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Avaliação da infecção por Leishmania spp. em pequenos mamíferos de áreas endêmicas de Minas Gerais, Brasil |

Pereira, Agnes Antônia Sampaio January 2015 (has links)
Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-06-18T19:01:01Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_DIP_AgnesAntoniaSampaioPereira (2).pdf: 3979166 bytes, checksum: 17d10f25aaa6a7bb5ceb08f07a44820c (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-06-18T19:01:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_DIP_AgnesAntoniaSampaioPereira (2).pdf: 3979166 bytes, checksum: 17d10f25aaa6a7bb5ceb08f07a44820c (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-06-18T19:01:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_DIP_AgnesAntoniaSampaioPereira (2).pdf: 3979166 bytes, checksum: 17d10f25aaa6a7bb5ceb08f07a44820c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-18T19:01:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_DIP_AgnesAntoniaSampaioPereira (2).pdf: 3979166 bytes, checksum: 17d10f25aaa6a7bb5ceb08f07a44820c (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou / O conhecimento dos reservatórios de Leishmania spp. é crucial para o estabelecimento de medidas eficientes de controle das leishmanioses. A detecção, identificação da espécie de Leishmania bem como a quantificação da carga parasitária em diferentes amostras de animais podem ser ferramentas úteis na indicação da participação de um determinado hospedeiro como fonte de infecção para os vetores. Neste trabalho foi realizado um estudo sobre a infecção por Leishmania spp. em roedores e marsupiais em áreas endêmicas para as leishmanioses de Minas Gerais. As amostras utilizadas foram provenientes de pequenos mamíferos capturados em cinco localidades: Regional Nordeste de Belo Horizonte, Município de Divinópolis, Terra Indígena Xakriabá no Município de São João das Missões, Barra do Guaicuí em Várzea da Palma e Casa Branca, localidade pertencente ao Município de Brumadinho. A detecção e quantificação do DNA de Leishmania foram realizadas através da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e PCR em tempo real (qPCR) direcionadas ao alvo kDNA e a identificação da espécie através da PCR-RFLP direcionada ao hsp70. Foram capturados animais pertencentes a 14 diferentes espécies, das ordens Rodentia e Didelphimorfia. Os resultados mostraram que, em geral, a maioria dos animais foi capturada em áreas não urbanizadas e a maioria dos espécimes pertencem a ordem Rodentia. Dos 346 animais examinados, 78 (22%) foram positivos em pelo menos um tecido. A maior positividade foi observada na Terra Indígena Xakriabá (35%), seguido pela Regional Nordeste de Belo Horizonte (27%), Casa Branca (24%), Divinópolis (9%) e Barra do Guaicuí (8%). Quanto às espécies de animais, Thrichomys apereoides e Didelphis albiventris tiveram um número expressivo de exemplares capturados (76 e 113 respectivamente) e uma positividade considerada alta (28% e 19%). Com relação aos tecidos, o fígado apresentou maior positividade (14%), seguido por medula (9%), baço (6%), pele de orelha (5%) e pele de cauda (4%). Nas amostras dos animais foram identificadas as espécies L. (V.) braziliensis, L. (L). infantum e L. (V.) guyanensis, sendo que a primeira foi encontrada infectando um maior número e uma maior diversidade de espécies de animais. Os animais capturados na Terra Indígena Xakriabá apresentaram a carga parasitária mais elevada, e, com relação às espécies dos hospedeiros, T. apereoides foi o que apresentou a maior carga parasitária. Quanto aos tecidos, houve uma alta positividade em amostras de fígado enquanto as amostras de baço apresentaram uma alta carga parasitária, o que aponta para a importância desses órgãos na infecção dos pequenos mamíferos por Leishmania spp.. A pele de orelha se mostrou eficiente na detecção das três espécies de Leishmania encontradas. Os resultados obtidos, aliados ao conhecimento epidemiológico da área, mostraram a importância da participação deste animais no ciclo de transmissão de Leishmania nas áreas endêmicas estudadas. Esses dados ressaltam a necessidade de mais estudos a respeito destas diferentes espécies de mamíferos, possíveis reservatórios de Leishmania spp., visando a implementação de novas estratégias de vigilância epidemiológica e aplicação de medidas de controle específicas, tanto para leishmaniose tegumentar como para leishmaniose visceral. / The knowledge about the reservoir of Leishmania spp. is crucial to establish the efficient leishmaniasis control measures. The detection, identification of the Leishmania species and the parasite burden quantification in different clinical animal samples can be useful tools to indicate the participation of a certain host as a source of infection to the vectors. In this work it was done a study about the infection by Leishmania spp. in rodents and marsupials in leishmaniasis endemic areas in Minas Gerais. The used samples were from small mammals captured in five localities: the Northeast Region of Belo Horizonte, the municipality of Divinópolis, the Xakriabá Indian Reservation in the municipality of São João das Missões, Barra do Guaicuí in the municipality of Várzea da Palma and Casa Branca, placed in the municipality of Brumadinho. The detection and quantification of the Leishmania DNA was done through the Polimerase Chain Reaction (PCR) targeted to the kDNA and the identification of the species through the PCR-RFLP targeted to the hsp70. Animals from 14 different species of the orders Rodentia and Didelphimorfia were captured. The results showed that, in general, most of the animals were captured in non urbanized areas and most of the specimens belong to the Rodentia order. From the 346 tested animals, 78 (22%) were positive in at least one tissue. The higher positivity was observed in the Xakriabá Indian Reservation (35%), followed by the Northeast Region of Belo Horizonte (27%), Casa Branca (24%), Divinópolis (9%) and Barra do Guaicuí (8%). Related to the animal species, Thrichomys apereoides and Didelphis albiventris had an expressive number of captured specimens (76 and 113 respectively) and a high positivity (28% and 19%). About the tissues, the liver had the higher positivity (14%), followed by bone marrow (9%), spleen (6%), ear skin (5%) and tail skin (4%). In the animals samples were identified the species L. (V.) braziliensis, L. (L). infantum and L.(V.) guyanensis, wherein the first was found infecting a higher number and a higher diversity of animals species. The captured animals in the Xakriabá Indian Reservation showed a more elevated parasite burden and, related to the host species, T. apereoides showed the higher parasite burden. About the tissues, there was a high positivity in liver samples as the spleen samples showed a high parasite burden, which points to the importance of these organs for the infection of small mammals by Leishmania spp. The ear skin was efficient in the detection of the three Leishmania species found. The obtained results, allied to the area epidemiologic knownledge, showed important participation of these animals in the Leishmania cicle transmission in the studied endemic areas. These data show the need of more researches about these different mammals species, possible Leishmania reservoirs, seeking the implementation of new epidemiological surveillance srtatetegies and the aplliance of specific control measures to the cutaneous leishmaniasis as well to the visceral leishmaniasis.
