Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento / INTRODUCCIÓN: La periodontitis crónica es una enfermedad de origen infeccioso caracterizada por la interacción entre bacterias patógenas y mecanismos de defensa del hospedero. Se ha demostrado que las citoquinas IL-6, IL-21, y TGF-β participan en la diferenciación de células Th17, mientras que TGF-β , en ausencia de las otras mencionadas, induce la diferenciación de células Treg. Esto indica una fuerte relación entre células Th17 y Treg: si se favorece la producción de las primeras se fomenta la destrucción tisular, mientras que las Treg, se asocian a una respuesta protectora para los tejidos. El objetivo de este trabajo fue identificar a IL-21 y cuantificar los niveles de IL-21, IL-17, IL-6, IL-10 y TGF-β en fluido gingival crevicular (FGC) de sujetos con periodontitis crónica e individuos periodontalmente sanos. METODOLOGÍA: Se seleccionaron 20 sujetos sin periodontitis y 20 con diagnóstico de periodontitis crónica según criterios de inclusión y exclusión. Se obtuvieron muestras de FGC usando tiras de papel en sacos ≥ 5mm en enfermos, y en sitios sin signos clínicos de inflamación ni destrucción periodontal en el grupo control. La presencia de las citoquinas se determinó mediante Western-blot, y la cuantificación se realizó mediante test de ELISA. Los valores obtenidos fueron analizados con los test estadísticos correspondientes (Shapiro-Wilk y MannWhitney), considerando un p<0,05 como estadísticamente significativo. RESULTADOS: Al realizar el Western-blot fue posible identificar todos los mediadores inflamatorios mencionados. Los niveles detectados de IL-6 (1,27(1,70) pg/mL v/s 7,66(7,66) pg/mL), IL-21 (16,16(13,75) pg/mL v/s 11,38(3,21) pg/mL) e IL-10 (48,0(55,33) pg/mL v/s 4,67(7,33) pg/mL) fueron mayores en muestras de sujetos con periodontitis crónica, con una diferencia estadísticamente significativa respecto a los sanos. IL-17 (156,52(164,35) pg/mL) y TGF-β (6,92(9,63) pg/mL) fueron medibles en FGC de enfermos, pero indetectables en el de sujetos sanos. CONCLUSIÓN: Los resultados obtenidos indican que existe un desbalance entre las citoquinas relacionadas con Treg y Th17 en el FGC de individuos enfermos, con respecto a sujetos periodontalmente sanos. Esto podría ser un indicio del posible desequilibrio de estas células en periodontitis crónica, con una t endencia a la diferenciación de Th17 y, por ende, a la inflamación y destrucción tisular característica de esta patología.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-28 / A resposta inflamatória é modulada durante a sepse e a regulação positiva ou negativa da atividade celular depende das células e funções avaliadas. IFN-γ e IL-17 são citocinas características das subpopulações de linfócitos Th1 e Th17, respectivamente, e desempenham papel importante na resposta imune, ligando a imunidade inata e adaptativa. Objetivo: Avaliar a presença das células Th1 e Th17 em pacientes sépticos na admissão do estudo (D0) comparado-a com sadios e após 7 dias (D7) de seguimento. Casuística e Métodos: Foram incluídos 59 pacientes sépticos no D0, dos quais 31 tiveram amostras colhidas no D7, e 30 indivíduos sadios. As células mononucleares do sangue periférico foram separadas e congeladas em nitrogênio líquido. Após descongelamento e ajuste da concentração para 1x106 células/mL, as células foram estimuladas ou não com PMA/ionomicina e mantidas por 30 minutos em estufa a 37ºC a 5% CO2. Foi acrescentado brefeldina A e incubadas por mais 15 horas. Em seguida, foi feita marcação de superfície para a identificação dos linfócitos TCD4 (CD3+CD8-). As células foram permeabilizadas e marcadas para detecção de IL-17A e IFN-γ intracelular. As amostras foram lidas em citômetro FACSCanto e analisadas no programa FlowJo. Resultados: A produção basal de IFN-γ e IL-17A foi maior nos pacientes comparado aos sadios (P=0,002 e P<0,001, respectivamente). Após estímulo, a produção de IL-17A foi maior nos pacientes (P=0,027) enquanto a de IFN-γ foi superior nos sadios (P=0,001). Ao comparar os diferentes estadios da sepse, foi observado aumento na produção de IFN-γ após estímulo com PMA/ionomicina nos pacientes em choque séptico em relação aos pacientes em sepse grave (P=0,039). A produção de IFN-γ basal e após estímulo mostrou-se aumentada