OBJETIVO: A perda de heterozigosidade (LOH) é capaz de avaliar as alterações genéticas de lesões potencialmente malignas. Este ensaio avalia as regiões cromossômicas polimórficas que estão próximas ou na região dos oncogenes e genes supressores de tumor conhecidos. Os objetivos desta tese foram três principais: 1) Avaliar a frequência de perda de heterozigosidade de leucoplasias bucais com diferentes graus de severidade histopatológico em regiões cromossômicas próximas aos genes supressores de tumores. 2) Comparar e correlacionar o perfil de perda de heterozigosidade entre indivíduos da British Columbia (Canadá) e Rio Grande do Sul (Brasil). 3) Avaliar os danos ao DNA que podem ocorrer durante o processamento e armazenamento das amostras de tecido parafinado. MÉTODOS: Amostras de leucoplasia bucal (com e sem displasias), fixadas em formalina tamponada 10% e parafinadas, obtidas nos laboratório de patologia bucal do Canadá e do Brasil foram selecionadas e microdissectadas. Procedeu-se a extração de DNA, amplificação por PCR das seguintes regiões microssatélites: 4q (D4S243, FABP2), 9p21 (IFNA, D9S171, D9S1748, D9S1751), 17p11.2 (CHRNB1) e 17p13.1 (tp53 e D17S786). Após o produto do PCR foi separado e visualizado em gel de poliacrilamida por autoradiografia. RESULTADOS: Observou-se uma forte correlação entre o perfil de perda de heterozigosidade entre indivíduos com leucoplasia bucal de ambos os países, independentemente da etnicidade. Além disso, pode-se notar que amostras de tecidos parafinados submetidos a mais de 24 horas de fixação em formalina tamponada 10% não serão, em sua maioria, boas amostras para análises de DNA. CONCLUSÃO: As lesões potencialmente malignas, provavelmente não são influenciadas em sua etiopatogênia pelas diferenças étnicas. O modelo de risco genético validado por Zhang e colaboradores (2012) parece ser aplicável em nossa comunidade, sendo necessário a sua validação, respeitando procedimentos técnicos padronizados. Ainda, vale ressaltar, que é imprescindível que a comunidade científica passe a adotar metodologias que preservem o material genético das peças dos bancos de tecidos parafinados, que são de inestimável valor para a pesquisa biomédica. / OBJECTIVE: Loss of heterozygosity (LOH) can evaluate genetic alterations of pre-malignant lesions. This assay evaluates the chromosomal polymorphic regions that are present in tumor suppressor genes and oncogenes. The main objectives of this thesis were: 1) Evaluate the frequency of LOH of oral leukoplakias with different histopathological degrees at chromosomal regions of tumor suppressor genes. 2) Compare the profile of LOH between individuals from British Columbia (Canada) and Rio Grande do Sul (Brazil). 3) Evaluate the DNA damage that may occur with FFPE (formalin-fixed paraffin-embedded) tissues. METHODS: FFPE samples of oral leukoplakia (with and without dysplasia), obtained in Canadian and Brazilian oral pathology laboratories were selected and microdissected. DNA extraction and PCR amplification of the following microsatellite regions were conducted: 4q (D4S243, FABP2), 9p21 (IFNA, D9S171, D9S1748, D9S1751), 17p11.2 (CHRNB1) and 17p13.1 (tp53 and D17S786). PCR products were separated and visualized on polyacrylamide gel by autoradiography. RESULTS: A strong correlation between the LOH profile among individuals with oral leukoplakia from both countries was observed, regardless ethnicity. Furthermore, FFPE tissues subjected to more than 24 hours of fixation in 10% buffered formalin are not, generally, good samples for DNA analysis. CONCLUSION: Pre-malignant lesions etiopathogenesis may not be influenced by ethnicity. The genetic risk model validated by Zhang et al. (2012) seems to be applicable in our community, requiring its own validation, respecting standardized procedures. Still, it is important to emphasize that it is imperative that a scientific community adopts methodologies that preserve the genetic material FFPE tissues that are an invaluable resource for biomedical research.

