Made available in DSpace on 2014-06-12T15:05:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4602_1.pdf: 941507 bytes, checksum: c0ae7f823963e2cbd711e367c4dd1d23 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Foram analisadas as linhagens Metahizium anisopliae var. acridum e Metarhizium anisopliae var. anisopliae quanto à patogênicidade sobre Zaprinus indianus, utilizando as concentrações 104, 105, 106, 107, 108 conídios/mL considerando o percentual de emergência de adultos. De acordo com a metodologia empregada verificou-se que as duas linhagens apresentaram ação contra Z. indianus. Os marcadores moleculares ITS (Internal Trancride Spacer) do rDNA, Intron Splice Site Primer e Microssatélite (SSR- Simple Sequence Repeats), foram utilizados para avaliar a diversidade genética entre as linhagens antes e após a passagem pela mosca. A análise de agrupamento usando o método de UPGMA baseada nas distâncias genéticas dos marcadores moleculares confirmou a diversidade genética reconhecida no gênero Metarhizium. O microssatélite (GTG)5 e o intron do grupo mRNA nuclear tiveram a mesma sensibilidade em detectar a variabilidade genética entre as linhagens de Metarhizium . Os produtos de amplificação dos loci ITS1-5.8-ITS2 do rDNA com os iniciadores ITS4 e ITS5 foram eficientes em demonstrar que as linhagens estudadas pertence à espécie Metarhizium anisopliae, apesar da diversidade genética demonstrada pelos marcadores (GTG)5 e EI1. Os perfis de amplificações da região microssatélite, intron e ITS após a passagem por Z. indianus comprovaram que as linhagens reisoladas foram às mesmas que foram utilizadas para infectar

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:03:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4555_1.pdf: 1910369 bytes, checksum: 5a0109c9538c737e8440a1c2af5b2757 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / Foram analisadas 15 linhagens de Metarhizium isoladas de diferentes regiões e hospedeiros quanto às características genéticas e 7 linhagens quanto a patogenicidade sobre Diatraea saccharalis. Os marcadores moleculares ITS (Internal Transcrided Spacer) do rDNA, Intron splice site primer, RAPD e Microssatélites (SSR-Simple Sequence Repeats) foram utilizados para avaliar a diversidade genética entre as linhagens. A análise de agrupamento usando o método UPGMA baseada nas distâncias genéticas dos quatro marcadores moleculares confirmou a diversidade genética reconhecida no gênero Metarhizium. As enzimas de restrição, HaeIII e MspI, evidenciaram a diversidade genética entre as linhagens ao digerirem os produtos de amplificação do locus ITS1-5.8S-ITS2 do rDNA com os iniciadores ITS4 e ITS5, a enzima DraI não apresentou sítios de restrição. Os introns do grupo mRNA nuclear discriminaram as linhagens de Metarhizium apenas com a utilização do iniciador EI1. As técnicas de RAPD e regiões de Microssatélite foram eficientes em demonstrar a diversidade entre as linhagens. Porém o microssatélite (GACA)4 foi mais sensível em detectar a variabilidade intra e interespecífica entre as diferentes linhagens de Metarhizium. Não houve correlação entre grupos e regiões geográficas. As linhagens 4415, 4400 e 4897 causaram maior percentual de mortalidade das larvas de Diatraea saccharalis. Também não houve correlação entre os agrupamentos gerados pelas técnicas moleculares e percentual de mortalidade de larvas de D. saccharalis

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:04:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4458_1.pdf: 786506 bytes, checksum: 30ccb6ed2c83e0fa52dedbb745159fb1 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2004 / Foram analisadas 20 linhagens de C. gloeosporioides quanto às características genéticas e citomorfológicas. Os marcadores moleculares, RAPD, microssatélites, Intron Spice Site Primer e região ITS do DNA ribossomal, foram utilizados para avaliar a diversidade genética entre as linhagens. A análise de agrupamento através do método UPGMA confirmou a diversidade genética intraespecífica reconhecida em C. gloeosporioides. Com a técnica de RAPD foi detectada uma maior similaridade genética entre as linhagens. As regiões de microssatélites investigadas, demonstraram alto polimorfismo genético e os introns discriminaram todos as linhagens apenas com o primer (EI-1), e revelaram maior diversidade genética em relação aos outros marcadores moleculares utilizados. As três enzimas de restrição testadas, HaeIII, DraI e MspI evidenciaram a diversidade genética entre as linhagens nos produtos de amplificação dos loci ITS1-5.8S-ITS2 do rDNA com os primers ITS1 e ITS4. Todos os marcadores empregados, foram eficientes em demonstrar o alto grau de polimorfismo genético, constatado pela formação de grupos altamente diversificados, sem apresentar correlação entre os hospedeiros. Os aspectos macroscópicos exibiram uma variação na coloração, textura e segregação de setores nas colônias, e as observações microscópicas demonstraram a formação de estruturas vegetativas e reprodutivas peculiares da espécie. A condição nuclear investigada através da técnica de HCl-Giemsa, evidenciou conídios 100% uninucleados

