Resumo: A espécie Lavandula angustifolia Miller apresenta características medicinais e aromáticas e apresenta-se com importância econômica devido à produção de óleo essencial. O mesmo tem destaque em indústrias de perfumaria, cosmética, farmacêutica, alimentos e higiene pessoal, em razão da presença dos constituintes linalol e acetato de linalila. Assim este trabalho teve por objetivo desenvolver um protocolo de micropropagação para a propagação normal de mudas e caracterizar o óleo essencial de L. angustifolia cv. Provence Blue. Para o estabelecimento das culturas in vitro foram utilizados como explantes ápices caulinares, a partir de plantas matrizes mantidas em casa de vegetação. Dentre os meios de cultura testados, o meio LS foi o que apresentou melhor resposta no cultivo das brotações por não apresentar brotações com necrose apical. Hiperidricidade e necrose apical das brotações foram observadas durante a micropropagação, e o aumento de CaCl2 no meio de cultura, de 440 mg L-1 para 1.320 mg L-1, reduziu significativamente esses problemas. O aumento da concentração de CaCl2 no meio de cultura levou ao aumento de Ca2+ nas brotações, sendo este encontrado em maior concentração na base das brotações, seguido do terço médio e ápice. O enraizamento das brotações in vitro, após a fase de multiplicação, não apresentou bons resultados, apenas 47% das microestacas enraizaram em meio isento de regulador vegetal, porém o enraizamento ex vitro com o uso de ácido indolbutírico na concentração de 5,0 mM, aplicado via solução ou talco, foi satisfatório com alta porcentagem de enraizamento das microestacas (100%). A L. angustifolia cv. Provence Blue apresentou elevada taxa de sobrevivência (aproximadamente 82%) quando transferida para o ambiente ex vitro. As mudas obtidas a partir da micropropagação, após 180 dias de aclimatização em casa de vegetação, foram estabelecidas a campo na Estação Experimental da EPAGRI, em São Joaquim (SC). As inflorescências foram colhidas em janeiro de 2011, e o óleo essencial foi extraído por hidrodestilação. Os constituintes majoritários encontrados no óleo essencial foram linalol, acetato de linalila, 1,8-cineol, acetato de lavandulila, borneol, trans-cariofileno e trans-?-ocimeno. Conclui-se que a micropropagação de Langustifolia cv. Provence Blue, seguida do enraizamento ex vitro com simultânea aclimatização é uma técnica eficiente para a produção de mudas, as quais foram estabelecidas com sucesso no campo, obtendo-se altos teores de linalol.