Orientador: Celso Antonio Rodrigues / Resumo: Este estudo objetivou a identificação precoce de lesões podais infecciosas e secundárias à laminite, em vacas Holandesas de alta produção, a partir de alterações na pedometria. Foram selecionadas 245 vacas Holandesas de alta produção leiteira, que não apresentaram em 308 dias de lactação, nenhuma enfermidade como: mastite, deslocamento de abomaso, pneumonia, hipocalcemia, retenção de placenta, metrite, diarreia e cetose, que pudesse interferir nos resultados mensurados. Os dados da pedometria (produção de leite, número de passos, número de vezes que o animal deitou e porcentagem de tempo em que ele permaneceu deitado) foram obtidos diariamente e então, calculada uma média semanal. As afecções podais foram avaliadas e classificadas. A úlcera de sola e a dermatite digital foram as de maior incidência com 64,86% e 75% respectivamente, sendo estas associadas aos fatores de risco como o concreto abrasivo, umidade e sobrecarga de peso sobre os dígitos. Nas variáveis pedométricas, a produção de leite foi considerada neste estudo, um fator de risco para desenvolvimento de enfermidades podais. Houve diferença entre o número de passos e quantidade de vezes que os animais deitaram, sendo os animais com lesão aqueles que apresentaram menor atividade pedométrica. Estas variáveis foram adequadas para a detecção precoce de vacas susceptíveis as lesões podais. / Doutor

Perdas gestacionais podem ser determinadas por vários fatores, dentre eles a endometriose, doença ginecológica comum caracterizada pela presença e crescimento de glândulas e estroma endometrial fora da cavidade uterina. Os principais sintomas da doença envolvem, além de problemas de fertilidade, dismenorréia, dispaneuria, dor pélvica crônica e irregularidades menstruais. Os locais mais freqüentes das lesões endometrióticas são o peritônio e os órgãos pélvicos, principalmente ovários. A incidência da endometriose é difícil de ser determinada devido à grande variabilidade de sintomas e à dificuldade para confirmação diagnóstica, que requer método cirúrgico. Estima-se que 15% da população feminina em idade reprodutiva seja afetada pela doença, sendo sua patogênese pouco conhecida. A hipótese mais aceita é a da menstruação retrógrada, onde os fragmentos endometriais descamados durante a fase menstrual seriam transportados através das tubas uterinas até a cavidade peritonial com implantação, crescimento e invasão local e de órgãos adjacentes. No entanto, apenas o refluxo não é suficiente para o estabelecimento da doença, sendo necessário que as células endometriais possuam certas características moleculares que favoreçam o aparecimento e a progressão da implantação ectópica. Vários estudos na literatura evidenciam que as principais divergências moleculares entre portadoras e não portadoras de endometriose estão relacionadas a processos envolvidos na apoptose, adesão celular, angiogênese, biosíntese de estrógeno, sistema imune, além de fatores de crescimento e metaloproteinases. Sendo assim, as pesquisas buscam a investigação de genes que se expressem diferencialmente (maior ou menor expressão) nas células de lesões endometrióticas por meio de várias técnicas. A hibridação subtrativa é uma metodologia de screening gênico que compara dois grupos celulares distintos, permitindo isolar moléculas de cDNA representantes do genoma de somente um dos dois grupos, pois remove as seqüências comuns entre eles. A técnica de hibridação subtrativa rápida (RaSH) simplifica e torna mais eficiente esse processo de subtração, identificando grande quantidade de seqüências diferencialmente expressas. Com objetivo de determinar possíveis marcadores moleculares para diagnóstico e tratamento da doença, aplicamos a técnica de RaSH para identificação de genes com expressão diferencial em 11 amostras de lesões endometrióticas (cinco de origem ovariana e seis de origem peritonial) e em 11 amostras de tecido endometrial tópico de mulheres sem a doença. Após análise dos dados referentes a 166 sequências de referência, os genes HTRA1, LOXL1, SPARC e SSAT foram selecionados para validação por meio da técnica de RT-PCR quantitativa em tempo real, sendo que apenas os dois primeiros mostraram diferença significativa entre os dois grupos estudados. Os genes HTRA1 e LOXL1 apresentaram expressão aumentada em lesões endometrióticas de pacientes afetadas, quando comparada aos níveis de expressão no tecido endometrial de mulheres não afetadas. Os resultados obtidos sugerem que os genes HTRA1 e LOXL1 podem ser considerados candidatos a marcadores moleculares para o diagnóstico. / Gestational losses can be determined by a number of factors including endometriosis, a common gynecological disease characterized by endometrial tissue found outside the uterine cavity. The main symptoms of the disease involve dysmenorrhea, dyspaneuria, chronic pelvic pain and menstrual irregularities, besides fertility problems. Endometriotic lesions are more frequently found in the peritoneum and in pelvic organs, mainly ovaries. Endometriosis incidence is difficult to be determined due to the wide variability of the symptoms and the difficult diagnostic confirmation, which requires a surgical method. Nevertheless, it is believed that around 15% of the female population in reproductive age is affected by the disease, although its pathogenesis remains unclear. The most accepted hypothesis is the retrograde menstruation, where endometrial fragments from the menstrual phase are transported through the uterine tubes to the peritoneal cavity, where they undergo implantation, growth, and adjacent tissues invasion. However, only reflux is not enough for the disease establishment, and it is necessary that endometrial cells present molecular characteristics favoring rise and progression of ectopic implantation. In the literature, a number of studies highlight that the main molecular divergences between women with and without endometriosis are related to processes involved in apoptosis, cellular adhesion, angiogenesis, estrogen biosynthesis, immunological system, growth factors and metalloproteinases. In doing so, a number of researches seek for the investigation of genes differently expressed (up or down regulated) in endometriotic lesions cells using a variety of methodologies. The subtractive hybridization is a gene screening methodology that compares two distinct cellular groups, allowing the isolation of cDNA molecules representative from the genome of only one of the two groups, because it removes common sequences among them. The rapid subtractive hybridization methodology (RaSH) makes the process of subtraction easier and more efficient, identifying a large amount of differently expressed sequences. In this study, RaSH was used to identify differently expressed genes in 11 samples of endometriotic lesions (five from ovarian origin and six from peritoneum origin), and in 11 samples from topic endometrial tissue from women without the disease to determine possible molecular markers for diagnosis and treatment. After data analysis related to 166 reference sequences, genes HTRA1, LOXL1, SPARC and SSAT were selected for validation using real time quantitative RT-PCR. Only HTRA1 and LOXL1 presented significant difference between the two studied groups. Genes HTRA1 and LOXL1 were up regulated in endometriotic lesions from affected patients when compared with the expression levels in the endometrial tissue of non-affected women. Our results suggest that the genes HTRA1 and LOXL1 can be considered candidate molecular markers for the diagnosis of endometriosis.

