Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-01-15T17:01:51Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Izabela Coimbra Ibraim.pdf: 3600819 bytes, checksum: 7dc73c7a016be4f2bdca2b741e85a75e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-01-15T17:01:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Izabela Coimbra Ibraim.pdf: 3600819 bytes, checksum: 7dc73c7a016be4f2bdca2b741e85a75e (MD5) Previous issue date: 2012 / O LPG apresenta variações estruturais que são importantes para os diferentes estágios de desenvolvimento do parasito. Nas formas procíclicas, o LPG de L. braziliensis (cepa M2903), não apresenta cadeias laterais enquanto um a dois resíduos de β-glicose podem aparecer nas unidades repetitivas da forma metacíclica. O LPG de L. infantum (cepa BH46), apresenta até três cadeias laterais de glicoses nas unidades repetitivas da forma procíclica e ainda não foi caracterizado nas formas metacíclicas. Esses polimorfismos nas unidades repetitivas do LPG e seu papel na interação com o hospedeiro vertebrado e invertebrado já foram amplamente estudados, sobretudo, para as espécies do Velho Mundo. Entretanto, para a maioria das espécies do Novo Mundo, o papel desses polimorfismos no perfil imunopatológico da doença é ainda desconhecido. Este projeto teve como objetivo avaliar o estudo da interação entre os LPGs de duas espécies epidemiologicamente importantes no Brasil e macrófagos murinos. Estas incluem L. braziliensis e L. infantum, responsáveis pela forma cutânea e visceral, respectivamente. Neste estudo, os macrófagos peritoneais de camundongos BALB/c, C57BL/6 e C57BL/6 knock-out (TLR2 -/- e TLR4 -/-), foram primados com IFN- e estimulados com LPG de ambas as espécies. A produção de citocinas (IL-1β, IL-2; IL-4, IL-6, IL-10, IL-12p40, IFN- e TNF-α) foi determinada por citometria de fluxo e a concentração de nitrito pelo método de Griess. A ativação de ERK e p38 foi avaliada por Western blot. Os macrófagos estimulados com LPG de L. braziliensis, apresentaram uma maior produção de TNF-α, IL-1β, IL-6 e NO em comparação aos estimulados com LPG de L. infantum. Também foi observada uma cinética de ativação diferencial das MAPK entre os LPGs. Leishmania infantum apresentou uma ativação constante até 45 minutos após estimulação, enquanto L. braziliensis apresentou um único pico de ativação após 15 minutos. Estes dados sugerem que variações interespecíficas no LPG de Leishmania podem ter um papel importante nos eventos iniciais do compartimento imune inato do hospedeiro. / The structural variations observed on LPG are important for the different parasite developmental stages. The procyclic form of L. braziliensis LPG (strain M2903), is devoid of side chains, while one to two β-glucose side chains are added in the repeat units of the metacyclic LPG. The L. infantum LPG has with up to 3 glucoses residues in the repeat units in the procyclic parasites, while those structures are not known in the metacyclic stage. Those polymorphisms in the composition and sequence of the sugars branching off the repeat units of the LPG have been assessed in the interaction with vertebrate and invertebrate hosts, especially for the Old World Leishmania species. However, for most of New World species of Leishmania, the role of those polymorphisms in the mmunopathology of the disease is still unknown. This study aimed to evaluate the interaction between the LPGs of two epidemiologically important Brazilian species and murine macrophages. Those include L. braziliensis and L. infantum, causative agents of cutaneous and visceral leishmaniasis, respectivelly. Mice peritoneal macrophages from BALB/c, C57BL/6, and C57BL/6 knock-out (TLR2 -/- e TLR4 -/-) lineages were primed with IFN- and stimulated with LPG from both species. Cytokine production (IL-1β, IL-2; IL-4, IL-6, IL-10, IL-12p40, IFN- and TNF-α) and nitrite concentration were determined by flow cytometry and Griess reaction, respectivelly. Western blot was performed to evaluate the activation of the MAPKs ERK and p38. Macrophages stimulated with L. braziliensis LPG, had a higher TNF-α, IL-1β, IL-6 e NO production than those stimulated with L. infantum’s. A different MAPK activation kinetics between the two species was detected. Leishmania infantum LPG exhibited a gradual activation profile until 45 min after stimulation, whereas L. braziliensis LPG showed an activation peak at 15 min. These data suggest that interpecies variations in Leishmania LPG may have an important role during initial steps of infection in the host’s innate imune system.