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Lipofosfoglicanos (LPGs) de Leishmania braziliensis e Leishmania infantum na ativação de macrófagos murinos e vias de sinalização celular

Ibraim, Izabela Coimbra January 2012 (has links)
Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-01-15T17:01:51Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Izabela Coimbra Ibraim.pdf: 3600819 bytes, checksum: 7dc73c7a016be4f2bdca2b741e85a75e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-01-15T17:01:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Izabela Coimbra Ibraim.pdf: 3600819 bytes, checksum: 7dc73c7a016be4f2bdca2b741e85a75e (MD5) Previous issue date: 2012 / O LPG apresenta variações estruturais que são importantes para os diferentes estágios de desenvolvimento do parasito. Nas formas procíclicas, o LPG de L. braziliensis (cepa M2903), não apresenta cadeias laterais enquanto um a dois resíduos de β-glicose podem aparecer nas unidades repetitivas da forma metacíclica. O LPG de L. infantum (cepa BH46), apresenta até três cadeias laterais de glicoses nas unidades repetitivas da forma procíclica e ainda não foi caracterizado nas formas metacíclicas. Esses polimorfismos nas unidades repetitivas do LPG e seu papel na interação com o hospedeiro vertebrado e invertebrado já foram amplamente estudados, sobretudo, para as espécies do Velho Mundo. Entretanto, para a maioria das espécies do Novo Mundo, o papel desses polimorfismos no perfil imunopatológico da doença é ainda desconhecido. Este projeto teve como objetivo avaliar o estudo da interação entre os LPGs de duas espécies epidemiologicamente importantes no Brasil e macrófagos murinos. Estas incluem L. braziliensis e L. infantum, responsáveis pela forma cutânea e visceral, respectivamente. Neste estudo, os macrófagos peritoneais de camundongos BALB/c, C57BL/6 e C57BL/6 knock-out (TLR2 -/- e TLR4 -/-), foram primados com IFN- e estimulados com LPG de ambas as espécies. A produção de citocinas (IL-1β, IL-2; IL-4, IL-6, IL-10, IL-12p40, IFN- e TNF-α) foi determinada por citometria de fluxo e a concentração de nitrito pelo método de Griess. A ativação de ERK e p38 foi avaliada por Western blot. Os macrófagos estimulados com LPG de L. braziliensis, apresentaram uma maior produção de TNF-α, IL-1β, IL-6 e NO em comparação aos estimulados com LPG de L. infantum. Também foi observada uma cinética de ativação diferencial das MAPK entre os LPGs. Leishmania infantum apresentou uma ativação constante até 45 minutos após estimulação, enquanto L. braziliensis apresentou um único pico de ativação após 15 minutos. Estes dados sugerem que variações interespecíficas no LPG de Leishmania podem ter um papel importante nos eventos iniciais do compartimento imune inato do hospedeiro. / The structural variations observed on LPG are important for the different parasite developmental stages. The procyclic form of L. braziliensis LPG (strain M2903), is devoid of side chains, while one to two β-glucose side chains are added in the repeat units of the metacyclic LPG. The L. infantum LPG has with up to 3 glucoses residues in the repeat units in the procyclic parasites, while those structures are not known in the metacyclic stage. Those polymorphisms in the composition and sequence of the sugars branching off the repeat units of the LPG have been assessed in the interaction with vertebrate and invertebrate hosts, especially for the Old World Leishmania species. However, for most of New World species of Leishmania, the role of those polymorphisms in the mmunopathology of the disease is still unknown. This study aimed to evaluate the interaction between the LPGs of two epidemiologically important Brazilian species and murine macrophages. Those include L. braziliensis and L. infantum, causative agents of cutaneous and visceral leishmaniasis, respectivelly. Mice peritoneal macrophages from BALB/c, C57BL/6, and C57BL/6 knock-out (TLR2 -/- e TLR4 -/-) lineages were primed with IFN- and stimulated with LPG from both species. Cytokine production (IL-1β, IL-2; IL-4, IL-6, IL-10, IL-12p40, IFN- and TNF-α) and nitrite concentration were determined by flow cytometry and Griess reaction, respectivelly. Western blot was performed to evaluate the activation of the MAPKs ERK and p38. Macrophages stimulated with L. braziliensis LPG, had a higher TNF-α, IL-1β, IL-6 e NO production than those stimulated with L. infantum’s. A different MAPK activation kinetics between the two species was detected. Leishmania infantum LPG exhibited a gradual activation profile until 45 min after stimulation, whereas L. braziliensis LPG showed an activation peak at 15 min. These data suggest that interpecies variations in Leishmania LPG may have an important role during initial steps of infection in the host’s innate imune system.
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Estudo de Flebotomíneos (Diptera: Psychodidae) no município de Divinópolis, Minas Gerais, Brasil

Nascimento, Bruno Warlley Leandro January 2013 (has links)
Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-05-24T13:07:02Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Bruno Nascimento.pdf: 2690979 bytes, checksum: 8895b1e7cb440d8618cfcad07cc3cb46 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-24T13:07:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Bruno Nascimento.pdf: 2690979 bytes, checksum: 8895b1e7cb440d8618cfcad07cc3cb46 (MD5) Previous issue date: 2013 / A transmissão das espécies de Leishmania aos hospedeiros vertebrados envolve várias espécies de flebotomíneos no Brasil. Um estudo sobre a composição da fauna de flebotomíneos foi realizado no município de Divinópolis, Minas Gerais, Brasil, área endêmica para leishmaniose tegumentar (LT), e de transmissão moderada para leishmaniose visceral (LV). Foram realizadas coletas sistematizadas mensais para captura de flebotomíneos durante um ano, de setembro de 2010 a agosto de 2011, com armadilhas luminosas HP instaladas em área urbana, em 15 peridomicílios de casas onde se registrou pelo menos um caso de LT ou LV, e em 5 fragmentos de mata. Também foram realizadas coletas não sistematizadas utilizando armadilhas de Shannon nos fragmentos de mata. A detecção de DNA de Leishmania sp. nos espécimes de flebotomíneos foi realizada por meio da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e para a identificação da amostra positiva foi utilizada a técnica de sequenciamento genético de fragmentos de DNA. Um total de 1.088 espécimes de flebotomíneos foram coletados pertencentes ao gênero Brumptomyia e Lutzomyia, e 18 espécies. Lutzomyia longipalpis, o principal vetor da Leishmania infatum no Brasil, foi a espécie mais freqüente, sendo encontrada em 14 das 20 localidades. As espécies Lu. longipalpis e Lu. whitmani foram as únicas coletadas em todos os meses de estudo. Nenhuma das espécies foi encontrada em todas as localidades de estudo. As cinco