Entre mulheres com HIV/AIDS há um maior número de casos de infecções persistentes pelo HPV contribuindo para um risco aumentado do desenvolvimento de lesões intraepiteliais escamosas cervicais. Ademais, a expressão anormal de moléculas HLA-E pode modular o sistema imunológico através da ligação com o receptor inibitório (CD94/NKG2A) ou estimulatório (CD94/NKG2C) de células NK e linfóticos T CD8+, diminuindo imunovigilância favorecendo a evasão de céulas infectadas por vírus. Diante da escassez de estudos avaliando a molécula HLA-E na interação com o HPV, mais especificamente na infecção pelo HIV-1, este estudo teve como objetivo avaliar a expressão de HLA-E em lesões intraepiteliais cervicais em mulheres portadoras do HPV, apresentando ou não a infecção pelo HIV-1. Trata-se de um estudo transversal, ao qual foram submetidos ao processo imunohistoquímico tecido do colo do útero parafinado de 67 mulheres infectadas pelo HIV-1 e 62 mulheres não infectadas, todas com lesão intraepitelial cervical com HPV, o qual foi tipificado. A expressão da molécula HLA-E foi analisada quantitativamente como sem expressão, de 1% a 30%, de 31% a 70% e de 71% a 100%. Os resultados mostraram que a infecção por herpes vírus foi maior entre as participantes HIV+ (P=0,005). Na análise imunohistoquímica, ficou evidente que as lesões intraepiteliais cervicais de mulheres infectadas pelo HIV-1 apresentaram redução na expressão da molécula HLA-E de 31% a 100% em comparação com mulheres sem a infecção pelo HIV- 1 (P=0,001), sugerindo que essa redução possa ser um mecanismo de escape viral, que acarreta a redução da apresentação de peptídeos virais para os linfócitos T CD8+. A expressão do HLA-E não foi associada aos graus de lesões intraepiteliais cervicais. Outros estudos são necessários para melhor compreensão do padrão e da função da expressão das moléculas HLA-E em lesões intraepiteliais cervicais de mulheres infectadas pelo HIV- 1 / Among women with HIV / AIDS there is a greater number of cases of persistent HPV infections contributing to an increased risk of developing squamous intraepithelial lesions of the cervix. In addition, abnormal expression of HLA-E molecules can modulate the immune system by binding to the inhibitory (CD94 / NKG2A) or stimulatory (CD94 / NKG2C) receptor NK cells and CD8+ T lymphocytes, decreasing immunovigilance and favoring the evasion of infected cells infected with virus. Due to the lack of studies evaluating the HLA-E molecule in the interaction with HPV, more specifically in HIV-1 infection, this project aimed to evaluate the expression of HLA-E in cervical intraepithelial lesions of infected women or not by HIV- 1, with the infection by HPV. It is a cross-sectional study, which was submitted to immunohistochemical processing the paraffin-embedded cervix tissue of 67 HIV-1 women infected with HIV-1 and 62 uninfected women, all of them with cervical intraepithelial lesion with HPV, which was typified. The expression of HLA-E was quantitatively analyzed as non- expressed, 1% to 30%, 31% to 70% and 71% to 100%. The results showed that the herpes virus infection was higher among HIV + participants (P = 0.005). In immunohistochemical analysis, it became evident that cervical intraepithelial lesions in HIV-1 infected women showed a reduction the expression of HLA-E molecule from 31% to 100% compared to women without HIV-1 infection (P = 0.001) Suggesting that this reduction may be a viral escape mechanism, which leads to a reduction in the presentation of viral peptides to CD8+ T lymphocytes. The expression of HLA-E was not associated with cervical intraepithelial lesions. More studies are need to better understand the pattern and function of HLA-E molecule expression in cervical intraepithelial lesions of infected women by HIV-1

A Pleuropneumonia Contagiosa Bovina (PPCB) é uma enfermidade respiratória grave, causada pelo Mycoplasma mycoides subsp mycoides Small Colony (MmmSC), sendo de primeira ordem no quadro nosológico em Angola, com alta prevalência e grandes repercussões econômicas na pecuária angolana. Objetivando caracterizar os achados anatomopatológicos e a resposta inflamatória na ocorrência natural da PPCB, realizou-se a coleta de amostras de pulmão e linfonodos regionais em 50 bovinos com lesões macroscópicas compatíveis com a doença e abatidos na cidade de Huambo, Angola. As amostras teciduais foram fixadas em formol 10% e incluídas em parafina para avaliação histopatológica, pela técnica de hematoxilina-eosina, e detecção do agente infeccioso por PCR a partir do DNA total extraído do tecido pulmonar parafinado. A caracterização da resposta inflamatória foi avaliada por imunohistoquímica, utilizando-se o método de detecção por polímero para os marcadores de linfócitos T (CD3) e B (Pax5), assim como as interleucinas (IL)-1β e 4. Após avaliação molecular, 7 amostras foram excluídas por não apresentarem DNA viável e 16/43 (37,2%) animais foram positivos para o MmmSC pelo PCR. Dos animais positivos, a lesão macroscópica mais frequente foi a aderência (7/16, 43,8%); enquanto a lesão microscópica mais frequente foi a hiperplasia linfoide (9/16, 56,2%). Houve associação significativa entre a positividade dos animais e a presença da alteração nas lesões de aderência (p=0,047), pulmão marmoreado (p=0,012), sequestro (p=0,001) e fibrose pulmonares (p<0,05). O pulmão esquerdo e lobo diafragmático esquerdo foram frequentemente afetados na doença, porém sem diferença significativa. Os resultados imunohistoquímicos demonstraram marcação focal para linfócitos B e T, assim como imunoexpressão de IL-1β e IL-4 em intensidade fraca a moderada na maioria dos casos analisados. Os resultados demostraram que a PPCB está presente em bovinos na região estudada, porém com lesões anatomopatológicas e resposta inflamatória inespecíficas. Estes resultados ressaltam a importância da avaliação integrada de dados epidemiológicos, anatomopatológicos, imunológicos e moleculares para estabelecer um diagnóstico preciso e definitivo da PPCB nestes animais. / Bovine Contagious Pleuropneumonia (PPCB) is a serious respiratory disease caused by Mycoplasma mycoides subsp mycoides Small Colony (MmmSC) , being of first order in the nosological framework in Angola, with high prevalence and great economic repercussions in Angolan livestock. Aiming to characterize the anatomopathological findings and the inflammatory response in the natural occurrence of PPCB, samples of lung and regional lymph nodes were collected in 50 cattle with macroscopic lesions compatible with the disease and slaughtered in the city of Huambo, Angola. Tissue samples were fixed in 10% formalin and embedded in paraffin for histopathological evaluation by the hematoxylin-eosin technique and detection of the infectious agent by PCR from the total DNA extracted from the paraffin-shaped lung tissue. The characterization of the inflammatory response was evaluated by immunohistochemistry, using the polymer detection method for T (CD3) and B (Pax5) lymphocytes, as well as interleukins (IL) -1β and 4. After molecular evaluation, 7 samples were excluded because they did not present viable DNA and 16/43 (37.2%) animals were positive for MmmSC by PCR. Of the positive animals, the most frequent macroscopic lesion was adhesion (7/16, 43.8%); while the most frequent microscopic lesion was lymphoid hyperplasia (9/16, 56.2%). There was a significant association between the positivity of the animals and the presence of changes in adhesion lesions (p = 0.047), marbled lung (p = 0.012), pulmonary sequestra (p = 0.001) and fibrosis (p <0.05). The left lung and left diaphragmatic lobe were frequently affected in the disease, but without significant difference. Immunohistochemical results demonstrated focal labeling for B and T lymphocytes as well as weak to moderate intensity of IL-1β and IL-4 immunoexpression in most of the analyzed cases. The results showed that CPBP is present in cattle in the studied region, but with nonspecific anatomopathological lesions and inflammatory response. These results highlight the importance of the integrated evaluation of epidemiological, anatomopathological, immunological and molecular data to establish an accurate and definitive diagnosis of CBPP in these animals.

A persistência cíclica de cargas na região cervical dos dentes causada por hábitos parafuncionais e a presença de interferências oclusais podem desencadear as lesões de abfração, estando à severidade da lesão relacionada com o número de forças envolvidas e interações com meio bucal. As placas oclusais são dispositivos intrabucais que quando confeccionadas corretamente reduzem cargas não-axiais aos dentes protegendo-os, podendo ser uma opção de tratamento conservador no controle de progressão das lesões de abfração, porém pouco estudado. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi de avaliar clinicamente a influência da placa oclusal na progressão das lesões de abfração ao longo de 1 ano. Foram selecionados 34 voluntários (com média de 38 anos de idade) de acordo com os 3 grupos de estudo: Grupo 1 controle - indivíduos (sem DTM e parafunção) com apenas 2 lesões de abfração isoladas na região vestibular dos dentes que não necessitem de placa oclusal. Grupo 2 com placa - com pelo menos 2 lesões de abfração na região vestibular dos dentes, com Disfunção Temporomandibular (DTM). Grupo 3 com placa - indivíduos com múltiplas lesões de abfração, mas sem sinais e sintomas de DTM, podendo ter a presença de desgaste dental generalizado pelo hábito de ranger os dentes. As informações sobre a presença de oclusão em relação cêntrica, presença de prematuridades, interferências oclusais, padrão de desoclusão nos movimentos de lateralidade e protrusão, a prevalência dos dentes com lesão de abfração,presença de apertamento e/ou rangimento dos dentes e desgaste dental foram anotados e analisados quanto a frequência. Inicialmente as lesões de abfrações foram moldadas com silicone de adição, nos grupos 2 e 3 foram instaladas as placas oclusais e ajustadas. Os indivíduos foram avaliados nos períodos de 3, 6, 9 e 12 meses após o início do tratamento para o acompanhamento da progressão das lesões por meio de moldagens das mesmas. Os moldes foram vasados com resina epóxi e os modelos foram analisados em microscópio confocal a laser 3D e por meio de software foi analisado o perfil de desgaste. Com relação ao aspecto oclusal encontrou-se uma baixa presença de oclusão em relação cêntrica, uma alta presença de contatos prematuros, baixa presença de interferências oclusais em lateralidade e protrusão, alta presença de apertamento e rangimento dental nos grupos 2 e 3 e uma equivalência entre as guias de desoclusão em lateralidade. Os dentes pré-molares e a arcada superior foram os mais acometidos com as lesões de abfração. A comparação dos dados referentes à progressão das lesões realizadas entre os 3 grupos após os 12 meses mostrou diferença estatisticamente significante, encontrando no período de 1 ano uma evolução maior das lesões do grupo controle em comparação aos grupos que fizeram o uso da placa (p<0,05). Em relação aos diferentes tempos analisados observou um incremento não significante para os diferentes períodos de tempo, sendo que após 12 meses apresentou diferente estatisticamente ao inicial (p<0,05). A placa miorrelaxante influenciou na progressão das lesões de abfração, promovendo uma diminuição da evolução da lesão, mas não a sua paralisação. / The cyclic persistence of loads in the cervical region of the teeth caused by parafunctions and the presence of occlusal interference can trigger the abfraction lesions, with the severity of injury related to the number of involved forces and interactions with oral environment. The occlusal splints are intraoral device that when properly made reduce non-axial loads to teeth protecting them, can be a conservative treatment option in controlling progression of abfraction injuries, but little studied. Thus, the objective of the present study was to clinically evaluate the influence of the occlusal splint on the progression of abfraction lesions over 1 year. Thirty-four volunteers (mean age 38 years) were selected according to the 3 study groups: Group 1 control - individuals (without TMD and parafunction) with only 2 abfraction lesions isolated in the buccal region of the