L'expression des ARN mitochondriaux et chloroplastiques des plantes implique un grand nombre de modifications post-transcriptionnelles, parmi lesquelles l'épissage des introns est un processus essentiel. Sur la base de leur structure et des mécanismes d'épissage associés, les introns peuvent être classés en deux familles et ceux présents dans les organites des plantes appartiennent au groupe II. Les introns mitochondriaux et chloroplastiques de groupe II sont fortement dégénérés et ont perdu la capacité de s'auto-épisser in vivo. Leur élimination nécessite l’action de nombreux facteurs protéiques codés dans le noyau et importés dans les organites. Les protéines de liaison à l'ARN jouent un rôle prédominant dans ce processus complexe. Les protéines ribosomales sont des protéines abondantes se liant à l'ARN et peuvent être recrutées pour remplir diverses fonctions annexes. Au cours de ma thèse, j’ai étudié la fonction des protéines de type uL18 chez Arabidopsis, qui comprend 8 membres. Ces protéines partagent un domaine uL18 plutôt dégénéré, mais dont la structure est conservée, et dont la fonction initiale est de permettre l’association avec l’ARNr 5S. Nos résultats ont montré que cinq protéines de type uL18 sont adressées aux mitochondries et trois aux chloroplastes. Deux d’entre elles correspondent à de véritables protéines ribosomales uL18 associées aux ribosomes des organites, tandis que deux autres (uL18-L1 et uL18-L8) se sont transformées en facteurs d'épissage et sont nécessaires à l'élimination d’introns mitochondriaux ou chloroplastiques spécifiques. L'analyse d'un troisième membre de la famille, uL18-L5, a révélé qu'il participait à l'épissage de nombreux introns mitochondriaux. Mes résultats ont permis de révéler que les facteurs dérivés des protéines ribosomales uL18 jouent un rôle essentiel dans l’épissage des introns du groupe II mitochondriaux ou chloroplastiques chez les végétaux et que ces fonctions ciblent sot un seul intron ou bien plusieurs d’entre eux. / RNA expression in plant organelles implies a large number of post-transcriptional modifications in which intron splicing is an essential process. Based on RNA structures and splicing mechanisms, introns can be classified into two families and organellar introns of seed plants are categorized as group II. Organellar group II introns are highly degenerate and have lost the ability to self-splice in vivo. Their removal from transcripts is thus facilitated by numerous nuclear-encoded proteins that are post-translationaly imported into organelles. Among them, RNA binding proteins play predominant roles in this complex process. Ribosomal proteins are abundant RNA-binding proteins and could be recruited to carry out multifarious auxiliary functions. During my thesis, I investigated the function of the uL18 ribosomal-like protein family in Arabidopsis that comprises 8 members. The members of this protein family share a rather degenerate but structurally conserved uL18 domain whose original function is to permit association with the 5S rRNA. Our results showed that five uL18-Like proteins are targeted to mitochondria and three to chloroplasts. Two of these proteins correspond to real ribosomal uL18 proteins that incorporate into organellar ribosomes, while two other members (uL18-L1 and uL18-L8) have turned into splicing factors and are required for the removal of specific mitochondrial or plastid group II introns. The analysis of a third member, uL18-L5, revealed that it participated in the splicing of numerous mitochondrial introns. Our results revealed that uL18-like factors play essential roles in group II intron splicing in both mitochondria and plastids of plants and that these functions could target a single or multiple introns.

RNA provides the framework for the assembly of some of the most intricate macromolecular complexes within the cell, including the spliceosome and the mature ribosome. The assembly of these complexes relies on the coordinated association of RNA with hundreds of trans-acting protein factors. While some of these trans-acting factors are RNA binding proteins (RBPs), others are adaptor proteins, and others still, function as both. Defects in the assembly of these complexes results in a number of human pathologies including neurodegeneration and cancer. Here, we demonstrate that Silencing Defective 2 (SDE2) is both an RNA binding protein and also a trans-acting adaptor protein that functions to regulate RNA splicing and ribosome biogenesis. SDE2 depletion leads to widespread changes in alternative splicing, defects in ribosomal biogenesis, and ultimately complete loss of cell viability. Our data highlight SDE2 as a previously uncharacterized essential gene required for the assembly and maturation of some of the most fundamental processes in mammalian cells.

Group II Introns are small segments of DNA that reside in the chromosome of bacteria or the organelles of primitive eukaryotes. These elements have some very interesting properties. First, they are retrotransposons that can move from one location to a new location in DNA via a reverse transcription mechanism. Second, they form a large ribozyme that mediates self-splicing of the intron from pre-mRNA. A Group II Intron type protein with similarity to reverse transcriptase was discovered in the thermophilic bacterium Geobacillus stearothermophilus strain 10 (Vellore et al., 2004, Appl. Environ. Microbiol. 70: 7140-7147). Numerous copies of the intron, designated Gs. Int1, are present in the chromosome of strain 10 but absent from a related strain ATCC 12980. Experiments to detect the in vivo splicing of intron Gs.Int1 from G. stearothermophilus cells did not work. Plasmids to that will over-express the Gs. Int1 intron to detest splicing in vivo in Escherichia coli have been constructed.

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