espécies mais frequentes foram: Lu. longipalpis (76,9%), Lu. lenti (8,3%), Lu. whitmani (5,0%), Lu. sallesi (2,8%) e Lu. aragaoi (2,2%). Não foi observada correlação estatisticamente significativa entre densidade total de flebotomíneos e variáveis climáticas durante o período de estudo. As análises moleculares detectaram DNA de Leishmania infantum em um exemplar de Lu. longipalpis. Os dados apontam para a necessidade de medidas de controle da população de flebotomíneos no município de Divinópolis e adoção de estratégias de vigilância entomológica. / The transmission of Leishmania species to vertebrate hosts involves several species of sand flies in Brazil. A study of the sand flies fauna composition was carried out in the city of Divinópolis, Minas Gerais state, Brazil, an endemic area for cutaneous leishmaniasis (CL), and of moderated transmission of visceral leishmaniasis (VL). Monthly systematic collections were made during one year, from September 2010 to August 2011. The HP light traps were installed inperidomicile of 15 houses where at least one case of CL or VL has been recorded and in five forested areas. Systematized collections were carried out using Shannon traps. The detection of DNA of Leishmania sp. in the sand fly specimens was performed by Polymerase Chain Reaction (PCR) and the technique for identification of positive samples genetic sequencing of DNA fragments technique. A total of 1,088 specimens of sand flies were collected, belonging to the genera Brumptomyia e Lutzomyia and 18 species. Lutzomyia longipalpis, the main vector of Leishmania infatum in Brazil, was the most frequent species, being collected in 14 of the 20 locations. The species Lu. longipalpis and Lu. whitmani were the only ones collected in every month studied. None of the collected species were found in all localities sampled. The five most abundant species were: Lu. longipalpis (76.9%), Lu. lenti (8.3%), Lu. whitmani (5.0%), Lu. sallesi (2.8%) and Lu. aragaoi (2.2%). No significant statistical correlation between the total sand fly density and the climatic variables was found. Molecular analysis identified natural infection by Leishmania infantum in one specimen of Lu. longipalpis. The data points to for measures to control the sand fly populations and adoption of strategies for entomological surveillance in Divinópolis municipality.
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Estudo da Leishmaniose Tegumentar na Terra Indígena Xakriabá: o parasito, os hospedeiros e os vetores

Quaresma, Patrícia Flávia January 2012 (has links)
Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2012-09-11T17:23:49Z No. of bitstreams: 1 Tese_2012_Patricia Quaresma.pdf: 5774019 bytes, checksum: beed1621303399192cb8877058253554 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-11T17:23:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_2012_Patricia Quaresma.pdf: 5774019 bytes, checksum: beed1621303399192cb8877058253554 (MD5) / FAPEMIG (processo Nº: CBB - APQ-00289-10), CNPq (processo Nº: 479408/2010-6), FIOCRUZ (processo Nº: 403562/2008-2), Comunidade Européia (Control Strategies for visceral leishmaniasis and mucocutaneous leishmaniasis in South America: applications of molecular epidemiology) / Neste trabalho foi realizado um estudo multidisciplinar sobre a leishmaniose tegumentar relacionado ao parasito, aos hospedeiros e aos vetores na Reserva Indígena Xakriabá, norte de Minas Gerais, Brasil. Uma amostra populacional das aldeias Imbaúbas I e II foi caracterizada para a identificação dos casos clínicos e assintomáticos. Os casos de LTA provenientes das outras aldeias da Reserva Xakriabá também foram identificados. Todos foram caracterizados quanto às variáveis demográficas, infecções passadas, presença de co-morbidades, características das lesões e aspectos relacionados ao tratamento. Além deste estudo com os humanos, foi desenvolvido um estudo para verificar a infecção por Leishmania em pequenos mamíferos silvestres e cães domésticos, estimando a proporção de infectados. As espécies de flebotomíneos vetores foram determinadas na área. Por fim, foi realizado um estudo sobre a variabilidade genética de Leishmania (Viannia) braziliensis proveniente de diferentes hospedeiros vertebrados. A prevalência da doença nas aldeias Imbaúbas foi estimada em 8,6%. A partir de 92 casos suspeitos foram detectados 87 casos de LTA em toda a Reserva. Destes, 72 foram confirmados por algum exame parasitológico e/ou PCR. A maioria dos pacientes (70,0%) eram portadores de lesões atípicas, somente 27,6% apresentaram úlceras típicas e 2 pacientes eram portadores tanto de úlcera típica quanto de lesões atípicas. Foram identificadas três espécies de Leishmania circulando entre os roedores, marsupiais e cães domésticos: L. braziliensis, L. infantum e L. guyanensis. Um total de 1327 espécimes de flebotomíneos foi obtido. As espécies mais capturadas foram Lutzomyia longipalpis (756 exemplares – 57%) e Lu. intermedia (297 exemplares – 22%). Cabe ressaltar que foi coletado um número considerável de fêmeas de Lu. intermedia (244), principal vetor de LTA causada por L. braziliensis em Minas Gerais. Foi verificada a presença, em número bastante reduzido (3 exemplares), de Lu. whitmani, espécie considerada vetora em importantes focos de LTA no Brasil. O estudo do polimorfismo genético de L. braziliensis mostrou que existem duas populações deste parasito circulando entre os hospedeiros vertebrados. Uma forte associação foi verificada entre as duas populações de L. braziliensis e o tipo de manifestação clínica. Os parasitos que apresentaram um perfil idêntico às cepas referência de L. braziliensis estavam relacionados a lesões do tipo úlcera típica, enquanto os parasitos que apresentaram perfil variante parecem induzir lesões atípicas. A chance de ter lesão típica é cerca de cinco vezes maior entre os pacientes portadores de parasitos com perfil idêntico a L. braziliensis / A multidisciplinary study related to cutaneous leishmaniasis investigated the parasites, the hosts and vectors in Xakriabá Indian Reservation, north of Minas Gerais, Brazil. A sample population of the villages Imbaúba I and II was characterized for the identification of clinical cases and asymptomatic individuals. The cases of LTA from the other villages of the Reserve Xakriabá were also identified. All were analyzed for demographic variables, past infections, presence of comorbidities, lesion characteristics and aspects related to treatment. In addition to this study with humans, a study was developed to verify the Leishmania infection in small wild mammals and domestic dogs, estimating the proportion of infected. The species of sandfly vectors were determined in the area. Finally, a study was conducted on the genetic variability of Leishmania (Viannia) braziliensis from different vertebrate hosts. The prevalence of the disease in Imbaúbas villages was estimated at 