no D7 em relação ao D0 (P=0,007 e P=0,018, respectivamente). Em contraste, a produção de IL-17 após estímulo foi maior no D0 comparado ao D7 (P=0,003), mas não foi encontrada diferença significativa na condição basal. Nos pacientes que evoluíram a óbito, as amostras do D0 apresentaram menor produção constitutiva de IFN-γ em relação ao D7 (P=0,023), mas após estímulo não foi encontrada diferença. Nos pacientes que sobreviveram, não houve diferença na condição basal e após estímulo com PMA/ionomicina. A produção de IL-17, após estímulo foi maior na amostra D0 em relação ao D7 (P=0,006) nos pacientes que sobreviveram, já na condição basal não houve diferença. Os pacientes que evoluíram a óbito não apresentaram diferença na condição basal e após estímulo com PMA/ionomicina. Conclusão: Os resultados basais com maior produção de citocinas nos sépticos refletem o grau de inflamação característico da sepse. Observamos uma dicotomia entre as respostas Th1 e Th17 após PMA/ionomicina nos pacientes sépticos, com aumento da população Th17 e diminuição da Th1 em relação aos sadios. Aumento da população Th1 no D7 foi relacionado com mortalidade, enquanto diminuição da população Th17 foi relacionada com sobrevida, indicando que a persistência ou exacerbação das respostas Th1 e Th17 podem ser deletérias. Estes achados sugerem regulação da resposta inflamatória na sepse das populações Th1 e Th17. / The inflammatory response is modulated during sepsis and up or down regulation of cell activity depends on cells and functions evaluated. IFN-g and IL-17 are cytokines characteristics of lymphocyte subsets Th1 and Th17, respectively, and play an important role in immune response, linking innate and adaptative immunity. Objective: To evaluate the presence of Th1 and Th17 cells in septic patients at admission of the study (D0) compared it with healthy volunteers and after 7 days (D7) follow-up. Material and Methods: We included 59 septic patients on D0, of which 31 had samples collected on D7, and 30 healthy individuals. The peripheral blood mononuclear cells were separated and frozen in liquid nitrogen. After thawing and adjust the concentration to 1x106 cells/mL, cells were stimulated or not with PMA/ionomycin for 30 minutes and maintained at 37oC 5% CO2. Brefeldin A was added and cells were incubated for another 15 hours. Then cells were surface stained for identification of TCD4 lymphocytes (CD3+CD8-). Cells were permeabilized and stained for detection of IL-17A and IFN-g intracellular. The samples were read in FACSCanto cytometer and analyzed with FlowJo program. Results: The basal production of IFN-g and IL-17A was higher in patients compared to healthy volunteers (P=0,002 e P<0,001, respectively). After stimulation, the production of IL-17A was higher in patients (P=0,027) while the IFN-g was higher in healthy (P=0,001). An increase IFN-g production after stimulation with PMA/ionomycin was found in patients with septic shock compared to severe sepsis (P=0,039). The baseline production of IFN-g and after PMA/Ionomycin stimulation was found to be increased in D7 in relation to D0 (P=0,007 e P=0,018, respectively). In contrast, the production of IL-17 after stimulation was higher in D0 compared to D7 (P=0,003). In patients who died, the D0 samples showed lower constitutive IFN-g production compared to D7 (P=0,023), but after a stimulus, no difference was found. In patients who survived, there was no difference at baseline and after stimulation with PMA/ionomycin. The IL-17 production, after stimulation, was higher in D0 sample compared to D7 (P=0,006) in patients who survived. No difference between D0 and D7 was found in patients who survived. Conclusion: The results with higher basal detection of IFN-g and IL-17 producing cells in septic patients reflect the degree of inflammation characteristic of sepsis. A dichotomy between Th1 and Th17 responses after PMA/ionomycin stimulation was found in septic patients, with increased Th17 population and decreased Th1 compared to healthy individuals. A higher proportion of Th1 in D7 was observed in patients who died; while a decrease of Th17 population was observed in patients who survived, indicating that the persistence or higher Th1 and Th17 responses may be deleterious. These findings suggest regulation of the inflammatory response in sepsis of Th1 and Th17 populations. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:33:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-15. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:47:57Z : No. of bitstreams: 1 000830096.pdf: 323394 bytes, checksum: d31a089f3bf47b648bbfdf120de818b3 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da periodontite apical e/ou doença periodontal associadas à diabetes na quantificação sérica da citocina pró-inflamatória IL-17 e na glicemia. Foram utilizados 80 ratos da linhagem Wistar divididos em 8 grupos de 10 ratos: G1 - ratos normoglicêmicos ; G2 - ratos com infecção endodôntica; G3 - ratos com infecção periodontal; G4 - ratos com infecção endodôntica e periodontal; G5 - ratos diabéticos; G6 - ratos diabéticos com infecção endodôntica; G7 - ratos diabéticos com infecção periodontal; G8 - ratos diabéticos com infecção endodôntica e periodontal. A diabetes foi induzida pela aplicação de estreptozotocina via veia peniana, cujo desenvolvimento da doença foi confirmado no sexto e último dia do experimento pela avaliação glicêmica no sangue por meio de uma punção na extremidade da cauda do animal, seguida de pequena compressão para a obtenção de uma gota de sangue. A infecção endodôntica foi induzida pela exposição pulpar do primeiro molar superior direito. A infecção periodontal foi induzida por meio da confecção de uma amarria junto ao colo dentário do segundo molar superior esquerdo. Com 30 dias pós-operatórios foi realizada a glicemia novamente e a coleta de sangue pela punção cardíaca para a quantificação da citocina IL-17 empregando a técnica de ELISA de captura. Os resultados foram analisados do pelo teste de análise de variância e teste de Tukey (p<0,05). O nível glicêmico foi maior em ratos diabéticos quando comparados com ratos controle aos 6 e 30 dias (p<0,05). Entretanto, aos 30 dias nos grupos de ratos diabéticos, observou-se que a presença da infecção periodontal isolada (G7) ou associada à endodôntica (G8) aumentou de forma significante a glicemia quando... / The aim of the study was to evaluate the influence of periapical lesions and/or periodontal disease on the IL-17 serum and dosage glycemic a rat model of diabetes mellitus. Eighty male Wistar rats were divided into eight groups of ten animals each: normal rats (G1), rats with pulpal infection (G2), rats with periodontal disease (G3), rats with pulpal infection and periodontal disease (G4), diabetic rats (G5), diabetic rats with pulpal infection (G6), diabetic rats with periodontal disease (G7), diabetic rats with pulpal infection and periodontal disease (G8). Diabetes was induced using streptozotocin, pulpal infection were induced by dental pulp exposure to the oral environment and the periodontal disease by periodontal ligature. Blood glucose was measured by means of a perforation in the tail of the animal after 0, 6 and 30 days post-operative. The animals were sacrificed after 30 days and the IL-17 levels were measured by ELISA. The total assessed values was tabulated according to each experimental group and statistically analyzed by analysis of variance (ANOVA) followed by Tukey test (p<0.05). Glucose levels were higher in diabetic rats compared to control rats at 6, and 30 days (p <0.05). However, at 30 days, and among the groups of diabetic rats, it was observed that the presence of periodontal infection alone (G7) or associated with endodontic (G8) increased significantly the blood glucose compared to diabetic rats without oral infections (G5 ) (p <0.05). The presence of systemic disease diabetes was not able to increase the level of serum IL-17 (p <0.05). However, the presence of the associated oral infections (G4, G8) significantly elevated the serum level of IL-17, regardless of the presence of diabetes (p <0.05). It can be concluded that the endodontic infection when associated with periodontal disease may increase blood glucose levels in diabetic rats and the serum level of IL-17 in normoglycemic or diabetic rats