teeth that do not require occlusal splint. Group 2 with splint - with at least 2 abfraction lesions in the buccal region of the teeth, with Temporomandibular Dysfunction (TMD). Group 3 with splint - individuals with multiple abfraction lesions, but without signs and symptoms of TMD, which may have the presence of generalized dental wear by the habit of grinding teeth. Information on the presence of centric occlusion, presence of prematurity, occlusal interference, pattern of dislocation in laterality and protrusion movements, prevalence of abfraction lesion, presence of tightening and / or grinding of teeth and dental wear were Annotated and analyzed for frequency.. Initially the abfraction lesions were molded with addition silicone, in groups 2 and 3 the occlusal splint were fitted and adjusted. The individuals were evaluated at the 3, 6, 9 and 12 months after the beginning of the treatment to follow the progression of the lesions through molding of the lesions. The molds were filled with epoxy resin and the models were analyzed in a 3D laser confocal microscope and by means of software the wear profile was analyzed. Regarding the occlusal aspect was observed in a centric relation, a high presence of premature contacts, low presence of occlusal interference in laterality and protrusion, high presence of tightening and grinding in groups 2 and 3, and an equivalence between The lateral occlusion guides. The premolar teeth and the upper arch were the most affected with the abfraction lesions. The comparison of the data regarding the progression of the lesions performed between the 3 groups after the 12 months showed a statistically significant difference, finding in a period of 1 year a greater evolution of the lesions of the control group compared to the groups that used the splint (p < 0.05). In relation to the different times analyzed, there was a non-significant increase for the different time periods, and after 12 months presented statistically different from the initial one (p <0.05). The myorelaxing splint influenced the progression of the abfraction lesions, promoting a decrease in the evolution of the lesion, but not its paralysis.

A compilação mais recente dos dados mundiais indica que anualmente 466.000 novos casos de câncer cervical são detectados em todo mundo. A infecção pelos tipos oncogênicos do papilomavírus humano (HPV), constitui importante fator de risco para o desenvolvimento do câncer do colo uterino. Em mulheres portadoras do vírus da imunodeficiência humana tipo 1 (HIV-1), tem sido demonstrado o aumento na prevalência e persistência da infecção por HPV oncogênicos, justificando o aumento da susceptibilidade destas mulheres para o desenvolvimento das lesões cervicais, lesões precursoras do câncer do colo uterino. Citocinas são importantes na defesa contra a infecção pelo HPV e o nível de sua produção é geneticamente determinado. A predominância de citocinas do padrão do tipo Th1, como o TNF-alfa, está associada com a regressão das lesões cervicais. Neste estudo foram analisados os fatores comportamentais, imunológicos e virais, possivelmente, associados ao desenvolvimento das lesões cervicais em 66 mulheres mexicanas, portadoras ou não da infecção pelo HIV-1, apresentando lesões cervicais. Assim, aspectos sócio-demográficos e hábitos sexuais, a identificação e a tipificação do HPV, e a detecção do polimorfismo da região promotora do TNF foram analisados. Ao avaliar os aspectos sócio-comportamentais, a maioria das mulheres estava casada legalmente ou em união consensual no momento da entrevista, com nível educacional fundamental e nível sócio-econômico baixo. Associado a isso, a maior porcentagem dos maridos eram migrantes dos Estados Unidos da América (EUA), em busca de emprego e melhores condições financeiras. O grupo de pacientes com HIV-1 que referiram utilizar a camisinha só algumas vezes ou nunca e que relataram possuir entre 2-3 parceiros sexuais foi maior do que o grupo de mulheres sem o HIV- 1. Adicionalmente, os parceiros sexuais de mulheres com o HIV-1 mantinham outras parcerias sexuais, sendo estas heterossexuais e/ou homossexuais. Todas as pacientes arroladas no presente estudo apresentavam infecção ativa por HPV e lesões cervicais de baixo grau. Os HPV oncogênicos, como os do tipo 16/18 e 35, foram significantemente mais freqüentes entre as HIV positivas em comparação às não portadoras dessa infecção. Relativo às comparações do polimorfismo do TNF, a freqüência do genótipo TNF-308 não mostrou diferenças significantes entre os grupos de pacientes. O gene da região promotora do TNF na posição -238 também foi avaliado e observamos que o alelo TNF-238G, associado à alta produção dessa citocina, apresentou significativo aumento de sua freqüência entre as pacientes com o HIV-1 em relação às pacientes sem o HIV-1. Estes resultados sugerem que as condições sócio-culturais e hábitos sexuais estão envolvidos com a vulnerabilidade para a aquisição do HIV e HPV em mulheres mexicanas. Embora as portadoras do HIV apresentem infecção ativa por HPV oncogênicos, a presença do alelo -238G, relacionado com a alta produção do TNFalfa, pode estar associado com a não progressão das lesões cervicais. Entretanto, esta interpretação deve ser realizada com cautela, pois algumas mulheres que apresentavam resultados de lesões cervicais de baixo grau morreram de câncer cérvico uterino. Este fato revela a fragilidade das análises e avaliações ginecológicas nos serviços de saúde referidos neste estudo e sugere que a alternativa de utilizar técnicas de biologia molecular para a identificação e tipificação dos tipos oncogênicos do HPV seja uma estratégia importante para os programas de prevenção do câncer do colo do útero. / The most recent compilation of global data indicates that, every year, 466,000 new cases of cervical cancer are detected around the world. Infection by oncogenic types of the human papillomavirus (HPV) constitutes an important risk factor for the development of colon cancer. In women with human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1), an increased prevalence and persistence of infection by oncogenic HPV has been demonstrated, justifying