8.6%. Eigthy-seven cases of ACL were detected from 92 suspected cases throughout the Reserve. Among the 87 diagnosed cases, 72 were confirmed by a parasitological examination and/or PCR. Most patients (70.0%) had atypical lesions, only 27.6% had typical ulcer and 2 patients had both typical ulcer and atypical lesions. We identified three Leishmania species circulating among rodents, marsupials and domestic dogs: L. braziliensis, L. infantum and L. guyanensis. A total of 1,327 specimens of sandflies were obtained. The most captured species were Lutzomyia longipalpis (756 copies - 57%) and Lu. intermedia (297 copies - 22%). It is noteworthy that was collected a considerable number of females of Lu. intermedia (244), the main vector of ACL caused by L. braziliensis in Minas Gerais. The presence of Lu. whitmani was found in very small number (3 copies), this specie is considered important vector in foci of leishmaniasis in Brazil..The study of genetic polymorphism of L. braziliensis showed that there are two populations of this parasite circulating among vertebrate hosts. A strong association was found between the two populations of L. braziliensis and the type of clinical manifestation. The parasites that showed a profile identical to reference strains of L. braziliensis were related to injuries of the type typical ulcer, while the parasites that appear to induce variant profile showed atypical lesions. The chance of having a typical lesion is about five times higher among patients with parasites with identical profile to L. braziliensis
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Flebotomíneos (Diptera: Psychodidae) e as Leishmanioses na Terra Indígena Xakriabá, Minas Gerais, Brasil

Rêgo, Felipe Dutra January 2013 (has links)
Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-06-03T12:32:17Z No. of bitstreams: 1 Dissertação padronizada_Felipe Dutra Rêgo 2013 versao final.pdf: 3338152 bytes, checksum: 4b1ea54844c41caffe2e3dd7db69355e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-03T12:32:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação padronizada_Felipe Dutra Rêgo 2013 versao final.pdf: 3338152 bytes, checksum: 4b1ea54844c41caffe2e3dd7db69355e (MD5) Previous issue date: 2013 / As leishmanioses são protozooses de alta prevalência em regiões tropicais como o Brasil e são transmitidas por vetores flebotomíneos, cujos hospedeiros são compostos por diferentes espécies animais vertebrados. O objetivo deste trabalho foi estudar os aspectos entomológicos relacionados à epidemiologia das leishmanioses na aldeia Imbaúbas da Terra Indígena Xakriabá, Município de São João das Missões, Minas Gerais. Durante o período de julho de 2008 a julho de 2009 foram realizadas seis coletas de flebotomíneos sendo dispostas 40 armadilhas luminosas no peridomicílio de 20 casas sorteadas aleatoriamente. Entre outubro de 2011 a agosto de 2012 foram realizadas seis campanhas de captura de flebotomíneos e 20 armadilhas luminosas foram distribuídas em 4 trilhas (cinco armadilhas por trilha) previamente demarcadas para estudo de hospedeiros silvestres e sinantrópicos de Leishmania. Foram utilizados testes estatísticos para avaliar diferenças no padrão de distribuição de espécies, riqueza e abundância de flebotomíneos nos diferentes ecótopos. Um total de 8.046 flebotomíneos pertencentes a 28 espécies e 11 gêneros foram coletados e identificados. As spécies Lutzomyia longipalpise Nyssomyia intermediaforam as mais abundantes no peridomicílio enquanto Martinsmyia minasensise Lutzomyia cavernicolaas mais abundantes nas trilhas de coleta. As fêmeas foram dispostas em "pools" contendo no máximo dez espécimes da mesma localidade, espécie e data de coleta para pesquisa de DNA de Leishmania spp. por métodos moleculares. A identificação da espécie de Leishmaniafoi feita a partir da técnica de ITS1PCR-RFLP utilizando a enzima HaeIIIe o sequenciamento genético para um alvo do gene SSUrRNA. Foi possível detectar a presença de DNA de Leishmaniaem 11 amostras provenientes do peridomicílio: Lu. longipalpis (2), Ny. intermedia(4); Lu. renei(2); Lu. ischnacantha; Micropygomyia goiana e Evandromyia lenti. Com relação às trilhas, foi possível verificar a presença de DNA de Leishmania em 12 amostras: Mt. minasensis (5); Ny. intermedia(3); Mi. peresi(2); Mi. capixabae Ev. lenti. Os resultados obtidos reforçam a importância epidemiológica das espécies Lu. longipalpise Ny. intermediana transmissão da leishmaniose visceral e tegumentar respectivamente, além do encontro de outras espécies com DNA de Leishmania como Mt. minasensise Ev. lenti que podem participar de um ciclo silvestre e/ou sinantrópico de Leishmania na área de estudos / Leishmaniases are protozooses highly prevalent in tropical regions such as Brazil and are transmitted by sand flies vectors, whose hosts are different vertebrate species. The objective of this study was to survey the entomological aspects related to the epidemiology of this disease in Imbaúbas village of the Xacriabá Indian Reserve, São João das Missões municipality, Minas Gerais state. Between July 2008and July 2009, six sand fly collections were carried out using 40 light traps placed in theperidomicile of 20 randomly selected houses. Between October 2011 and August 2012, another six collections to capture sand flies were carried out with 20 light traps distributed in 4 tracks (five traps per track) selected for a previous study of wild and synanthropic hostsof Leishmania. Statistical tests were used to evaluate differences in the distribution patterns, richness and abundance of sand flies in different ecotopes. A total of 8.046 sand flies belonging to 28 species and 11 genera were collected and identified. The species Lutzomyia longipalpisand Nyssomyia intermediawere the most abundant in peridomicile, while Martinsmyia minasensisand Lutzomyia cavernicola were the most abundant on the tracks. Females were organized in poolswith a maximum of ten specimens from the same locality, species and date for detection of Leishmaniaspp. by molecular methods. Leishmaniaspecies identification was made with ITS1PCR-RFLP using the enzyme HaeIIIand genetic sequencing was used for SSUrRNA target. The presence of LeishmaniaDNA was detected in 11 samples from peridomicile: Lu. longipalpis (2), Ny. intermedia(4), Lu. renei(2), Lu. ischnacantha, Micropygomyia goiana and Evandromyia lenti. On the tracks, it was possible to verify the presence of LeishmaniaDNA in 12 samples: Mt. minasensis (5), Ny. intermedia(3), Mi. peresi(2), Mi. capixabaand Ev. lenti. The results support the epidemiological importance of Lu. longipalpisand Ny. intermedia in the transmission of visceral and cutaneous leishmaniases respectively, in addition to the finding of other species associated with Leishmania DNA, such as Mt. minasensisand Ev. lenti which may participate in a wild and/or synanthropiccycle of Leishmaniain the tudied area.