La periodontitis es una enfermedad infecciosa de naturaleza inflamatoria, que involucra una respuesta inmune del hospedero y que se caracteriza por la destrucción de los tejidos de inserción del diente. Numerosos estudios han determinado que el infiltrado inflamatorio de la enfermedad se caracteriza por un predominio de células de la línea linfocitaria, principalmente linfocitos T. En otras enfermedades de naturaleza inflamatorio-destructivas, como la artritis reumatoide, se ha evidenciado un rol central de los linfocitos T en el perfil de citoquinas relacionado con la destrucción de los tejidos articulares y se ha propuesto que IL-17 regularía la diferenciación y activación de las células clásticas responsables de la destrucción del cartílago y hueso articular. Con el objeto de estudiar si existe asociación entre IL-17 y periodontitis, se determinaron los niveles de IL-17 en 16 individuos con periodontitis crónica y en 8 individuos periodontalmente sanos tanto en muestras biológicas de fluido gingival crevicular (FGC) como en los sobrenadantes de células mononucleares extraídas de biopsias de tejido gingival (CMG). Las muestras de FGC y los sobrenadantes de cultivos celulares de CMG fueron analizadas para determinar la presencia y síntesis de IL-17 mediante ELISA. En el FGC y los sobrenadantes de cultivo de CMG de individuos con periodontitis crónica se observó una presencia y síntesis significativamente mayor de IL-17 en comparación a individuos periodontalmente sanos. De estos resultados se puede concluir que IL-17 se encuentra sobreexpresada en individuos con peridontitis crónica y contribuiría a explicar, por lo menos en parte, los fenómenos etiopatogénicos involucrados en la destrucción del tejido óseo alveolar ocurrido en la periodontitis.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento / ntroducción: La periodontitis crónica es una enfermedad inflamatoria iniciada por patógenos específicos como Porphyromonas gingivalis (Pg), que activan la respuesta inmune del hospedero. IL-17 es una citoquina pro-inflamatoria asociada con la destrucción periodontal, TGF-β1, es una citoquina asociada a la regulación de la respuesta inmune. El objetivo de este estudio fue evaluar la síntesis de IL-17 y TGF-β1 en tejido gingival inflamado estimulado con Pg. Materiales y métodos: Se seleccionaron 10 sujetos con diagnóstico de periodontitis crónica, de acuerdo a estrictos criterios de inclusión y exclusión. Se identificó el sitio periodontalmente más afectado en cada individuo y se tomó una muestra de placa subgingival; se realizó un cultivo microbiológico y se contaron las unidades formadoras de colonias (UFC/ml) de bacterias pigmentadas de negro (BPN). Se recolectó una biopsia de tejido gingival (del mismo diente de donde se tomó la muestra microbiológica), esta fue seccionada en fragmentos de 1mm aproximadamente, luego el total de la muestra se dividió en tres partes. Una parte fue estimulada con Pg ATCC 33277 por 24 horas, la cantidad de Pg utilizada para estimular se calculó basada en las UFC/ml de BPN obtenidas anteriormente. Otra parte se estimuló con Fitohemaglutinina como control positivo y la parte restante se dejó sin estímulo. Se determinaron los niveles de IL-17 y TGF-β1 mediante ELISA. Los niveles de cada citoquina en tejido estimulado con Pg y sin estimular se compararon mediante t-test no pareado, considerando un p < 0,05 como estadísticamente significativo Resultados: Se detectó IL-17 y TGF-β1 en todas las muestras de tejido gingival de los individuos en el estudio. Los niveles de IL-17 fueron mayores en el tejido estimulado con Pg (0,28±0,10 pg/mg) respecto al tejido sin estímulo (0,17±0,07 pg/mg) al normalizar los valores por peso de tejido (p=0,014). Al normalizar los valores por cantidad de proteínas en el tejido, los niveles de IL-17 estaban aumentados en tejido estimulado con Pg (0,012±0,007 pg/µg) respecto al tejido sin estimular (0,017±0,006 pg/µg) (p=0,053). Los niveles de TGF-β1 fueron mayores en el tejido estimulado con Pg (0,25±0,12 pg/mg) respecto al tejido sin estímulo 3 3 (0,12±0,07 pg/mg) al normalizar los valores por peso (p=0,017). Al normalizar por cantidad de proteínas en el tejido, los niveles de TGF-β1 estaban aumentados en tejido estimulado con Pg (0,019 pg/µg) respecto al tejido sin estimular (0,012±0,009 pg/µg) (p=0,035). Conclusiones: IL-17 y TGF-β1 están presentes en el tejido gingival de individuos con periodontitis crónica. Pg induce un aumento en los niveles de IL-17 y TGF-β1 en tejido gingival de pacientes con periodontitis crónica.

Orientador: Luciano Tavares Angelo Cintra / Banca: Caio Cesar Randi Ferraz / Banca: João Eduardo Gomes Filho / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da infecção endodôntica associada ou não à diabetes, nos níveis da citocina pró-inflamatória IL-17, nos tecidos periapical, hepático e renal de ratos Wistar. Foram utilizados 40 ratos machos divididos em quatro grupos contendo 10 animais cada grupo: ratos normoglicêmicos (N); ratos normoglicêmicos com periodontite apical (N-PA); ratos com diabetes experimental (DE); ratos com diabetes experimental e com periodontite apical (DE-PA). A diabetes foi induzida por meio da administração de estreptozotocina via veia peniana. Foi realizada avaliação glicêmica, para confirmar o desenvolvimento da doença, no sexto e no último dia do experimento. A infecção endodôntica foi induzida por meio da exposição pulpar do primeiro molar superior direito ao meio bucal. Após 30 dias, foram coletados o fígado e o rim, para a quantificação da IL-17 pelo método ELISA, bem como a hemi-maxila direita para a quantificação da IL-17 pela técnica imunoistoquímica. Os valores obtidos nos testes paramétricos foram tabulados e analisados, estatisticamente, por meio dos testes de análise de variância (ANOVA) e teste de Tukey (p<0,05). Os valores obtidos em scores foram analisados, estatisticamente, por meio dos testes de Kruskal-Wallis e teste de Dun (p<0,05). Os resultados mostraram que os ratos diabéticos (DE e DE-PA) apresentaram maior quantidade de IL-17 nos tecidos hepático e renal quando comparados aos ratos normoglicêmicos (N e N-PA) (p<0,05). A análise histológica mostrou que a periodontite apical de ratos diabéticos (DE-PA) possui maior severidade quando comparada com a dos ratos normoglicêmicos (N-PA) (p<0,05), além disso, houve um aumento significativo dos níveis de IL-17 na periodontite apical dos ratos diabéticos (DE-PA) quando comparados aos... / Abstract: The aim of this study was to evaluate the influence of endodontic infection with or without diabetes, in the levels of proinflammatory cytokine IL-17 in apical periodontitis and hepatic and renal tissues of Wistar rats. Forty male Wistar rats were divided into four groups of ten animals each: normoglycemic rats (N), normoglycemic rats with apical periodontitis (N-AP), rats with experimental diabetes (ED), rats with experimental diabetes and apical periodontitis (ED-AP). Diabetes was induced by injection of streptozotocin in the penile vein. Glycemic control was performed to confirm the development of the disease at the sixth and last day of the experimental period. The endodontic infection was induced by exposure of the upper right first molar to the oral environment. After 30 days, the hepatic and renal tissues were collected for the IL-17 quantification by ELISA, as well the right hemi-jaw for the IL-17 quantification by immunohistochemistry. The values obtained in parametric tests were tabulated and analyzed statistically by means of analysis of variance tests (ANOVA) and Tukey test (p<0.05). The values obtained for scores were statistically analyzed by Kruskal-Wallis and Dun test (p<0.05). The results showed that diabetic rats (ED and ED-AP) showed a higher IL-17 levels in the hepatic and renal tissues compared to normoglycemic rats (N and N-AP) (p<0.05). The apical periodontitis in diabetic rats (ED-AP) had higher severity when compared to normoglycemic rats (N-PA) (p<0.05), furthermore, there was a large increase in IL-17 levels in apical periodontitis of diabetics rats (ED-AP) when compared with normoglycemic rats (N-AP) (p<0.05). However, the induced endodontic infection did not alter IL-17 levels in hepatic and renal tissues (p>0.05). It may be concluded that diabetes increases IL-17 levels in hepatic and renal tissues, as well as enhances... / Mestre

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-04-14Bitstream added on 2015-03-03T12:07:17Z : No. of bitstreams: 1 000798375.pdf: 1469647 bytes, checksum: 70098a0da83fc8bbed975941dbb5e4c3 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da infecção endodôntica associada ou não à diabetes, nos níveis da citocina pró-inflamatória IL-17, nos tecidos periapical, hepático e renal de ratos Wistar. Foram utilizados 40 ratos machos divididos em quatro grupos contendo 10 animais cada grupo: ratos normoglicêmicos (N); ratos normoglicêmicos com periodontite apical (N-PA); ratos com diabetes experimental (DE); ratos com diabetes experimental e com periodontite apical (DE-PA). A diabetes foi induzida por meio da administração de estreptozotocina via veia peniana. Foi realizada avaliação glicêmica, para confirmar o desenvolvimento da doença, no sexto e no último dia do experimento. A infecção endodôntica foi induzida por meio da exposição pulpar do primeiro molar superior direito ao meio bucal. Após 30 dias, foram coletados o fígado e o rim, para a quantificação da IL-17 pelo método ELISA, bem como a hemi-maxila direita para a quantificação da IL-17 pela técnica imunoistoquímica. Os valores obtidos nos testes paramétricos foram tabulados e analisados, estatisticamente, por meio dos testes de análise de variância (ANOVA) e teste de Tukey (p<0,05). Os valores obtidos em scores foram analisados, estatisticamente, por meio dos testes de Kruskal-Wallis e teste de Dun (p<0,05). Os resultados mostraram que os ratos diabéticos (DE e DE-PA) apresentaram maior quantidade de IL-17 nos tecidos hepático e renal quando comparados aos ratos normoglicêmicos (N e N-PA) (p<0,05). A análise histológica mostrou que a periodontite apical de ratos diabéticos (DE-PA) possui maior severidade quando comparada com a dos ratos normoglicêmicos (N-PA) (p<0,05), além disso, houve um aumento significativo dos níveis de IL-17 na periodontite apical dos ratos diabéticos (DE-PA) quando comparados aos... / The aim of this study was to evaluate the influence of endodontic infection with or without diabetes, in the levels of proinflammatory cytokine IL-17 in apical periodontitis and hepatic and renal tissues of Wistar rats. Forty male Wistar rats were divided into four groups of ten animals each: normoglycemic rats (N), normoglycemic rats with apical periodontitis (N-AP), rats with experimental diabetes (ED), rats with experimental diabetes and apical periodontitis (ED-AP). Diabetes was induced by injection of streptozotocin in the penile vein. Glycemic control was performed to confirm the development of the disease at the sixth and last day of the experimental period. The endodontic infection was induced by exposure of the upper right first molar to the oral environment. After 30 days, the hepatic and renal tissues were collected for the IL-17 quantification by ELISA, as well the right hemi-jaw for the IL-17 quantification by immunohistochemistry. The values obtained in parametric tests were tabulated and analyzed statistically by means of analysis of variance tests (ANOVA) and Tukey test (p<0.05). The values obtained for scores were statistically analyzed by Kruskal-Wallis and Dun test (p<0.05). The results showed that diabetic rats (ED and ED-AP) showed a higher IL-17 levels in the hepatic and renal tissues compared to normoglycemic rats (N and N-AP) (p<0.05). The apical periodontitis in diabetic rats (ED-AP) had higher severity when compared to normoglycemic rats (N-PA) (p<0.05), furthermore, there was a large increase in IL-17 levels in apical periodontitis of diabetics rats (ED-AP) when compared with normoglycemic rats (N-AP) (p<0.05). However, the induced endodontic infection did not alter IL-17 levels in hepatic and renal tissues (p>0.05). It may be concluded that diabetes increases IL-17 levels in hepatic and renal tissues, as well as enhances... / FAPESP: 12/02565-2

Orientador: Luciano Tavares Angelo Cintra / Banca: Denise Bertulucci Rocha Rodrigues / Banca: Valéria Marçal Felix de Lima / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da periodontite apical e/ou doença periodontal associadas à diabetes na quantificação sérica da citocina pró-inflamatória IL-17 e na glicemia. Foram utilizados 80 ratos da linhagem Wistar divididos em 8 grupos de 10 ratos: G1 - ratos normoglicêmicos ; G2 - ratos com infecção endodôntica; G3 - ratos com infecção periodontal; G4 - ratos com infecção endodôntica e periodontal; G5 - ratos diabéticos; G6 - ratos diabéticos com infecção endodôntica; G7 - ratos diabéticos com infecção periodontal; G8 - ratos diabéticos com infecção endodôntica e periodontal. A diabetes foi induzida pela aplicação de estreptozotocina via veia peniana, cujo desenvolvimento da doença foi confirmado no sexto e último dia do experimento pela avaliação glicêmica no sangue por meio de uma punção na extremidade da cauda do animal, seguida de pequena compressão para a obtenção de uma gota de sangue. A infecção endodôntica foi induzida pela exposição pulpar do primeiro molar superior direito. A infecção periodontal foi induzida por meio da confecção de uma amarria junto ao colo dentário do segundo molar superior esquerdo. Com 30 dias pós-operatórios foi realizada a glicemia novamente e a coleta de sangue pela punção cardíaca para a quantificação da citocina IL-17 empregando a técnica de ELISA de captura. Os resultados foram analisados do pelo teste de análise de variância e teste de Tukey (p<0,05). O nível glicêmico foi maior em ratos diabéticos quando comparados com ratos controle aos 6 e 30 dias (p<0,05). Entretanto, aos 30 dias nos grupos de ratos diabéticos, observou-se que a presença da infecção periodontal isolada (G7) ou associada à endodôntica (G8) aumentou de forma significante a glicemia quando... / Abstract: The aim of the study was to evaluate the influence of periapical lesions and/or periodontal disease on the IL-17 serum and dosage glycemic a rat model of diabetes mellitus. Eighty male Wistar rats were divided into eight groups of ten animals each: normal rats (G1), rats with pulpal infection (G2), rats with periodontal disease (G3), rats with pulpal infection and periodontal disease (G4), diabetic rats (G5), diabetic rats with pulpal infection (G6), diabetic rats with periodontal disease (G7), diabetic rats with pulpal infection and periodontal disease (G8). Diabetes was induced using streptozotocin, pulpal infection were induced by dental pulp exposure to the oral environment and the periodontal disease by periodontal ligature. Blood glucose was measured by means of a perforation in the tail of the animal after 0, 6 and 30 days post-operative. The animals were sacrificed after 30 days and the IL-17 levels were measured by ELISA. The total assessed values was tabulated according to each experimental group and statistically analyzed by analysis of variance (ANOVA) followed by Tukey test (p<0.05). Glucose levels were higher in diabetic rats compared to control rats at 6, and 30 days (p <0.05). However, at 30 days, and among the groups of diabetic rats, it was observed that the presence of periodontal infection alone (G7) or associated with endodontic (G8) increased significantly the blood glucose compared to diabetic rats without oral infections (G5 ) (p <0.05). The presence of systemic disease diabetes was not able to increase the level of serum IL-17 (p <0.05). However, the presence of the associated oral infections (G4, G8) significantly elevated the serum level of IL-17, regardless of the presence of diabetes (p <0.05). It can be concluded that the endodontic infection when associated with periodontal disease may increase blood glucose levels in diabetic rats and the serum level of IL-17 in normoglycemic or diabetic rats / Mestre

Orientador: Raquel Mantuaneli Scarel Caminaga / Resumo: Em todo o mundo continua-se a buscar evidências de suscetibilidade genética à periodontite (P) em diferentes populações, pois é importante levar em consideração as diferenças genéticas entre as diversas etnias. Além disso, também há grande interesse da comunidade científica em avaliar potenciais inter-relações entre a periodontite e alterações sistêmicas como o Diabetes Mellitus tipo 2 (T2DM, type 2 Diabetes Mellitus). Estudos enfocando polimorfismos genéticos são importantes principalmente para o entendimento que desempenham na modulação da resposta do hospedeiro frente à ação de micro-organismos periodontopatogênicos. O gene Interleucina 17 Alfa (IL17A), que codifica a citocina pró-inflamatória comumente referida como IL-17, é produzida por um subconjunto de células T auxiliadoras (T helper) Th1/Th0 e secretada pelas células Th17, implicadas na vigilância imunológica nas superfícies mucosas e implicada na inflamação crônica. O objetivo deste estudo é investigar três polimorfismos no gene IL17A para avaliar se podem estar associados com a suscetibilidade genética à periodontite na presença (ou não) de T2DM, e relacioná-los com o perfil bioquímico e clínico periodontal do paciente. Considerando o cálculo amostral, foram investigados pacientes com T2DM e periodontite severa ou moderada (Grupo T2DM_P, n=199 pacientes); e para comparação dos resultados foram considerados pacientes sem T2DM com periodontite severa ou moderada (Grupo PERIODONTITIS, n=342), e também pacientes sem T... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:07:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 bianca_franca_ioc_dout_2015.pdf: 11028145 bytes, checksum: e8f2a4ece5e213dd7f7e288656fd0f9d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A produção aumentada de eosinófilos pela medula óssea sustenta a inflamação crônica na asma, compensando a apoptose de eosinófilos maduros nos sítios inflamados. Outros trabalhos mostraram que a eosinopoiese poderia ser suprimida pela prostaglandina E2 (PgE2) por uma via iNOS-CD95L dependente. Sendo a PgE2 um ativador da produção de AMPc intracelular, testamos uma série de agentes capazes de mimetizar este aumento de AMPc. Foram realizadas culturas de medula óssea em meio líquido ou semi-sólido para a análise da eosinopoiese e neutropoiese a partir de camundongos mutantes e seus respectivos controles de tipo selvagem (WT), dos backgrounds BALB/c, C57BL/6. Todos os agentes testados, incluindo isoproterenol, mimetizaram os efeitos de PgE2, suprimindo a eosinopoiese pela mesma via utilizada para supressão pela PgE2. Outros agentes como a IL-17A, uma citocina pró-inflamatória, e a a- galactosilceramida (\03B1-GalCer), um glicolipídeo que ativa células iNKT de forma restrita por CD1d, também suprimiram a eosinopoiese pela via de iNOS-CD95L, mas cada agente utilizou um ponto de atuação e um mecanismo de ação próprio. Por outro lado, o ácido retinóico all-trans (ATRA) também suprimiu