these women\'s increased susceptibility to the development of cervical lesions, which precede colon cancer. Cytokines are important in the defense against infection by HPV and its production level is genetically determined. The predominance of th1 cytokines, such as TNF-alfa, is associated with the regression of cervical lesions. This study analyzed behavioral, immunological and viral factors that may be associated with the development of cervical lesions in 66 Mexican women, infected by HIV-1 or not and presenting cervical lesions. Sociodemographic aspects and sexual aspects, HPV identification and typification and the detection of polymorphism in the region that promotes TNF were analyzed. With respect to socio-behavioral aspects, most women were legally married or lived in consensual union at the time of the interview, with basic education and low socioeconomic level. Moreover, most husbands were migrants from the United States (USA) who were looking for a job and better financial conditions. The group of HIV-1 patients who mentioned using a condom sometimes or never had having 2-3 partners was larger than the group of women without HIV-1. In addition, the sexual partners of women with HIV-1 had other hetero and/or homosexual partners. All patients included in this research presented active infection by HPV and low-grade cervical lesions. Oncogenic HPV, such as types 16/18 and 35, were significantly more frequent among HIV-positive than among HIV-negative patients. As to the comparisons of TNF polymorphism, the frequency of the TNF-308 genotype did not show significant differences between the patient group. The gene of the TNF promoting region in position -238 was also assessed. It was found that the TNF 238G allele, associated with high production levels of the cytokine, presented a significant increase in frequency among patient with in comparison with those without HIV-1. These results suggest that sociocultural conditions and sexual habits are involved in Mexican women\'s vulnerability to infection by HIV and HPV. Although the HIV patients present active infection by oncogenic HPV, the presence of the -238G allele, related with the high production of TNF-alpha, can be associated with the non progression of the cervical lesions. However, this must be interpreted with caution, as some women with low-grade cervical lesion results died of colon cancer. This fact reveals the fragility of gynecological analyses and assessments at the health services mentioned in this research and suggest the alternative of using molecular biology techniques for the identification and typification of HPV as an important strategy for colon cancer prevention programs.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / O complexo facial maxilo-mandibular pode ser acometido por uma variedade de lesÃes que, embora benignas, apresentam-se localmente agressivas. O tratamento de tais condiÃÃes tem suscitado dÃvidas quanto à escolha da melhor terapÃutica a ser instituÃda, uma vez que o tratamento conservador tem sido associado a Ãndices elevados de recorrÃncia, enquanto o radical, embora geralmente leve a cura definitiva, tem gerado grave comprometimento estÃtico-funcional. Nesse contexto, terapias adjuvantes, como a criocirurgia com nitrogÃnio lÃquido, tÃm sido combinadas com modalidades conservadoras com o propÃsito de reduzir a taxa de reincidÃncia sem elevar a sua morbidade. O objetivo do presente trabalho foi avaliar os efeitos induzidos pela aplicaÃÃo de nitrogÃnio lÃquido em diÃfise femoral de ratos. Foram realizadas, em diÃfises femurais de 42 ratos Wistar, trÃs aplicaÃÃes locais e seqÃenciais de nitrogÃnio lÃquido, intercaladas por perÃodos de 5 minutos, com tempo de exposiÃÃo que variou entre 1 ou 2 minutos. Decorridas 1, 2, 4 e 12 semanas, os animais foram sacrificados e as peÃas obtidas foram processadas e analisadas histomorfologicamente e histomorfometricamente. Histologicamente, a segunda semana experimental representou o pico mÃximo de necrose Ãssea em ambos os protocolos. A profundidade e extensÃo de necrose Ãssea mÃdia mÃxima induzida no protocolo de 1 minuto foi, respectivamente, 124,509 Âm e 2087,094Âm, enquanto no de 2 minutos foi, respectivamente, 436,424Âm e 12046,426Âm. Com base nos achados do presente trabalho, podemos concluir que o protocolo de 2 minutos produziu uma necrose Ãssea mais pronunciada do que o de 1 minuto, sendo, portanto mais adequado no tratamento de lesÃes Ãsseas agressivas que incidam os maxilares. / The maxillo-mandibular facial complex may be affected by a variety of injuries that, although benign, present themselves locally aggressive. Treatment of these conditions have raised doubts as to choose the best therapy to be established, since the conservative treatment has been associated with high rates of recurrence, while the radical, but usually lead to a definitive cure, has created severe aesthetic - functional. In this context, adjuvant therapies, such as cryosurgery with liquid nitrogen, have been combined with conservative modalities with the aim of reducing the rate of recurrence without increasing its morbidity. The purpose of this study was to evaluate the effects induced by the application of liquid nitrogen in femoral diaphysis of rats. Were performed in femoral diaphysis of 42 rats, three local applications and sequential liquid nitrogen, interspersed with periods of 5 minutes, time of exposure that ranged from 1 or 2 minutes. After 1, 2, 4 and 12 weeks, the animals were sacrificed and the specimens were collected and processed and analyzed histomorphological and histomorphometrically. Histologically, the second week trial was a maximum of bone necrosis in both protocols. The depth and extent of bone necrosis average maximum induced by the Protocol of 1 minute was, respectively, 124,509 and Ãm 2087.094 Ãm, while that of 2 minutes were, respectively, 436424&#956;m and 12046.426 micrometers. Based on the findings of this study, we can conclude that the protocol of 2 minutes produced a bone necrosis more pronounced than that of 1 minute, and therefore more suitable for the treatment of aggressive bone lesions covering the jaw.