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Desenvolvimento de uma metodologia semi-automatizada para busca denovas drogas utilizando Leishmania amazonensisfluorescente

Rocha, Marcele Neves January 2013 (has links)
Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-08-07T13:30:22Z No. of bitstreams: 1 Tese_MarceleNevesRocha.pdf: 3850783 bytes, checksum: e18bb3542328e15691057c221725ec86 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-07T13:30:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_MarceleNevesRocha.pdf: 3850783 bytes, checksum: e18bb3542328e15691057c221725ec86 (MD5) Previous issue date: 2013 / As Leishmanioses são doenças negligenciadas. O tratamento dos pacientes é a principal medida de controle, porém a quimioterapia das Leishmanioses apresenta dificuldades incluindo: toxicidade dos medicamentos disponíveis, via de administração parenteral e resistência natural de algumas cepas. O método de teste de drogas clássico in vitro baseado na contagem microscópica de macrófagos infectados apresenta limitações por ser laborioso, não automatizado e sujeito a variações do observador. Deste modo, a busca por novos métodos de triagem de drogas faz-se necessário. O estabelecimento de métodos semi-automatizados contribuiria para aumentar a eficiência da busca de novas drogas contra Leishmania. Neste trabalho, a cepa de Leishmania amazonensis (PH8) foi transfectada com a proteína vermelha fluorescente (RFP). Os parasitos transfectados foram avaliados segundo parâmetros celulares e de susceptibilidade aos fármacos leishmanicidas tradicionais e derivados do propranolol. Os parasitos selvagens (WT) e transfectados (RFP) foram analisados pela Citometria de Fluxo e Microscopia de Fluorescência sendo facilmente discriminados por estas técnicas. Em geral, não foram observadas diferenças na susceptibilidade entre as cepas WT e RFP frente às moléculas testadas. Os parasitos RFPs foram submetidos ao teste de drogas com posterior leitura no fluorímetro para a padronização do método fluorimétrico. O método fluorimétrico se mostrou bastante reprodutível em relação ao método clássico. Entretanto, durante a padronização do método, mudanças na concentração das drogas foram necessárias bem como a determinação de um ponto de corte nos valores de IC50. Este trabalho também avaliou a atividade leishmanicida dos derivados das poliaminas e complexos metálicos de lapachol utilizando-se o método clássico. Não só os derivados do propranolol, mas também os das poliaminas e lapachol se mostraram tóxicos paracélulas de Hepatoma humano (HepG2). Este trabalho possibilitou pela primeira vez a utilização de parasitos RFPs como modelo de um teste de drogas semi-automatizado. / The leishmaniasis are neglected diseases. Patient treatment is the main control measure, however leishmanisasis chemotherapy faces several problems including: drug toxicity, the administration rout and natural drug resistance. Also, the classical in vitro drug testing method, which is based on microscopically counting the number of infected macrophages is rather limited, laborious cannot be automated and is subjected to variations due to observer. For this reason, the search for new methods and establishment of semi-automated methos id necessary to improve the efficiency of new drugs discovery. In this present work, Leishmania amazonensis strain PH8 was transfected with the red fluorescent protein (RFP). Transfected parasites were evaluated for their cellular parameters and susceptibility against traditional drugs and novel propranolol derivates. Wild type (WT) and transfected (RFP) parasites were analyzed by flow citometry and fluorescent microscopy. Overall we did not observe any difference in drug susceptibility between WT and RFP parasites. RFP parasite were then submitted drug susceptibility test and analyzed by fluorimeter. The fluorimetric method showed a comparable reproducibility to the standard method. However, during experimentation, some adjustments on drug concentrations were necessary to determine IC50 threshold values. Additionally, in this work, weevaluated the activity of polyamine derivates and (metalic lapachol complexes) against leishmania by the classical method. Propranolol derivates, polymaine and metalic lapachol complexes were shown to be citotoxic as shown by HepG2 cell cultures. This work was the first to show the use of RFP parasites as a model for drug screening in a semi-automated method.
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Eco-epidemiologia das leishmanioses em Jaboticatubas, Serra do Cipó, um importante pólo turístico de Minas Gerais

Lana, Rosana Silva January 2014 (has links)
Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-09T13:13:52Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_RosanaSilvaLana-1.pdf: 5071591 bytes, checksum: 7c24aa2bae0d59273791b3e4b3bf4b12 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-09T13:14:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_RosanaSilvaLana-1.pdf: 5071591 bytes, checksum: 7c24aa2bae0d59273791b3e4b3bf4b12 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-09T13:14:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_RosanaSilvaLana-1.pdf: 5071591 bytes, checksum: 7c24aa2bae0d59273791b3e4b3bf4b12 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-09T13:14:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_RosanaSilvaLana-1.pdf: 5071591 bytes, checksum: 7c24aa2bae0d59273791b3e4b3bf4b12 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / A proposta deste estudo foi avaliar a transmissão das leishmanioses no município de Jaboticatubas, Serra do Cipó, região turística de Minas Gerais. Para tal, foram realizados estudos entomológicos e de reservatórios urbanos da doença. Para os estudos entomológicos foram selecionados oito bairros, levando-se em consideração a ocorrência de casos humanos, e colocadas armadilhas luminosas do tipo HP, no peridomicílio de 10 residências, durante três noites consecutivas por mês, entre maio de 2012 a abril de 2013. A fauna flebotomínica estudada foi composta de 3.104 exemplares, sendo bastante diversificada com 17 espécies do gênero Lutzomyia e duas fêmeas do gênero Brumptomyia. Com relação às espécies de importância médica e também numerosas, ressaltamos o encontro de Lu. whitmani (33,80%), Lu. Intermédia (14,60%) e Lu. longipalpis (7,96%). A taxa de infecção natural geral dos flebotomíneos por Leishmania foi de 3,40%. Foram analisados 249 “pools” de diferentes espécies de flebotomíneos, dentre estes 32 estavam positivos. Para o estudo da taxa de infecção canina, realizou-se inquérito censitário em cães domiciliados em área urbana do município. Foram coletadas 1.105 amostras de soros que foram testadas por meio do DPP® e as positivas confirmadas as infecções através do Ensaio Imunoenzimático ELISA, obtendo-se a taxa média de prevalência canina de 7,78%. Dos 86 cães positivos, foi escolhida uma amostra aleatória de 11 deles, que foram necropsiados e com as amostras de biópsia de tecidos obtidas foram realizados “imprints”, cultura de parasitos e PCR. Foi realizado o georreferenciamento na zona urbana de todos os casos caninos e humanos de leishmanioses dos últimos 6 anos, e construído um mapa mostrando a distribuição dos casos. A PCR de aspirado medular apresentou maior positividade (63,60%) em relação à pele (9,00%). Já nos “imprints”, a taxa de positividade da pele foi de 36,36% e de medula 0%. Quanto à cultura de aspirados de medula óssea, a positividade foi de 27,27%. Nossos resultados indicam a urbanização das leishmanioses no município, devido à alta densidade vetorial e infecção por Leishmania, expressiva taxa média de prevalência de infecção canina e recentes registros de casos humanos, Portanto, é importante intensificar as ações de controle a fim de evitar que o problema se agrave no município. / The purpose of this study was to evaluate the transmission of leishmaniasis in Jaboticatubas, Serra do Cipó, tourist region of Minas Gerais. For this, entomological studies and urban reservoirs of the disease were conduzed. To entomological studies eight districts were selected, taking into account the occurrence of human cases, and light traps HP type were placed in the outdoors in10 homes for three consecutive nights per month from May 2012 to April 2013. The sand flies studied consisted of 3,104 specimes, quite diverse with 17 species of Lutzomyia and two females of the genus Brumptomyia. With regard to species of medical importance and also numerous, emphatize the meeting of Lu.whitmani (33.80 %), Lu. intermedia (14.60%) and Lu. longipalpis (7.96 %). The general rate of natural infection of sand flies by Leishmania was 3.40%. 249 "pools" of different sandfly species, among them 32 were positive. To study the rate of canine infection was held census survey among domestic dogs in urban area. 1,105 serum samples were tested by the DPP® and confirmed positive infections by ELISA immunoenzymatic assay, obtaining the average prevalence of canine 7.78%. Of the 86 positive dogs, was selected a random sample of 11 of them , which were necropsied and samples of biopsy tissue obtained were performed " imprints ", culture of parasites and PCR . Georeferencing was conducted in urban areas of all canine and human leishmaniasis cases in the last 6 years, and built up a map showing the distribution of cases. The PCR of marrow aspirate showed a higher positivity (63.60%) compared to skin (9.00%) While the "imprints", the positivity rate of skin was 36.36 % and 0 % marrow. As for the culture of marrow aspirates, the positivity was 27.27%. Our results indicate the urbanization of leishmaniasis in the municipality due to high vector density and infection by Leishmania, expressive average rate of prevalence canine infection and recent records of human cases, therefore, is important to intensify control actions in order to prevent the problem from getting worse in the municipality.
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Análise espacial das leishmanioses no município de Divinópolis, Minas Gerais, Brasil

Teixeira Neto, Rafael Gonçalves January 2014 (has links)
Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-15T12:20:48Z No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_RafaelGoncalvesTeixeiraNeto.pdf: 9728378 bytes, checksum: 9aa64df9a24c4ed1f3ed10cd3eba51d5 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-15T12:20:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_RafaelGoncalvesTeixeiraNeto.pdf: 9728378 bytes, checksum: 9aa64df9a24c4ed1f3ed10cd3eba51d5 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-15T12:21:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_RafaelGoncalvesTeixeiraNeto.pdf: 9728378 bytes, checksum: 9aa64df9a24c4ed1f3ed10cd3eba51d5 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-15T12:21:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_RafaelGoncalvesTeixeiraNeto.pdf: 9728378 bytes, checksum: 9aa64df9a24c4ed1f3ed10cd3eba51d5 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / As Leishmanioses compreendem um grupo de doenças parasitárias, distribuídas em países tropicais e subtropicais, em ciclos zoonóticos e antroponóticos e constituem um grave problema de saúde pública. No Brasil, as leishmanioses eram caracterizadas como endemias rurais, no entanto, casos autóctones vêm sendo notificados em centros urbanos e sua distribuição vem se ampliando consideravelmente. O município de Divinópolis é considerado região endêmica para Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) e a ocorrência de Leishmaniose Visceral (LV) apesar de recente, vem se expandindo nos últimos anos. Com base neste cenário, o presente estudo objetivou ampliar o conhecimento sobre a situação epidemiológica da LV e da LTA no município de Divinópolis, enfatizando a distribuição espacial dos hospedeiros vertebrados e dos casos humanos na área urbana. Um total de 102 pequenos mamíferos foi capturado no período de um ano em cinco áreas de mata espalhadas na zona urbana do município e em 15 residências com casos de LTA ou LV notificados entre 2005 e 2010. Deste total, três exemplares foram identificados naturalmente infectados por Leishmania através da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Também foi avaliada a distribuição espacial dos casos humanos de LTA notificados entre os anos de 2007 e fevereiro de 2013. A circulação de Leishmania infantum foi confirmada através do isolamento do parasito em cães soropositivos. Foi realizado um inquérito sorológico para Leishmaniose Visceral Canina (LVC) em toda a zona urbana do município utilizando uma amostragem estratificada e uma prevalência de 3%. Dos 3.652 cães avaliados distribuídos nos 11 estratos do município 169 apresentaram sorologia positiva, com prevalência estimada de 4,62% (3,95 – 5,31). Todas as quadras amostradas no inquérito da LVC e casos humanos de LV ocorridos no municipio foram georreferenciados. A análise de dependência espacial confirmou que existe uma correlação positiva entre a ocorrência de LVC e casos humanos de LV. Estes achados contribuem para a compreensão da epidemiologia da LTA e da LV no município de Divinópolis e podem auxiliar na definição de áreas prioritárias para a implementação de medidas de controle. / The Leishmaniases comprise a group of parasitic diseases, distributed in tropical and subtropical countries in zoonotic and anthroponotic cycles and are a serious public health problem. In Brazil, leishmaniases were characterized as rural endemic diseases, however, autochthonous cases have been reported in urban centers and their distribution has expanded considerably. The municipality of Divinópolis is considered an endemic area for American Cutaneous Leishmaniasis (ACL) and the occurrence of Visceral Leishmaniasis (VL) although recent, has expanded in recent years. Based on this scenario, the present study aimed to increase knowledge of the epidemiological situation of VL and ACL in the municipality of Divinópolis, emphasizing the spatial distribution of vertebrate hosts and human cases in the urban area. A total of 102 small mammals were captured during one year in five forest areas scattered in the urban area and 15 residences with cases of ACL or VL reported between 2005 and 2010. From these, three specimens were identified naturally infected by Leishmania by Polymerase Chain Reaction (PCR). We also evaluated the spatial distribution of human cases of ACL reported between the years 2007 and February 2013. Leishmania infantum circulation has been confirmed by isolation of parasites in seropositive dogs. A serological for Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) was conducted across the urban area using a stratified sampling and a prevalence of 3%. Among the 3,652 evaluated dogs distributed in 11 strata of the city 169 had a positive serology, with an estimated prevalence of 4.62% (3.95 to 5.31). All blocks sampled in the survey of CVL and human cases of VL occurring in the municipality were georeferenced. The spatial dependence analysis confirmed a positive correlation between the occurrence of CVL and human cases of VL. These findings contribute to the understanding of the epidemiology of ACL and VL in Divinópolis city and can assist in definition of priority areas for the implementation of control measures.
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Ecoepidemiologia e Controle da Leishmaniose Visceral no município de Belo Horizonte (Minas Gerais, Brasil)

Silva, Fabiana de Oliveira Lara e January 2015 (has links)
Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-20T18:51:23Z No. of bitstreams: 1 fabiana.pdf: 63742461 bytes, checksum: 0ba3064ab0df6fc4dbb19dc66da0ff61 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-20T18:51:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 fabiana.pdf: 63742461 bytes, checksum: 0ba3064ab0df6fc4dbb19dc66da0ff61 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-20T18:51:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fabiana.pdf: 63742461 bytes, checksum: 0ba3064ab0df6fc4dbb19dc66da0ff61 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Rene Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / Este estudo foi realizado em Belo Horizonte (Minas Gerais, Brasil), área endêmica para Leishmaniose visceral (LV), onde a doença vem se expandindo rapidamente, com 1.612 casos registrados nos últimos 10 anos. Nossa pesquisa avaliou o perfil epidemiológico em duas Áreas de abrangência (AA) dos Centros de Saúde (CS) Miramar e Salgado Filho do município de Belo Horizonte, com transmissão recente de LV, buscando compreender a tríade envolvida na transmissão: parasito-vetor-reservatório. Cada AA foi dividida em três trechos, controle, borrifação e manejo, a fim de avaliar o impacto das medidas de controle no número mensal de Lutzomyia longipalpis, através da curva flebotomínica. Em todos os trechos a captura de flebotomíneos e o inquérito canino censitário foram realizados. Durante 24 meses (setembro/2010 a agosto/2012) foram capturados 5194 flebotomíneos, distribuídos em 6 espécies, sendo Lu. longipalpis, vetora da LV, a espécie predominante (96,54%). Houve uma correlação entre a precipitação pluviométrica e o número de Lu. longipalpis capturados, mostrando que o número de espécimes de flebotomíneos capturados aumentou após o período chuvoso. Através do uso da Leishmania Nested PCR e sequenciamento, foram analisados 93 “pools” espécie-específicos. Leishmania infantum e Le. braziliensis foram encontradas em 23 e em 2 dos 26 “pools” de Lu. longipalpis, respectivamente. O DNA de Le. infantum foi encontrado em um “pool” de cada uma das espécies Lu. lloydi e complexo cortelezzii. A taxa mínima de infecção natural de flebotomíneos na área foi alta, 18,8% para Lu. Longipalpis, 20% para complexo cortelezzii e 100% para Lu. lloydi. Em relação às medidas de controle, observamos uma redução estatisticamente significativa no número de flebotomíneos no trecho manejo ambiental, enquanto houve apenas uma tendência de queda no número de flebotomíneos no trecho borrifação. Em relação ao reservatório doméstico, um total de 1408 cães foram examinados em 2011 através de testes sorológicos; 3,6% apresentaram-se soropositivos para LV canina (LVC). Biópsias de linfonodo, pele, baço e aspirado de medula óssea destes animais foram obtidos e analisados através do diagnóstico parasitológico e molecular. A positividade tanto para mielocultura como para o técnica de aposição em lâmina foi de 72.5%. Todas as amostras de baço mostraram-se positivas para LnPCR, indicando a presença de Le. infantum nas 51 amostras. O linfonodo foi o tecido menos sensível na PCR (57%) em relação aos demais. Cães sintomáticos demonstraram uma tendência a ter mais testes positivos. Nossos resultados mostram que as interfaces parasito-vetor e parasitoreservatório são ativas em áreas de médio risco para transmissão de LV, e que ações eficazes e rápidas devem ser implementadas para controlar a expansão da doença. / This study was conducted in Belo Horizonte (Minas Gerais, Brazil), an endemic area for visceral leishmaniasis (VL), where the disease has been expanding rapidly, with 1,612 cases recorded in the last 10 years. Our research assessed the epidemiological profile in two coverage areas (AA) of the Miramar and Salgado Filho Health Centers (HC) in the city of Belo Horizonte, with recent transmission of VL, willing to understand the triad involved in the transmission: parasite-vector-reservoir. Each AA was divided into three sections, control, spraying and management in order to assess the impact of control measures in the monthly number of Lutzomyia longipalpis through the sand fly curve. In all the sections, the capture of sand flies and canine census survey was conducted. For 24 months (from September / 2010 to August / 2012), 5194 sandflies were captured and distributed into 6 species. Lu. longipalpis, vector of LV, was the predominant species (96.54%). There was a correlation between the precipitation and the number of Lu. longipalpis captured, showing that the number of captured sandflies of specimens increased after the rainy season. With the use of Leishmania nested PCR and sequencing, 93 species-specific "pools" were analyzed. Out of the 26 Lu. longipalpis positive “pools”, Leishmania infantum was found in 23 while Le. braziliensis was found in 2. Le. infantum DNA was found in a "pool" of each species Lu. lloydi and cortelezzii complex. The sand flies natural infection minimum rate in the area was high, 18.8% for Lu. Longipalpis, 20% for cortelezzii complex and 100% for Lu. lloydi. Regarding control measures, we observed a statistically significant reduction in the number of sand flies in the environmental management section, while there was only a decreasing trend in the sand flies number in the spraying section. Concerning the domestic reservoir, 1408 dogs were examined in 2011 by serological tests; 3.6% were positive for canine visceral leishmaniasis (CVL). Lymph node biopsies, skin, spleen and bone marrow aspirate were obtained from these animals and analyzed using parasitological and molecular diagnosis. Positivity for both mielocultura as "imprint" was 72.5%. All spleen samples were positive for LnPCR, indicating the presence of Le. infantum in 51 samples. The lymph node was the least sensitive tissue in the PCR (57%), in relation to the others. Symptomatic dogs showed a tendency to have results that are more positive on the tests. Our results show that the vector-parasite and parasite reservoir interfaces are active in areas of medium risk of VL transmission, and rapid and effective actions must be implemented to control the spread of the disease.
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Epidemiologia das leishmanioses no distrito de Barra do Guaicui, município de Várzea da Palma, Minas Gerais, Brasil

Sanguinette, Cristiani de Castilho January 2015 (has links)
Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-09-08T13:19:05Z No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_CristianideCastilhoSanguinette - T_97.pdf: 18450256 bytes, checksum: 4cda2f86042db8ee71128cabc8d9436b (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-09-08T18:05:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_CristianideCastilhoSanguinette - T_97.pdf: 18450256 bytes, checksum: 4cda2f86042db8ee71128cabc8d9436b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-08T18:05:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_CristianideCastilhoSanguinette - T_97.pdf: 18450256 bytes, checksum: 4cda2f86042db8ee71128cabc8d9436b (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / As leishmanioses são um complexo de doenças e sua epidemiologia somente pode ser compreendida pelo conhecimento de todos os elos que compõem seu ciclo de transmissão, como reservatórios, vetores e espécies de parasitos envolvidos e suas relações ecológicas. O objetivo deste trabalho foi estudar a epidemiologia das leishmanioses no distrito de Barra do Guaicui, município de Várzea da Palma, Minas Gerais. Foram realizadas no ano de 2012 cinco coletas de flebotomíneos em 24 casas da área urbana e doze coletas durante os anos de 2013 e 2014 em três ambientes distintos (urbano, transição e mata), utilizando armadilhas luminosas HP. As fêmeas coletadas foram identificadas e submetidas à verificação de infecção natural pela dissecção do tubo digestório e a detecção de DNA do parasito (LnPCR) em amostras individuais. Para o segundo período de estudo foram verificados e comparados os padrões de distribuição, a riqueza, uniformidade, e abundância dos flebotomíneos nas diferentes áreas. Para o estudo dos hospedeiros silvestres e sinantrópicos de Leishmania foram instaladas duas armadilhas, uma do tipo Sherman e outra do tipo gaiola, em cada uma das casas amostradas para o ano de 2012 e, além destes pontos foram definidas três trilhas, com 15 armadilhas tipo Sherman e 15 tipo gaiola por trilha, em área limítrofe ao perímetro urbano. No ano de 2013 as coletas de pequenos mamíferos foram conduzidasnos mesmos pontos de coleta dos flebotomíneos e utilizando a mesma metodologia. O estudo da infecção dos pequenos mamíferos foi realizado utilizando técnicas moleculares. Um total de 5.831 flebotomíneos pertencentes a quinze espécies e oito gêneros foi coletado e identificado. A espécie mais prevalente foi Nyssomyia intermedia, seguida de Lutzomyia longipalpis, importantes vetoras dos agentes etiológicos da forma tegumentar e visceral em humanos, respectivamente. A área urbana teve a maior abundância enquanto a área de transição teve a maior diversidade e uniformidade de espécies. Nyssomyia intermedia foi a espécie mais abundante na área urbana, enquanto Evandromyia evandroi foi a mais abundante na área de transição e Ev. lenti na área silvestre. Nenhuma forma flagelada foi encontrada pela técnica da dissecção. Foi detectada a presença de DNA de Leishmania nas seguintes espécies: Ny. intermedia (0,9%), Lu. longipalpis (2,9%), Ev. termitophila (3,0%), Ev. sallesi (1,8%), Ev. evandroi (1,5%), Ev. neivai (1,1%), Ev lenti (0,9%) e Ev. walkeri (9,0%) todas com DNA de parasitos do complexo Le. braziliensis. Nyssomyia intermedia (0,3%), Ev. evandroi (1,5%), Ev. lenti (1,8%), Ev. sallesi (1,2%), Lu. longipalpis (0,58%), Ny. neivai (1,1%) e Psathyromyia lutziana (33,3%) apresentaram positividade para parasitos do complexo Le. donovani. Das 47 amostras positivas para a presença de DNA de Leishmania, 34 (72,3%) eram provenientes da área urbana, três (6,4%) da área de transição e dez (21,3%) da área de mata. A fauna de pequenos mamíferos foi composta pelas espécies Rattus rattus (19,4%), Didelphis albiventris (44,4%) e Thricomys apereoides (36,1%). Rattus rattus foi capturado apenas na área urbana, T. apereoides apenas na área silvestre e D. albiventris nos três ambientes amostrados. As duas últimas espécies foram encontradas infectadas por Le. braziliensis na área de mata e na de transição, respectivamente. Nossos resultados contribuem para a compreensão do processo gradual de sinantropização das espécies de flebotomíneos encontradas no estado de Minas Gerais, demostrando que o município de Várzea da Palma apresenta todas as características necessárias para a expansão das leishmanioses, visceral e tegumentar. / Leishmaniasis are a complex of diseases and their epidemiology is understood only if all the links that compound its transmission cycle are known, such as reservoirs, vectors and parasites species and their ecological relationships. The aim of this research was to study the epidemiology of leishmaniasis in the District of Barra do Guaicui, municipality of Varzea da Palma, Minas Gerais State, Brazil. Five collections of phlebotomines were performed in 2012 in 24 houses in the urban area and another twelve collections from 2013 to 2014 in three distinct environments (urban, transition and wild forest), utilizing HP light traps. The collected females were identified and submitted to natural infection assessment through dissection of the digestive tract and parasite DNA detection (LnPCR) in individual samples. For the second period of study it was verified and compared the distribution richness, uniformity and abundance of sand flies in the different areas. For the study of wild and synanthropic hosts of Leishmania two traps were installed in each house sampled during 2012 and three tracks in a boundary area of urban perimeter were set, with 15 Sherman traps and 15 “cage” traps per track. Collections of small mammals were performed in 2013, in the same collections points of sand flies and with the same methodology used in 2012. The detection of Leishmania infection in small mammals was carried out through molecular techniques. A total of 5.831 phlebotomines belonging to fifteen species and eight genera were collected and identified. The most frequent species was Nyssomyia intermedia followed by Lutzomyia longipalpis, which are important vectors of the etiologic agents of cutaneous and visceral leishmaniasis in humans, respectively. The urban area had the highest abundance while the transition area has the highest diversity and uniformity of species. Nyssomyia intermedia was the most abundant species of the urban area, while Evandromyia evandroi was the most abundant in the transition area and Ev. lenti in the wild area. No flagellate forms were found by the dissection technique. Leishmania DNA was detected in the following species: Ny. intermedia (0,9%), Lu. longipalpis (2,9%), Ev. termitophila (3,0%), Ev. sallesi (1,8%), Ev. evandroi (1,5%), Ev. neivai (1,1%), Ev lenti (0,9%) and Ev. walkeri (9,0%), all of them with DNA of Le. braziliensis complex. Nyssomyia intermedia (0,3%), Ev. evandroi (1,5%), Ev. lenti (1,8%), Ev. sallesi (1,2%), Lu. longipalpis (0,58%), Ny. neivai (1,1%) and Psathyromyia lutziana (33,3%) presented positivity for the Le. donovani complex. Out of 47 Leishmania positive samples, 34 (72,3%) were from the urban area, three (6,4%) from the transition area and ten (21,3%) from the wild area. The small mammals fauna was composed by the species Rattus rattus (19,4%), Thricomys apereoides (36,1%) and Didelphis albiventris (44,4%) . Rattus rattus was captured exclusively in urban area, T. apereoides only in the forest area and D. albiventris in the three environments. The last two animals were found infected by Le. braziliensis in the wild and transitional areas, respectively. Our results contributes to understand the gradual process of synanthropism of the sand flies species found in the state of Minas Gerais, demonstrating that the municipality of Varzea da Palma has all the necessary characteristics for the expansion of leishmaniasis, visceral and cutaneous.

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