a eosinopoiese de forma dependente de CD95L, mas um papel para a iNOS só foi evidenciado, até o momento, para a supressão de formação de colônias pelo ATRA na presença de GM-CSF. Também evidenciamos uma interrelação entre a via da cicloxigenase (COX), a via da 5-lipoxigenase (5-LO) e a ação dos glicocorticóides (GC) na regulação da eosinopoiese Dados anteriores do laboratório mostram que: a) na ausência de 5-LO, a medula óssea estimulada por IL-5 não responde aos inibidores da COX, que potencializam a eosinopoiese em controles WT (Elsas et al., 2008)(Elsas et al., 2008)(Elsas et al., 2008)(Elsas et al., 2008)(Elsas et al., 2008)(Elsas et al., 2008)(Elsas et al., 2008)(Elsas et al., 2008); b) a ação supressiva da PgE2 é antagonizada pelos cisteinil-leucotrienos, produtos da 5-LO, e também pelos glicocorticóides (Gaspar-Elsas et al., 2009). Neste trabalho, mostramos que controles WT e mutantes WASP-KO (deficientes na proteína do Síndrome de Wiskott-Aldrich, que é um elemento importante na motilidade e função de defesa de várias células hematopoiéticas, por sua função no controle do citoesqueleto) respondem normalmente aos inibidores da COX na presença de 5-LO. Mutantes WASP-KO apresentaram menor celularidade da medula óssea recém-coletada, com um déficit significativo na população granulocítica, e não apresentaram resposta eosinopoiética a GC, nem in vivo nem in vitro, com respostas normais à PgE2. Os bloqueadores da COX reconstituíram a eosinopoiese in vitro na medula óssea mutante de forma dependente de 5-LO e leucotrienos. Portanto, WASP mostrou-se relevante tanto para a celularidade da medula óssea in vivo quanto para a sinalização da resposta ao GC. Essas observações reforçam o interesse de estudar a influência dos GC sobre a produção de granulócitos in vivo, e permitem distinguir com base em critério bioquímico (WASPdependência), a via de atuação dos GC daquela via utilizada pelos produtos da 5-LO para bloquear a eosinopoiese iNOS/CD95L-dependente / Increased eosinophil production by bone-marrow sustains chronic inflammation in asthma, by replacing mature eosinophils which undergo apoptosis in inflammatory sites. Other studies have shown that eosinopoiesis could be suppressed by prostaglandin E2 (PgE2) in vitro. Because PgE2 increases intracellular cAMP levels, we tested a panel of agents capable of induction or mimesis of intracellular cAMP rises. We established bone-marrow cultures, in liquid or semisolid media, to examine eosinopoiesis and neutropoiesis, from mutant mice and their respective wild-type (WT) controls of the BALB/c and C57BL/6 backgrounds. All these agents, including isoproterenol, duplicated the effects of PgE2, suppressing eosinopoiesis by the same biochemical pathway previously characterized for PgE2. Other agents such as IL-17 A, a proinflammatory cytokine. and a-galactosilceramide (\03B1-GalCer), a CD1d-restricted glycolipid which activates iNKT cells, also supressed eosinopoiesis through the iNOS-CD95L pathway, but each agent entered the sequence at a distinctive point and used a distinctive mechanism of action. By contrast, all-trans Retinoic Acid (ATRA) also suppressed eosinopoiesis in a CD95L-dependent manner, but a role for iNOS was so far only demonstrated in suppression of colony-formation by ATRA in the presence of GM-CSF. We also demonstrated the three-way connectivity between the cyclooxygenase (COX) pathway, the 5-lipoxygenase (5-LO) pathway and glucocorticoid (GC) regulatory effects on eosinopoiesis. Our group previously reported that: a) in the absence of 5-LO, IL-5-stimulated bone-marrow did not respond to COX inhibitors, which enhance eosinopoiesis in WT bone-marrow; b) the supressive effects of PgE2 are antagonized by cysteinilleukotrienes, produced by 5-LO, and by GC (Elsas et al., 2008) Here we show that WT controls and WASP-KO mutants (lacking the Wiskott-Aldrich Syndrome Protein, a critical element in motility and immunological function of various hemopoietic cell types, due to its role in cytoskeleton regulation) respond normally to COX inhibitors in the presence of 5-LO. WASPKO mutants present lower cellularity in freshly harvested bone-marrow, with significantly decreased granulocyte numbers, and lack an eosinopoietic response to GC, in vitro and in vivo, but show normal responsivess to PgE2. COX inhibitors reconstituted eosinopoiesis in mutant bone-marrow in vitro in a 5-LO- and cysteinyl-leukotriene-dependent manner. Hence, WASP is relevant to bone-marrow cellularity in vivo, as well as to GC signaling. This highlights the interest of further studying the influence of GC on in vivo granulocyte production, and enables us to distinguish, based on a biochemical criterion (WASP-dependency), the targets of GC from the pathway used by cysteinyl-leukotrienes to prevent iNOS-CD95L-mediated suppression of eosinopoiesis / 2100-04-28