A Pleuropneumonia Contagiosa Bovina (PPCB) é uma enfermidade respiratória grave, causada pelo Mycoplasma mycoides subsp mycoides Small Colony (MmmSC), sendo de primeira ordem no quadro nosológico em Angola, com alta prevalência e grandes repercussões econômicas na pecuária angolana. Objetivando caracterizar os achados anatomopatológicos e a resposta inflamatória na ocorrência natural da PPCB, realizou-se a coleta de amostras de pulmão e linfonodos regionais em 50 bovinos com lesões macroscópicas compatíveis com a doença e abatidos na cidade de Huambo, Angola. As amostras teciduais foram fixadas em formol 10% e incluídas em parafina para avaliação histopatológica, pela técnica de hematoxilina-eosina, e detecção do agente infeccioso por PCR a partir do DNA total extraído do tecido pulmonar parafinado. A caracterização da resposta inflamatória foi avaliada por imunohistoquímica, utilizando-se o método de detecção por polímero para os marcadores de linfócitos T (CD3) e B (Pax5), assim como as interleucinas (IL)-1&#946; e 4. Após avaliação molecular, 7 amostras foram excluídas por não apresentarem DNA viável e 16/43 (37,2%) animais foram positivos para o MmmSC pelo PCR. Dos animais positivos, a lesão macroscópica mais frequente foi a aderência (7/16, 43,8%); enquanto a lesão microscópica mais frequente foi a hiperplasia linfoide (9/16, 56,2%). Houve associação significativa entre a positividade dos animais e a presença da alteração nas lesões de aderência (p=0,047), pulmão marmoreado (p=0,012), sequestro (p=0,001) e fibrose pulmonares (p&lt;0,05). O pulmão esquerdo e lobo diafragmático esquerdo foram frequentemente afetados na doença, porém sem diferença significativa. Os resultados imunohistoquímicos demonstraram marcação focal para linfócitos B e T, assim como imunoexpressão de IL-1&#946; e IL-4 em intensidade fraca a moderada na maioria dos casos analisados. Os resultados demostraram que a PPCB está presente em bovinos na região estudada, porém com lesões anatomopatológicas e resposta inflamatória inespecíficas. Estes resultados ressaltam a importância da avaliação integrada de dados epidemiológicos, anatomopatológicos, imunológicos e moleculares para estabelecer um diagnóstico preciso e definitivo da PPCB nestes animais. / Bovine Contagious Pleuropneumonia (PPCB) is a serious respiratory disease caused by Mycoplasma mycoides subsp mycoides Small Colony (MmmSC) , being of first order in the nosological framework in Angola, with high prevalence and great economic repercussions in Angolan livestock. Aiming to characterize the anatomopathological findings and the inflammatory response in the natural occurrence of PPCB, samples of lung and regional lymph nodes were collected in 50 cattle with macroscopic lesions compatible with the disease and slaughtered in the city of Huambo, Angola. Tissue samples were fixed in 10% formalin and embedded in paraffin for histopathological evaluation by the hematoxylin-eosin technique and detection of the infectious agent by PCR from the total DNA extracted from the paraffin-shaped lung tissue. The characterization of the inflammatory response was evaluated by immunohistochemistry, using the polymer detection method for T (CD3) and B (Pax5) lymphocytes, as well as interleukins (IL) -1&#946; and 4. After molecular evaluation, 7 samples were excluded because they did not present viable DNA and 16/43 (37.2%) animals were positive for MmmSC by PCR. Of the positive animals, the most frequent macroscopic lesion was adhesion (7/16, 43.8%); while the most frequent microscopic lesion was lymphoid hyperplasia (9/16, 56.2%). There was a significant association between the positivity of the animals and the presence of changes in adhesion lesions (p = 0.047), marbled lung (p = 0.012), pulmonary sequestra (p = 0.001) and fibrosis (p &lt;0.05). The left lung and left diaphragmatic lobe were frequently affected in the disease, but without significant difference. Immunohistochemical results demonstrated focal labeling for B and T lymphocytes as well as weak to moderate intensity of IL-1&#946; and IL-4 immunoexpression in most of the analyzed cases. The results showed that CPBP is present in cattle in the studied region, but with nonspecific anatomopathological lesions and inflammatory response. These results highlight the importance of the integrated evaluation of epidemiological, anatomopathological, immunological and molecular data to establish an accurate and definitive diagnosis of CBPP in these animals.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:16:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009 - Walker Nunes Chagas.pdf: 2208171 bytes, checksum: 4a3ea912994eedc94099aff215e6bce1 (MD5) Previous issue date: 2009-02-27 / This experiment aimed to evaluate and compare the macro and microscopic changes in the skin of rabbits caused by the bites of Stomoxys calcitrans, for different levels, repeat attacked and not attacked animals. The profile of leukocyte expression in circulating blood also was analyzed. The experiment was conducted at the Technical College UFRRJ, in the municipality of Serop?dica (RJ). Thirty male New Zealand White rabbits, with 96 to 105 days of age, were divided into five groups, each with six animals and subjected to bites of S. calcitrans in one ear, with three, seven and 14 flies respectively. Another group was submitted to repeat bites of 14 flies, and the fifth group was not submitted to S. calcitrans (control). Forty-eight hours after the attack, fragments of skin were colleted for histopathological. Blood samples also were colleted for hematology. The macroscopic histopathological findings indicate that the bites led to the development dermatitis. Microscopically, 19 rabbits (79,2%) developed hyperkeratosis. Three animals evidenced acanthosis. Also in three animals were observed crusts of exudation with red blood cells and cellular debris. One of these rabbits showed erosive lesions associated with the crust and slight spongiosis. The interstitial edema, classified as slight to moderate, was present in 18 animals (75%). Dilated lymphatic vessels were found in 15 rabbits (62.5%). Eleven attacked rabbits showed interstitial hemorrhage (45.8%). Twenty-two rabbits in the experimental group (91.7%) showed congestion of blood vessels. Some kind of inflammatory infiltration was observed in 15 attacked rabbits (62.5%), whilst no rabbit in the control group showed this change. Thirteen rabbits (54.2%) showed inflammatory infiltrates of predominantly polymorphonuclear and eosinophilic cells, and 14 rabbits (58.3%) evidenced of mononuclear cells, predominantly histiocytes, but not mast cells. The animals submitted to repeat bites showed reduction of leukocytes. The other attacked animals showed reduction of lymphocytes and eosinophils and increase to neutrophils and monocytes. / O presente experimento teve como objetivos avaliar as altera??es macro e microsc?picas na pele de coelhos, causadas pelas picadas da mosca Stomoxys calcitrans, em rela??o a diferentes intensidades de infesta??o, a re-infesta??o e a animais n?o parasitados, bem como analisar e descrever a resposta leucocit?ria sang??nea, nos animais dos diferentes grupos. O Experimento foi conduzido no Col?gio T?cnico da UFRRJ, no munic?pio de Serop?dica (RJ). Trinta coelhos machos, Nova Zel?ndia brancos, com idade entre 96 e 105 dias, foram divididos em cinco grupos, com seis animais cada e submetidos ?s infesta??es experimentais por S. calcitrans em uma das orelhas, com tr?s, sete e quatorze moscas respectivamente. Um outro grupo foi submetido ? reinfesta??o, quinze dias ap?s, com quatorze moscas e no quinto grupo os coelhos n?o foram submetidos ?s picadas (controle). Quarenta e oito horas ap?s a infesta??o, foram realizadas a coleta de fragmentos de pele para avalia??o histopatol?gica e pun??o venosa, com realiza??o de esfrega?o sangu?neo para leucocitoscopia. No momento da realiza??o das bi?psias n?o foram observadas altera??es macrosc?picas significativas e os achados histopatol?gicos indicaram que as infesta??es nos animais deste experimento determinaram o desenvolvimento de dermatites do tipo perivascular e intersticial. Microscopicamente, dezenove animais (79,2%) apresentaram hiperqueratose ortocerat?tica compacta. Tr?s apresentaram acantose e crostas serocelulares (exudativas), com hem?cias e debris celulares. Um destes coelhos apresentou les?o erosiva associada ? crosta e discreta espongiose. O edema intersticial, classificado como discreto a moderado, estava presente em 18 animais (75%). Foi evidenciada linfangectasia em 15 coelhos (62,5%). Onze coelhos do grupo experimental apresentaram hemorragia intersticial (45,8%). Vinte e dois coelhos do grupo experimental (91,7%) apresentaram congest?o dos vasos sangu?neos. Algum tipo de infiltrado inflamat?rio foi observado em 15 coelhos (62,5%) dos grupos experimentais, enquanto que nenhum coelho do grupo controle apresentou esta altera??o. Treze coelhos (54,2%) apresentaram infiltrado inflamat?rio de polimorfonucleares, predominantemente eosinof?lico e 14 (58,3%) de mononucleares, predominantemente histioc?tico, onde n?o foi evidenciada a presen?a de mast?citos. Os animais submetidos ? reinfesta??o apresentaram leucopenia e nos demais grupos experimentais foi observado linfocitopenia, eosinopenia, e heterofilia e monocitose. Os achados histopatol?gicos s?o compat?veis com as rea??es de hipersensibilidade do tipo I. Os coelhos infestados por mais moscas apresentaram resposta inflamat?ria mais intensa e nos animais submetidos ? reinfesta??o as altera??es teciduais se apresentam com maior intensidade. A infesta??o por S. calcitrans e a intensidade desta, determina altera??es no leucograma dos coelhos. Na reinfesta??o por S. calcitrans, o leucograma ? compat?vel com o de uma rea??o cr?nica.