Conceming protein expression, only SHP2 was shown to suffer a progressive falI from day one to week sixty of life. When acutely treating with insulin, we observed a progressive, time-dependent decrease on both basal and insulin-stimulated phosphorylation of IR and SHC and SCH/GRB2 association in forebrain cortex and cerebelIum. We conclude that, the elements involved in the intracelIular pathway of insulin signaling are present in the CNS, their functional status suffer variation with age and there is a site-specific variation in the response to insulin / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Jose Antonio Rocha Gontijo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-27T19:04:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bento_LedaMarciaAraujo_M.pdf: 17253398 bytes, checksum: 38309f627a5fda170814382179301447 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: A acidose metabólica crônica induzida por cloreto de amônia tem sido relacionada como fator de crescimento renal. No presente estudo, investigou-se a manipulação tubular renal de sódio e alguns passos de vias ligadas ao crescimento celular e expressão gênica em tecido renal de ratos, após a indução de acidose metabólica através da administração de NH4Cl. O estudo da função renal de ratos acidóticos, foi estimado pelo clearance de creatinina e pelo clearance de lítio, respectivamente para avaliar a taxa de filtração glomerular e a manipulaçãorenal de sódio. Utilizando-se da técnica de imunoprescipitação e immunoblotting, avaliamos o grau de fosforilaçãopré-estímulo e pós-estímulo insulínico, do receptor de insulina (IR), do substrato do receptor de insulina (IRS-l), bem como de algumas proteínas relacionadas às vias de crescimento: Shc, GrB2 e pErK, em tecido renal. Após a administração por 10 dias de NH4Cl,verificamos um aumento significativo no peso renal (Co= 0,28 g/lOOg vs Ac= 0,32g/1O0g) dos animais acidótico quando comparados aos grupos controle. A acidose promoveu um aumento sustentado da excreção fracional de sódio e potássio, as quais foram acompanhados por uma significativa elevação da fração de excreção fracional proximal e pós-proximal destes íons. Essa diferença ocorreu embora não tenha sido observada modificações significativas na filtração glomerular e na carga filtrada de sódio. Observamos que a expressiva excreção renal de sódio associada ao aumento do peso renal, são processos que competem pela disponibilidade de energia nas células tubulares dos néfrons, priorizando o crescimento (hipertrofia), em detrimento do transporte transmembrana de eletrólitos e água. Estas alterações podem ser o resultado de uma relação recíproca entre a síntese de proteínas, o metabolismodos túbulos renais e o transporte tubular de sódio. Os efeitos da maioria dos fatores de crescimento se fazem por receptores tirosina-quinase de alta afinidade (RTK). A estimulação extracelular ativa proteínas de sinalização em domínios citoplasmáticos, resultando na homodimerização do receptor e numa autofosforilação em resíduos tirosina. Esta fosfotirosina torna-se sítio seletivo de ligação para proteínas como as com homologia para o proto-oncogene src-2 (SH-2). Estes estímulos promovem uma ativação em cascata de um grande número de moléculas sinalizadoras intracelulares, incluindo as fosfolipases, fosfotidilinositol 3-quinase (pI 3-quinase), ErKl e ErK-2 quinases (complexoMAP quinases),entre outras. A ativação destas vias de sinalização levam a mudanças na expressão gênica e no estado fenotípico das células. Aventa-se a possibilidade de que fatores circulantes bem como a secreção parácrina de fatores de crescimento possam ter alguma função sobre o crescimento renal nesta situação experimental influenciando paralelamente os passos iniciaisda ação insulínica. Na avaliação da expressão de algumas vias conhecidas de regulação metabólica e crescimento (IR, IRS-l e Complexo MAPK quinase), verificamos um marcante aumento no nível de fosforilação basal nos animais acidóticos quando comparados aos grupos controle e pair-fed. Após estímulo, foi observado um maior aumento no nível de fosforilação dos animais dos grupos controle e pair-fed , visto que nos animais acidóticos a atividade basal já estava significativamente aumentada. Resultado similar, foi observado com o anticorpo anti-IRS-l. Para os resultados da imunoprescipitaçãocom anticorpo anti-Shc, foi verificado alterações somente pós-estímulo insulínico. A Atividade GrB-2 basal apresentou um aumento significativo nos animais do grupo pair-fed em relação aos acidóticos. Após administração de insulina verificamos um aumento indistinto do grau de fosforilação em todos os grupos estudados.(controle, acidóticos e pair-fed). Analisando a resposta das proteínas do complexo MAPK (pErK) basal e pós-estímulo verificamos uma fosforilação significativamentemaior nos acidóticos no período basal com uma maior resposta neste grupo após administração de insulina. Com nossos resultados aventamos a hipótese de que a acidose metabólica ou o aumento da amoniogênese renal, possa constituir em sinais precoces de disfunção renal, podendo corresponder a um gatilho modulador que induza uma resposta reparadora celular através da estimulação de receptores ou pós-receptores celulares vinculados à vias de crescimento e diferenciação / Abstract: There is a surprising lack of experimental data on mechanisms of systemic metabolic acidosis cause disturbances in blood pressure, renal sodium handling and renal growth. Paucity studies have indicated that a systemic metabolic acidosis causes a decrease in salt and water reabsorption in the kidney. To evaluate the metabolic acidosis effect on blood pressure and renal events, we compared three distinct groups of Wistar-Hannover