OBJETIVO: A perda de heterozigosidade (LOH) é capaz de avaliar as alterações genéticas de lesões potencialmente malignas. Este ensaio avalia as regiões cromossômicas polimórficas que estão próximas ou na região dos oncogenes e genes supressores de tumor conhecidos. Os objetivos desta tese foram três principais: 1) Avaliar a frequência de perda de heterozigosidade de leucoplasias bucais com diferentes graus de severidade histopatológico em regiões cromossômicas próximas aos genes supressores de tumores. 2) Comparar e correlacionar o perfil de perda de heterozigosidade entre indivíduos da British Columbia (Canadá) e Rio Grande do Sul (Brasil). 3) Avaliar os danos ao DNA que podem ocorrer durante o processamento e armazenamento das amostras de tecido parafinado. MÉTODOS: Amostras de leucoplasia bucal (com e sem displasias), fixadas em formalina tamponada 10% e parafinadas, obtidas nos laboratório de patologia bucal do Canadá e do Brasil foram selecionadas e microdissectadas. Procedeu-se a extração de DNA, amplificação por PCR das seguintes regiões microssatélites: 4q (D4S243, FABP2), 9p21 (IFNA, D9S171, D9S1748, D9S1751), 17p11.2 (CHRNB1) e 17p13.1 (tp53 e D17S786). Após o produto do PCR foi separado e visualizado em gel de poliacrilamida por autoradiografia. RESULTADOS: Observou-se uma forte correlação entre o perfil de perda de heterozigosidade entre indivíduos com leucoplasia bucal de ambos os países, independentemente da etnicidade. Além disso, pode-se notar que amostras de tecidos parafinados submetidos a mais de 24 horas de fixação em formalina tamponada 10% não serão, em sua maioria, boas amostras para análises de DNA. CONCLUSÃO: As lesões potencialmente malignas, provavelmente não são influenciadas em sua etiopatogênia pelas diferenças étnicas. O modelo de risco genético validado por Zhang e colaboradores (2012) parece ser aplicável em nossa comunidade, sendo necessário a sua validação, respeitando procedimentos técnicos padronizados. Ainda, vale ressaltar, que é imprescindível que a comunidade científica passe a adotar metodologias que preservem o material genético das peças dos bancos de tecidos parafinados, que são de inestimável valor para a pesquisa biomédica. / OBJECTIVE: Loss of heterozygosity (LOH) can evaluate genetic alterations of pre-malignant lesions. This assay evaluates the chromosomal polymorphic regions that are present in tumor suppressor genes and oncogenes. The main objectives of this thesis were: 1) Evaluate the frequency of LOH of oral leukoplakias with different histopathological degrees at chromosomal regions of tumor suppressor genes. 2) Compare the profile of LOH between individuals from British Columbia (Canada) and Rio Grande do Sul (Brazil). 3) Evaluate the DNA damage that may occur with FFPE (formalin-fixed paraffin-embedded) tissues. METHODS: FFPE samples of oral leukoplakia (with and without dysplasia), obtained in Canadian and Brazilian oral pathology laboratories were selected and microdissected. DNA extraction and PCR amplification of the following microsatellite regions were conducted: 4q (D4S243, FABP2), 9p21 (IFNA, D9S171, D9S1748, D9S1751), 17p11.2 (CHRNB1) and 17p13.1 (tp53 and D17S786). PCR products were separated and visualized on polyacrylamide gel by autoradiography. RESULTS: A strong correlation between the LOH profile among individuals with oral leukoplakia from both countries was observed, regardless ethnicity. Furthermore, FFPE tissues subjected to more than 24 hours of fixation in 10% buffered formalin are not, generally, good samples for DNA analysis. CONCLUSION: Pre-malignant lesions etiopathogenesis may not be influenced by ethnicity. The genetic risk model validated by Zhang et al. (2012) seems to be applicable in our community, requiring its own validation, respecting standardized procedures. Still, it is important to emphasize that it is imperative that a scientific community adopts methodologies that preserve the genetic material FFPE tissues that are an invaluable resource for biomedical research.

OBJETIVO: A perda de heterozigosidade (LOH) é capaz de avaliar as alterações genéticas de lesões potencialmente malignas. Este ensaio avalia as regiões cromossômicas polimórficas que estão próximas ou na região dos oncogenes e genes supressores de tumor conhecidos. Os objetivos desta tese foram três principais: 1) Avaliar a frequência de perda de heterozigosidade de leucoplasias bucais com diferentes graus de severidade histopatológico em regiões cromossômicas próximas aos genes supressores de tumores. 2) Comparar e correlacionar o perfil de perda de heterozigosidade entre indivíduos da British Columbia (Canadá) e Rio Grande do Sul (Brasil). 3) Avaliar os danos ao DNA que podem ocorrer durante o processamento e armazenamento das amostras de tecido parafinado. MÉTODOS: Amostras de leucoplasia bucal (com e sem displasias), fixadas em formalina tamponada 10% e parafinadas, obtidas nos laboratório de patologia bucal do Canadá e do Brasil foram selecionadas e microdissectadas. Procedeu-se a extração de DNA, amplificação por PCR das seguintes regiões microssatélites: 4q (D4S243, FABP2), 9p21 (IFNA, D9S171, D9S1748, D9S1751), 17p11.2 (CHRNB1) e 17p13.1 (tp53 e D17S786). Após o produto do PCR foi separado e visualizado em gel de poliacrilamida por autoradiografia. RESULTADOS: Observou-se uma forte correlação entre o perfil de perda de heterozigosidade entre indivíduos com leucoplasia bucal de ambos os países, independentemente da etnicidade. Além disso, pode-se notar que amostras de tecidos parafinados submetidos a mais de 24 horas de fixação em formalina tamponada 10% não serão, em sua maioria, boas amostras para análises de DNA. CONCLUSÃO: As lesões potencialmente malignas, provavelmente não são influenciadas em sua etiopatogênia pelas diferenças étnicas. O modelo de risco genético validado por Zhang e colaboradores (2012) parece ser aplicável em nossa comunidade, sendo necessário a sua validação, respeitando procedimentos técnicos padronizados. Ainda, vale ressaltar, que é imprescindível que a comunidade científica passe a adotar metodologias que preservem o material genético das peças dos bancos de tecidos parafinados, que são de inestimável valor para a pesquisa biomédica. / OBJECTIVE: Loss of heterozygosity (LOH) can evaluate genetic alterations of pre-malignant lesions. This assay evaluates the chromosomal polymorphic regions that are present in tumor suppressor genes and oncogenes. The main objectives of this thesis were: 1) Evaluate the frequency of LOH of oral leukoplakias with different histopathological degrees at chromosomal regions of tumor suppressor genes. 2) Compare the profile of LOH between individuals from British Columbia (Canada) and Rio Grande do Sul (Brazil). 3) Evaluate the DNA damage that may occur with FFPE (formalin-fixed paraffin-embedded) tissues. METHODS: FFPE samples of oral leukoplakia (with and without dysplasia), obtained in Canadian and Brazilian oral pathology laboratories were selected and microdissected. DNA extraction and PCR amplification of the following microsatellite regions were conducted: 4q (D4S243, FABP2), 9p21 (IFNA, D9S171, D9S1748, D9S1751), 17p11.2 (CHRNB1) and 17p13.1 (tp53 and D17S786). PCR products were separated and visualized on polyacrylamide gel by autoradiography. RESULTS: A strong correlation between the LOH profile among individuals with oral leukoplakia from both countries was observed, regardless ethnicity. Furthermore, FFPE tissues subjected to more than 24 hours of fixation in 10% buffered formalin are not, generally, good samples for DNA analysis. CONCLUSION: Pre-malignant lesions etiopathogenesis may not be influenced by ethnicity. The genetic risk model validated by Zhang et al. (2012) seems to be applicable in our community, requiring its own validation, respecting standardized procedures. Still, it is important to emphasize that it is imperative that a scientific community adopts methodologies that preserve the genetic material FFPE tissues that are an invaluable resource for biomedical research.

OBJETIVO: A perda de heterozigosidade (LOH) é capaz de avaliar as alterações genéticas de lesões potencialmente malignas. Este ensaio avalia as regiões cromossômicas polimórficas que estão próximas ou na região dos oncogenes e genes supressores de tumor conhecidos. Os objetivos desta tese foram três principais: 1) Avaliar a frequência de perda de heterozigosidade de leucoplasias bucais com diferentes graus de severidade histopatológico em regiões cromossômicas próximas aos genes supressores de tumores. 2) Comparar e correlacionar o perfil de perda de heterozigosidade entre indivíduos da British Columbia (Canadá) e Rio Grande do Sul (Brasil). 3) Avaliar os danos ao DNA que podem ocorrer durante o processamento e armazenamento das amostras de tecido parafinado. MÉTODOS: Amostras de leucoplasia bucal (com e sem displasias), fixadas em formalina tamponada 10% e parafinadas, obtidas nos laboratório de patologia bucal do Canadá e do Brasil foram selecionadas e microdissectadas. Procedeu-se a extração de DNA, amplificação por PCR das seguintes regiões microssatélites: 4q (D4S243, FABP2), 9p21 (IFNA, D9S171, D9S1748, D9S1751), 17p11.2 (CHRNB1) e 17p13.1 (tp53 e D17S786). Após o produto do PCR foi separado e visualizado em gel de poliacrilamida por autoradiografia. RESULTADOS: Observou-se uma forte correlação entre o perfil de perda de heterozigosidade entre indivíduos com leucoplasia bucal de ambos os países, independentemente da etnicidade. Além disso, pode-se notar que amostras de tecidos parafinados submetidos a mais de 24 horas de fixação em formalina tamponada 10% não serão, em sua maioria, boas amostras para análises de DNA. CONCLUSÃO: As lesões potencialmente malignas, provavelmente não são influenciadas em sua etiopatogênia pelas diferenças étnicas. O modelo de risco genético validado por Zhang e colaboradores (2012) parece ser aplicável em nossa comunidade, sendo necessário a sua validação, respeitando procedimentos técnicos padronizados. Ainda, vale ressaltar, que é imprescindível que a comunidade científica passe a adotar metodologias que preservem o material genético das peças dos bancos de tecidos parafinados, que são de inestimável valor para a pesquisa biomédica. / OBJECTIVE: Loss of heterozygosity (LOH) can evaluate genetic alterations of pre-malignant lesions. This assay evaluates the chromosomal polymorphic regions that are present in tumor suppressor genes and oncogenes. The main objectives of this thesis were: 1) Evaluate the frequency of LOH of oral leukoplakias with different histopathological degrees at chromosomal regions of tumor suppressor genes. 2) Compare the profile of LOH between individuals from British Columbia (Canada) and Rio Grande do Sul (Brazil). 3) Evaluate the DNA damage that may occur with FFPE (formalin-fixed paraffin-embedded) tissues. METHODS: FFPE samples of oral leukoplakia (with and without dysplasia), obtained in Canadian and Brazilian oral pathology laboratories were selected and microdissected. DNA extraction and PCR amplification of the following microsatellite regions were conducted: 4q (D4S243, FABP2), 9p21 (IFNA, D9S171, D9S1748, D9S1751), 17p11.2 (CHRNB1) and 17p13.1 (tp53 and D17S786). PCR products were separated and visualized on polyacrylamide gel by autoradiography. RESULTS: A strong correlation between the LOH profile among individuals with oral leukoplakia from both countries was observed, regardless ethnicity. Furthermore, FFPE tissues subjected to more than 24 hours of fixation in 10% buffered formalin are not, generally, good samples for DNA analysis. CONCLUSION: Pre-malignant lesions etiopathogenesis may not be influenced by ethnicity. The genetic risk model validated by Zhang et al. (2012) seems to be applicable in our community, requiring its own validation, respecting standardized procedures. Still, it is important to emphasize that it is imperative that a scientific community adopts methodologies that preserve the genetic material FFPE tissues that are an invaluable resource for biomedical research.

A Candida é um microrganismo dimórfico encontrado comumente no trato gastrointestinal, na pele e nas membranas mucosas dos seres humanos. Na forma de levedura, o fungo permanece em equilíbrio e não é patogênico, podendo estar presente na cavidade oral de indivíduos saudáveis. A candidíase oral geralmente é classificada em quatro grandes grupos, e a candidíase crônica hiperplásica (CCH) é representada por uma infecção crônica, caracterizada pela hiperplasia epitelial do hospedeiro. Especificamente, essas lesões são difíceis de serem diferenciadas de leucoplasias e têm sido associadas com o aumento da chance de desenvolvimento de displasias e lesões malignas. O objetivo deste trabalho foi realizar um levantamento dos casos diagnosticados no Serviço de Patologia Cirúrgica da FOUSP, com vistas a demonstrar a ocorrência dessas infecções em boca e avaliar seus aspectos histológicos característicos. Os casos foram selecionados utilizando o sistema Laudo e Imagem do Serviço de Patologia Cirúrgica da FOUSP e para caracterização das amostras, os dados clínicos do paciente e os aspectos da lesão foram coletados. A análise histopatológica das lâminas foi realizada posteriormente através da observação em microscópio de luz, e as colorações de hematoxilina-eosina (HE) e do ácido periódico de Schiff (PAS) foram utilizadas para avaliação das características microscópicas e a presença de Candida, respectivamente. Os profissionais que realizaram as biópsias foram contatados para obter informações a respeito da evolução da lesão e do paciente. De um total de 58675 biópsias realizadas entre janeiro de 2002 e dezembro de 2017, 36 casos foram diagnosticados como CCH. As mulheres foram mais afetadas, havendo predileção pela raça branca e pela quinta e sexta décadas de vida. De um modo geral, clinicamente, as lesões se apresentavam como um nódulo ou placa branca assintomática localizada em língua ou mucosa jugal. Histologicamente, significância estatística foi notada na presença de projeções epiteliais, exocitose, infiltrado inflamatório discreto e mononuclear. Hifas de Candida foram vistas em todas as amostras, distribuídas perpendicularmente à superfície epitelial. Dos 36 diagnósticos realizados, apenas 11 \"follow-ups\" foram obtidos e desses, apenas cinco pacientes tiveram melhoras quando tratados com antifúngico tópico ou sistêmico. Conclui-se que as lesões de CCH correspondem a uma mínima fração dos diagnósticos realizados no Serviço de Patologia da FOUSP e apresentam geralmente aspectos histológicos característicos. Entretanto, a infecção pelo microrganismo como causa da lesão ou sua presença como organismo oportunista em algumas lesões pode ser esclarecida com mais estudos, principalmente prospectivos. / Candida is a dimorphic microorganism commonly found in the gastrointestinal tract, skin and mucous membranes of humans. In the yeast phase, the fungus is not pathogenic and may be present in the oral cavity of healthy individuals. Oral candidiasis is generally classified into four groups, and the hyperplastic variant is represented by a chronic infection, characterized by an epithelial hyperplasia of the host. Specifically, these lesions are difficult to differentiate from leukoplakias and they also have been associated with an increased chance of developing dysplasias and malignant lesions. The aim of this work was to analyze the incidence of CHC diagnosed at the Oral Pathology Service of FOUSP, intending to demonstrate the occurrence of these infections in the oral cavity as well as to evaluate the histology of the specimens to define the anatomopathological aspects that characterize them. The cases were accessed through the \"Laudo e Imagem\" system and for the characterization of the samples, the clinical data of the patients and the aspects of the lesions were collected. Subsequently, the histopathological analysis of the sections was performed under light microscopy, and the hematoxylin-eosin and periodic acid Schiffer staining were used to evaluate the microscopic characteristics and the presence of Candida, respectively. The professionals who performed the biopsies were contacted to obtain information about the evolution of the lesion and the patient. Out of 58675 diagnoses done between January 2002 and December 2017, 36 cases were of CHC. Women were the most affected and there was a predilection for the white race as well as for the fifth and sixth decades of life. In general, clinically, the lesions appeared as an asymptomatic nodule or white plaque on the tongue or buccal mucosa. Histologically, statistical significance was noted in the presence of epithelial hyperplasia, exocytosis and mononuclear inflammatory infiltrate. Candida hyphae, arranged perpendicular to the epithelial surface, were seen in all samples. Of the 36 diagnoses, only 11 \"follow-ups\" were obtained and of these, only 5 patients had improvement when treated with topical or systemic antifungal drugs. It was concluded that the CHC lesions correspond to a minimal fraction of the diagnoses performed at the Oral Pathology Service of FOUSP, and although their histological characteristics is suggestive of infection by Candida, further studies, mainly prospective, are needed to better understand the lesion.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:39:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hilton Rinaldo Salles Piccelli.pdf: 1013428 bytes, checksum: 900904fd782b76c7a9b8862f4b21bc9e (MD5) Previous issue date: 2008-05-19 / Actinic cheilits (AC) is a premalignant lesion of the lip. In general, patients with actinic cheilitis present with no symptoms and clinical signs do not reflect the hystopathological severity of the lesion, allowing its evolution to invasive cancer. Prognostic indicators for evolution of such lesions have been investigated by different groups, including the detection of alterations in the TP53 gene. A series of 48 patients with actinic cheilitis is evaluated in this study. Clinical signs, histopathological features and imunohistochemistry detection of the p53 protein were evaluated in this group. All the patients were caucasian and 44% had a previous history of non-melanoma skin cancer in another site of the body. The most frequent clinical signs observed in the patients included loss of lip vermilion (75%), pelling of the lip (71%) and atrophy (67%). Eighty-five per cent of the patients did not present, on the first consultation, specific complaints related to actinic cheilitis. Histopathological analysis described dyskeratosis in 95% of the samples, epithelial hyperplasia in 85% and dysplasia in 57% of the cases. munodetection of p53 on the suprabasal layer was diffuse in 8 patients. Among hem, 12% of the samples showed dyskeratosis, 87% hyperplasia and 100% presented epithelium dysplasia. The diffuse imunodetection of the p53 protein on he suprabasal layer correlated positively with the presence of epithelial dysplasia (p many 0,005). According to different reports, dysplasia is the most significant prognostic factor to the evolution of actinic cheilitis to squamous cell carcinoma of he lip. We here suggest that the imunodetection of p53 on the suprabasal layer of actinic cheilitis samples might also represent an important prognostic factor to such premalignant lesions. / A queilite actinica (QA) é uma lesão pré-maligna do lábio. Em geral, os pacientes são assintomáticos e os sinais clínicos não refletem a gravidade histopatológica da lesão, permitindo sua evolução para o câncer invasor. Marcadores prognósticos para esta evolução têm sido investigados, incluindo a detecção de alterações no gene TP53. Uma série de 48 pacientes com QA é avaliada neste estudo. Sinais clínicos, aspectos histopatológicos e a imunodetecção da proteína p53 foram avaliados no grupo. Todos os pacientes eram brancos e 44% apresentaram história prévia de câncer de pele tipo não- melanoma em outro sítio corporal. Os sinais clínicos mais freqüentes incluíram perda do vermelhão do lábio (75%), descamação (71%) e atrofia (67%). À primeira consulta, 85% dos pacientes não apresentavam queixas específicas relacionadas à QA. No exame histopatológico, verificou-se disceratose em 95% dos casos, hiperplasia epitelial em 85% e displasia em 57% dos casos. A imunodetecção de p53 foi difusa e mais intensa na camada suprabasal em 8 pacientes. Dentre eles, 12% apresentavam disceratose, 87% hiperplasia e 100% apresentavam displasia do epitélio (p menor que 0,005). A imunodetecção difusa da proteína p53 na camada suprabasal correlacionou-se positivamente com a presença de displasia epitelial. De acordo com a literatura, a displasia representa o fator prognóstico mais significativo para a evolução da QA para carcinoma do lábio. Assim, sugerimos que a imunodetecção de p53 na camada suprabasal represente também um fator prognóstico para a queilite actínica.