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Analysis of E.coli protein by LC/ESI and LC/MALDIChen, Wen-shius 28 July 2005 (has links)
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Entwicklung und Validierung von LC-MS/MS-Assays zur quantitativen Bestimmung von Antiinfektiva und ihre Anwendung in Pharmakokinetikstudien /Rüsing, Guido. January 1999 (has links)
Thesis (doctoral)--Rheinische Friedrich-Wilhelms-Universität zu Bonn, 1999.
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Alignment of LC-MS Data Using Peptide FeaturesTang, Xincheng 2011 December 1900 (has links)
Integrated liquid-chromatography mass-spectrometry(LC-MS) is becoming a widely used approach for quantifying the protein composition of complex samples.In the last few years,this technology has been used to compare complex biological samples across multiple conditions. One challenge in the analysis of an LC-MS experiment is the alignment of peptide features across samples. In this paper,we proposed a new method using the peptide internal information (both LC-MS and LC-MS/MS information) to align features from multiple LC-MS experiments.We defined Anchor points which are data elements that are highly confident we have identified and are shared by both samples. We chose one sample as template data set, find Anchor points in this sample, then apply alignment to modify another sample, find Anchors in modified sample, these Anchors should line up with one another. One advantage of our method is that it allows statistical assessment of alignment performance. Use anchor points to perform alignment between samples, and labeling an objective performance in LC-MS.
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Entwicklung und Anwendung von flüssigchromatographischen Analyseverfahren zum Nachweis von Diarrhetic Shellfish Poisoning (DSP)-ToxinenRühl, Alexander. Unknown Date (has links) (PDF)
Universiẗat, Diss., 2004--Jena.
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Técnicas modernas em espectrometria de massas aplicadas no isolamento de bioherbicidas produzidos por microrganismos / Modern Techniques on Mass Spectrometry applied to the isolation of bioherbicides produced by microorganismsPetta, Tânia 04 September 2008 (has links)
Neste trabalho foi empregada uma metodologia rápida e eficiente para a identificação de metabólitos fitotóxicos produzidos por microrganismos. O isolamento do composto bioativo foi guiado através de bioensaio com Lemna minor. A espectrometria de massas, em especial o LC-MS, foi utilizada para acelerar o processo de identificação do composto ativo. As bactérias estudadas eram simbióticas do fungo fitopatogênico Sclerotium rolfsii. Seus respectivos extratos orgânicos obtidos de culturas em meio BD (batata dextrose) foram submetidos ao ensaio de fitotoxicidade com Lemna minor. Entre cinco bactérias foi selecionada a bactéria Burkholderia sp, a qual apresentou maior atividade no ensaio de fitotoxicidade. O fracionamento por cromatografia em coluna de sílica propiciou a identificação de uma fração ativa. A fitotoxina foi caracterizada como sendo um macropentólido de 20 membros. O composto pertence à classe dos polihidroxibutiratos (PHBs). Sua estrutura foi determinada por RMN 1H, RMN 13C, HMQC, HMBC, IV, ESI-MS/MS e também por comparação com dados da literatura. Esse composto nunca foi isolado de fontes naturais. Foi descrito na literatura uma rota sintética para sua obtenção, porém esta é a primeira vez que sua atividade fitotóxica é relatada. Este trabalho mostra uma nova perspectiva para o emprego de PHBs de baixo peso molecular e apresenta uma proposta de estrutura de composto fitotóxico que pode servir de modelo para a síntese de novos herbicidas. / In this work a quick and efficient methodology was employed for the identification of phytotoxic metabolites produced by microorganisms. The isolation of the bioactive compound was guided by Lemna minor bioassay. Mass spectrometry, especially LC-MS, was used to accelerate the process of identification of the phytotoxin. All bacteria were symbiotic to the phytopatogenic fungi Sclerotium rolfsii.. The bacterium Burkholderia sp was selected among the five bacteria analyzed, due to its greater phytotoxic activity in the bioassay. The phytotoxin was characterized as a 20 member macropentolide. This compound belongs to the polyhidroxybutirates (PHBs) chemical class. Its structure was determined by NMR1H, NMR 13C, HMQC, HMBC, IV, ESI-MS/MS and HRMS. It has never been isolated from natural sources before. Although a synthetic route has been proposed in the literature this is the first time that its phytotoxic activity is reported. This work leads to a new perspective for the application of low molecular weight PHBs and propose a phytotoxic structure that can be used as a model for the synthesis of new herbicide class.
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Otimização do processo fermentativo para produção do antibiótico nigericina por Streptomyces / Optimization of the Production of Antibiotic Nigericin by SteptomycesSilva, André Luiz Scridelli 06 June 2014 (has links)
Metabólitos secundários produzidos por Streptomyces com atividade antibiótica apresentam relevante importância biotecnológica para as indústrias farmacêuticas e agroquímicas. Dentre estes metabólitos, podemos destacar a nigericina, um antibiótico poliéter usado como aditivo em ração animal atuando como promotor de crescimento e no tratamento de algumas doenças, como a malária, em carcinoma nasofaríngeo, a vaccínia, entre outras. Neste trabalho foram avaliadas duas cepas de actinobactérias potenciais produtoras de nigericina, a EUCAL 26 e a EUCAL 74. As duas actinobatérias foram fermentadas em cinco meios de cultivo diferentes (BD, Czapek, ISP2, M29 e TSB). A cepa EUCAL 26 foi a mais promissora na produção de nigericina em meio Czapeck. A partir da EUCAL 26, foi feito um estudo da máxima produção de nigericina em meio Czapek variando o pH do meio, temperatura de fermentação, e período de fermentação. As melhores condições encontradas foram em pH 7,0 a 25 °C por 27 dias. Foi realizado também um estudo de otimização de aumento de escala de fermentação, de um volume de meio Czapeck de 50 mL, para um volume de 4 L. Também foram avaliados dois resíduos agroindustriais (Farmal e Melaço de Soja) para a produção de nigericina. O meio de Melaço de Soja aumento a produção em aproximadamente 300x quando comparado com o meio Czapeck padrão. Os efeitos dos nutrientes do meio Czapeck também foram avaliados. A retida do K2HPO4 do meio produziu um aumento de 50x na produção de nigericina, quando comparado com o meio Czapeck controle. Também foi avaliado o efeito da adição de -butirolactonas sintéticas, moléculas de sinalização hormonal, para a produção de nigericina. Das 15 -butirolactonas testadas, a DP21A foi a mais eficiente, pois além de aumentar a produção de nigericina em 23x, também diminui o período máximo de sua produção. Todas as analises realizadas neste trabalho para o monitoramento da produção de nigericina, foram feitas empregando a espectrometria de massas sequencial acoplada à cromatografia liquida de ultra eficiência. / Secondary metabolites produced by Streptomyces with antibiotic activity have significant biotechnological importance for the pharmaceutical and agrochemical industries. Among them, nigericin stands out as an antibiotic polyether used as growth promoter in animal feed and for treatment of some diseases such as malaria, nasopharyngeal carcinoma, and vaccinia. In this study, two actinobacteria strains considered potential producers of nigericin named EUCAL 26 and 74 were tested. The two actinobacteria were fermented in five different culture media (BD, Czapek, ISP2, M29 and TSB). EUCAL 26 strain was the most promising in producing nigericin in amid Czapeck media. For EUCAL 26, a study of maximum production of nigericin in Czapek medium at varying the pH, fermentation temperature and fermentation period have been performed. As a result, the best conditions were pH 7.0, at 25 °C for 27 days. In addition, an optimization study for scale-up fermentation have been done, where a volume of 50 mL Czapeck medium have been expanded to 4 L, in order to obtain the highest production of nigericin. Two agroindustrial residues (FARMAL and Honey Soy) have also been evaluated for nigericin production. The honey soy medium increased nigericin production in the rate of 300 when compared with standard Czapeck medium. The effects of nutrients from Czapeck medium have also been evaluated. Removal of K2HPO4 from culture medium resulted in an increase of 50 times when compared with the control Czapeck medium. The effect of adding synthetics -butyrolactones (hormone signaling molecules) for the production of nigericin have also been evaluated. From 15 tested -butyrolactones, DP21A was the most efficient. In addition to increase nigericin yield in 23x it also reduced the period for its maximum production. All analyzes performed in this study to monitor the nigericin production were performed using tandem mass spectrometry coupled to ultra high performance liquid chromatography.
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Otimização do processo fermentativo para produção do antibiótico nigericina por Streptomyces / Optimization of the Production of Antibiotic Nigericin by SteptomycesAndré Luiz Scridelli Silva 06 June 2014 (has links)
Metabólitos secundários produzidos por Streptomyces com atividade antibiótica apresentam relevante importância biotecnológica para as indústrias farmacêuticas e agroquímicas. Dentre estes metabólitos, podemos destacar a nigericina, um antibiótico poliéter usado como aditivo em ração animal atuando como promotor de crescimento e no tratamento de algumas doenças, como a malária, em carcinoma nasofaríngeo, a vaccínia, entre outras. Neste trabalho foram avaliadas duas cepas de actinobactérias potenciais produtoras de nigericina, a EUCAL 26 e a EUCAL 74. As duas actinobatérias foram fermentadas em cinco meios de cultivo diferentes (BD, Czapek, ISP2, M29 e TSB). A cepa EUCAL 26 foi a mais promissora na produção de nigericina em meio Czapeck. A partir da EUCAL 26, foi feito um estudo da máxima produção de nigericina em meio Czapek variando o pH do meio, temperatura de fermentação, e período de fermentação. As melhores condições encontradas foram em pH 7,0 a 25 °C por 27 dias. Foi realizado também um estudo de otimização de aumento de escala de fermentação, de um volume de meio Czapeck de 50 mL, para um volume de 4 L. Também foram avaliados dois resíduos agroindustriais (Farmal e Melaço de Soja) para a produção de nigericina. O meio de Melaço de Soja aumento a produção em aproximadamente 300x quando comparado com o meio Czapeck padrão. Os efeitos dos nutrientes do meio Czapeck também foram avaliados. A retida do K2HPO4 do meio produziu um aumento de 50x na produção de nigericina, quando comparado com o meio Czapeck controle. Também foi avaliado o efeito da adição de -butirolactonas sintéticas, moléculas de sinalização hormonal, para a produção de nigericina. Das 15 -butirolactonas testadas, a DP21A foi a mais eficiente, pois além de aumentar a produção de nigericina em 23x, também diminui o período máximo de sua produção. Todas as analises realizadas neste trabalho para o monitoramento da produção de nigericina, foram feitas empregando a espectrometria de massas sequencial acoplada à cromatografia liquida de ultra eficiência. / Secondary metabolites produced by Streptomyces with antibiotic activity have significant biotechnological importance for the pharmaceutical and agrochemical industries. Among them, nigericin stands out as an antibiotic polyether used as growth promoter in animal feed and for treatment of some diseases such as malaria, nasopharyngeal carcinoma, and vaccinia. In this study, two actinobacteria strains considered potential producers of nigericin named EUCAL 26 and 74 were tested. The two actinobacteria were fermented in five different culture media (BD, Czapek, ISP2, M29 and TSB). EUCAL 26 strain was the most promising in producing nigericin in amid Czapeck media. For EUCAL 26, a study of maximum production of nigericin in Czapek medium at varying the pH, fermentation temperature and fermentation period have been performed. As a result, the best conditions were pH 7.0, at 25 °C for 27 days. In addition, an optimization study for scale-up fermentation have been done, where a volume of 50 mL Czapeck medium have been expanded to 4 L, in order to obtain the highest production of nigericin. Two agroindustrial residues (FARMAL and Honey Soy) have also been evaluated for nigericin production. The honey soy medium increased nigericin production in the rate of 300 when compared with standard Czapeck medium. The effects of nutrients from Czapeck medium have also been evaluated. Removal of K2HPO4 from culture medium resulted in an increase of 50 times when compared with the control Czapeck medium. The effect of adding synthetics -butyrolactones (hormone signaling molecules) for the production of nigericin have also been evaluated. From 15 tested -butyrolactones, DP21A was the most efficient. In addition to increase nigericin yield in 23x it also reduced the period for its maximum production. All analyzes performed in this study to monitor the nigericin production were performed using tandem mass spectrometry coupled to ultra high performance liquid chromatography.
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Técnicas modernas em espectrometria de massas aplicadas no isolamento de bioherbicidas produzidos por microrganismos / Modern Techniques on Mass Spectrometry applied to the isolation of bioherbicides produced by microorganismsTânia Petta 04 September 2008 (has links)
Neste trabalho foi empregada uma metodologia rápida e eficiente para a identificação de metabólitos fitotóxicos produzidos por microrganismos. O isolamento do composto bioativo foi guiado através de bioensaio com Lemna minor. A espectrometria de massas, em especial o LC-MS, foi utilizada para acelerar o processo de identificação do composto ativo. As bactérias estudadas eram simbióticas do fungo fitopatogênico Sclerotium rolfsii. Seus respectivos extratos orgânicos obtidos de culturas em meio BD (batata dextrose) foram submetidos ao ensaio de fitotoxicidade com Lemna minor. Entre cinco bactérias foi selecionada a bactéria Burkholderia sp, a qual apresentou maior atividade no ensaio de fitotoxicidade. O fracionamento por cromatografia em coluna de sílica propiciou a identificação de uma fração ativa. A fitotoxina foi caracterizada como sendo um macropentólido de 20 membros. O composto pertence à classe dos polihidroxibutiratos (PHBs). Sua estrutura foi determinada por RMN 1H, RMN 13C, HMQC, HMBC, IV, ESI-MS/MS e também por comparação com dados da literatura. Esse composto nunca foi isolado de fontes naturais. Foi descrito na literatura uma rota sintética para sua obtenção, porém esta é a primeira vez que sua atividade fitotóxica é relatada. Este trabalho mostra uma nova perspectiva para o emprego de PHBs de baixo peso molecular e apresenta uma proposta de estrutura de composto fitotóxico que pode servir de modelo para a síntese de novos herbicidas. / In this work a quick and efficient methodology was employed for the identification of phytotoxic metabolites produced by microorganisms. The isolation of the bioactive compound was guided by Lemna minor bioassay. Mass spectrometry, especially LC-MS, was used to accelerate the process of identification of the phytotoxin. All bacteria were symbiotic to the phytopatogenic fungi Sclerotium rolfsii.. The bacterium Burkholderia sp was selected among the five bacteria analyzed, due to its greater phytotoxic activity in the bioassay. The phytotoxin was characterized as a 20 member macropentolide. This compound belongs to the polyhidroxybutirates (PHBs) chemical class. Its structure was determined by NMR1H, NMR 13C, HMQC, HMBC, IV, ESI-MS/MS and HRMS. It has never been isolated from natural sources before. Although a synthetic route has been proposed in the literature this is the first time that its phytotoxic activity is reported. This work leads to a new perspective for the application of low molecular weight PHBs and propose a phytotoxic structure that can be used as a model for the synthesis of new herbicide class.
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Pharmacokinetics of Synthetic Cathinones Found in “Bath Salts” in Mouse Brain and Plasma Using High Pressure Liquid Chromatography – Tandem Mass SpectrometryMcKinney, Mariah, Troglin, Courtney Gail, Bouldin, Jessica Brooke, Schreiner, Shannon, Brown, Stacy D, Pond, Brooks B 18 March 2021 (has links)
Approximately 10 years ago, “bath salts” were popularized as legal alternatives to the psychostimulants cocaine and the amphetamines, circumventing legislation with packages marked, “not for human consumption.” These products contained synthetic cathinones including 3,4-methylenedioxypyrovalerone (MDPV), 4-methylmethcathinone (mephedrone), and 3,4-methylenedioxymethcathinone (methylone). The synthetic cathinones have similar pharmacology to controlled psychostimulants, increasing levels of dopamine (DA) in the synaptic cleft, while also exhibiting similar psychoactive effects such as increased energy and euphoria. Additionally, adverse effects of “bath salts” are similar to controlled psychostimulants, such as chest pain, shortness of breath, and hallucinations. Most preclinical investigations have only assessed the effects of these synthetic cathinones independently; however, case reports and DEA studies indicate that “bath salts” contain mixtures of these substances. Therefore, in a recent study by our laboratory, we examined effects of individual versus combined exposure to MDPV, mephedrone, and methylone. Interestingly, an enhanced effect on the levels of DA in a number of brain regions was observed, as well as significant alterations in locomotor activity following co-exposure to the cathinones. Here, we examine if the enhanced effects of the drug combination are due to pharmacokinetic (PK) interactions. Many of the same cytochrome isoenzymes metabolize each of these 3 drugs; thus, it is probable that the drugs’ PK would differ when administered individually as compared to in combination. We hypothesized that combined exposure to MDPV, mephedrone, and methylone would result in increased total drug concentrations when compared to individual administration. Briefly, adolescent male Swiss-Webster mice were injected intraperitoneally with either 10 mg/kg MDPV, 10 mg/kg mephedrone, 10 mg/kg methylone, or 10 mg/kg combined MDPV, mephedrone, and methylone. Following injection, brains and plasma were collected at the following time points: 1, 10, 15, 30, 60, and 120 minutes. Drugs were extracted via solid-phase extraction, and concentrations were determined using a previously published high pressure-liquid chromatography tandem mass spectrometry method. All drugs quickly crossed the blood-brain barrier and entered the brain. PK data for methylone and mephedrone was consistent with our hypothesis. For methylone, the maximal concentration (Cmax) and the total drug exposure (as represented by the area under the curve (AUC)) were significantly higher when combined with mephedrone and MDPV in both matrices. For mephedrone, the Cmax was unchanged, but AUC in brain was increased when combined with the other two drugs. However, interestingly, for MDPV, the Cmax was unchanged, yet the AUC in brain was higher when MDPV was administered individually. These data provide insight into the consequences of co-exposure to synthetic cathinones in popular “bath salt” products.
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Characterization of oxidation induced damage to Ribosomal RNA through LC-MSEstevez, Mariana 23 August 2022 (has links)
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