rats: 1) control, Co; 2) NH4Cl-treated, Acidotic and 3) pair-fed, PF, rats. Separate groups of rats were housed individually in standard stainless-steel cages in temperature and humidity controlled room with a 12-h light-dark cycle. The following study was undertaken on male, unrestrained and unanesthetized rats (weighting 200-250 g) to investigate the effects of a chronic, NH4Cl-induced metabolic acidosis on the glomerular filtration rate and renal handling of sodium estimate respectively by creatinine and lithium clearance. The present study shows that chronic acidosis (blood pH, 7.16 ± 0.13) caysed a sustained increase in renal ftactional sodium excretion (267.9 ± 36.4%), accompanied by a rise in the fractional proximal (113.3 ± 3.6%) and post-proximal (179.7 ± 20.2 %) sodium and ftactional K+ (163.4 ± 5.6%) excretions when compared to pair-fed rats. These differences occurred in spite of na unchanged arterial blood pressure, creatinine clearance and sodium filtered 1000. On the other hand, a body growth impairment was observed in the acidotic (control, 258 ± 3.7 g vs acidotic, 232 ± 4.6 g) and pair-fed rats (225 ± 3.6 g), whereas there was significant enhance in the kidney weights in acidotic rats (1.73 ± 0.05 g) compared to other experimental groups (control, 1.46 ± 0.05 g); pair-fed (1.4 ± 0.05 g). This altered renal sodium handling and potassium excretion may result from a reciprocal relationship between tubular metabolic pathway stimuli and ion transport. Growth hormone and peptides stimulates the tyrosine kinase activity of its receptor, resulting in the phosphorylation of its cytosolic substrate, insulin receptor substrate 1 (IRS-l). IRS-l is also a substrate for different peptides and growth factors. This leads to downstream activation of a number of common signaling molecules involved in changes in gene expression, protein synthesis and in the phenotypic state of the cell. However, the role of these intracellular signaling pathways in NH4Cl-induced acidosis kidney hypertrophy was not investigated. In current study demonstrated tOOtmetabolic acidosis induced by NH4Cl cause an increased basal insulin receptor (pF: 83,4 ± 20 vs Acidotic:159,3± 88 ), IRS-1 (PF:157,6 ± 31 vs Acidotic:154,2 ± 30) and MAPK kinases (PF: 130,9 ± 31 vs Acidotic:152,8 ± 22 ) phosphorylation levels in kidney. Purther studies are required to investigate which factors, probably paracrine ones, regulate these cytosolic pathways associated with the acidosis-induced renal hypertrophy and the involvementofkidney vicariance on functional response / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador : Adilson Leite / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T02:27:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Parizotto_EneidaAbreu_D.pdf: 4976173 bytes, checksum: 7a2e225e15981e640002d110203d7495 (MD5) Previous issue date: 2001 / Doutorado

Orientador: Kleber Gomes Franchini / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-28T10:15:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tambascia_RosaCristina_M.pdf: 17822989 bytes, checksum: c7bb549facb465f6ab7a5dc716c122e6 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: A angiotensina II é um importante hormônio regulador das funções renal, cardíaca e vascular, exercendo seus efeitos através de seus receptores transmembrana. Tem importância central no controle da pressão arterial e da volemia e pode estar envolvida na fisiopatogênese da hipertensão arterial. Por outro lado, evidências clínicas e epidemiológicas indicam que a resistência à insulina coexiste com a hipertensão em mais de 50% dos pacientes hipertensos. Esta associação tem sido interpretada como uma indicação de relação causal entre resistência à insulina e a hipertensão arterial. No presente estudo, examinamos o efeito da angiotensina II na sensibilidade à insulina e alguns dos possíveis mecanismos moleculares envolvidos. Ratos Wistar, machos, receberam infusões de angiotensina II (doses de 10 e 40 nglkg/min) e salina (controles) por 6 dias consecutivos. A pressão arterial foi monitorada batimento-batimento em registros diários de uma hora de duração e a sensibilidade à insulina avaliada pelo ITT (teste de Tolerância à Insulina) no quinto dia de infusão. Ao final do sexto dia de infusão de angiotensina II, a insulina plasmática foi dosada. Os animais receberam uma injeção aguda de insulina (6J.lg) e os tecidos (figado e músculo esquelético) foram retirados e homogeneizados após 90 segundos da injeção de insulina. Os extratos teciduais foram submetidos à imunoprecipitação com anticorpos específicos para receptor de insulina (IR) e substrato 1 e 2 do receptor de insulina (IRS-l e IRS-2). O produto desta imunoprecipitação foi separado através de eletroforese em SDS-PAGE e transferido para membrana de nitrocelulose. As proteínas foram então marcadas com anticorpos específicos e associado à proteína A ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: We have examine the influence of long-term infusion of angiotensin II (AII) on insulin sensitivity and action on liver and skeletal muscle of rats. Rats were continuously infused with saline or AlI-lO and 40 ng/kg/min for 6 consecutive days. Arterial pressure (AP) was daily monitored with a computer system (1 hour, beat-to-beat). Insulin sensitivity was evaluated by insulin tolerance test (ITT) performed at the 5th day of AII or saline infusion. Insulin plasma levels were determined at the end of the 6th infusion day. Insulin induced tyrosine phosphorylation of insulin receptor (IR), insulin receptor substrates 1 and 2 (lRSI, IRS2) were evaluated in liver (L) and skeletal muscle (M) at the 6th experimental day...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica