Thesis (Ph. D.)--University of Washington, 2003. / Vita. Includes bibliographical references (leaves 85-105).

Bcr-abl expression being associated with anti-apoptotic signaling and expression of DNA repair enzymes, we surmised that single molecules capable of blocking abl tyrosine kinase (TK) function and damaging DNA should lead to compounds with potency superior to that of GleevecRTM. To this end, we designed novel agents termed "combi-molecules" programmed to not only behave as bcr-abl inhibitors on their own, but also to further degrade to another inhibitor and a DNA damaging species. The released inhibitor was designed to sustain bcr-abl inhibition following degradation of the combi-molecule and the DNA damaging species to activate pathways leading to apoptosis. To model this strategy termed "combi-targeting", we synthesized ZRCM5 (a monoalkyltriazene) that showed antiproliferative activity superior to that of the classical DNA damaging agent TemodalRTM, but not to that of Gleevec RTM. This result was imputed to the rather weak bcr-abl inhibitory activity of ZRCM5 and its strong DNA damaging property. Another prototype designed to contain an aniline mustard moiety (AK04) was a strong bcr-abl inhibitor but a poor DNA alkylating agent. Its cytotoxic activity was again stronger than that of the clinical alkylating agent chlorambucil but inferior to that of GleevecRTM. Further chemical studies directed at structural modification of the benzamide moiety led to the synthesis of ZRF1 with strong potency against bcr-abl TK and strong DNA damaging property. This novel optimized combi-molecule showed a 1.6-3-fold greater potency than GleevecRTM against bcr-abl expressing cells. Further investigation with ZRF1, showed that its cytotoxic potency was dependent on the p53 wild-type status of the cells. In cells expressing wild-type p53, p21 transactivation was associated with cell cycle arrest and that of Bax with apoptosis. In addition to, the pro-apoptotic effect of bcr-abl inhibition, these multiple mechanisms of action may synergistically enhance the cytotoxic potency of ZRF1 in p53 wild-type cells. The study conclusively demonstrated that p53 is a major determinant for the cytotoxic advantage of the novel combi-molecular approach in chronic myelogenous leukemia (CML), a disease in which 70-85% of all cases express wild-type p53.

Diss. (sammanfattning) Karlstad : Karlstads universitet, 2008. / Härtill 4 uppsatser.

No description available.

O STI (imatinib, Glivec) é um inibidor da tirosina quinase BCR-ABL, responsável pela patogênese da leucemia mielóide crônica (LMC). Um total de 110 pacientes com LMC na fase crônica (FC) que falharam ou foram intolerantes ao tratamento com interferon, fase acelerada (FA) e crise blástica (CB) foram tratados com imatinibe entre dezembro de 2000 e setembro de 2003. Resposta hematológica completa e resposta citogenética maior foram observadas em 95,9% e 69,4% respectivamente em pacientes em FC e 93,2% e 36,4% em FA. Apenas 2 pacientes na CB estão vivos. O imatinib foi bem tolerado com altas taxas de resposta. / STI571 (Imatinib, Glevec) is an inhibitor of the Bcr-Abl tyrosine kinase that is central to the pathogenesis of chronic myelogenous leukemia (CML). A total of 110 patients with CML chronic phase (CP) who failed or were intolerant to interferon, accelerated phase (AP) and blastic crisis (BC) were treated with imatinib from December 2000 until September 2003. Complete hematologic response and major cytogenetic response were observed in 95,9% and 69,4% respectively of patients in CP and 93,2% and 36,4% in AP. Only 2 patients are alive in BC. Imatinib is well tolerated with high rates of response

O STI (imatinib, Glivec) é um inibidor da tirosina quinase BCR-ABL, responsável pela patogênese da leucemia mielóide crônica (LMC). Um total de 110 pacientes com LMC na fase crônica (FC) que falharam ou foram intolerantes ao tratamento com interferon, fase acelerada (FA) e crise blástica (CB) foram tratados com imatinibe entre dezembro de 2000 e setembro de 2003. Resposta hematológica completa e resposta citogenética maior foram observadas em 95,9% e 69,4% respectivamente em pacientes em FC e 93,2% e 36,4% em FA. Apenas 2 pacientes na CB estão vivos. O imatinib foi bem tolerado com altas taxas de resposta. / STI571 (Imatinib, Glevec) is an inhibitor of the Bcr-Abl tyrosine kinase that is central to the pathogenesis of chronic myelogenous leukemia (CML). A total of 110 patients with CML chronic phase (CP) who failed or were intolerant to interferon, accelerated phase (AP) and blastic crisis (BC) were treated with imatinib from December 2000 until September 2003. Complete hematologic response and major cytogenetic response were observed in 95,9% and 69,4% respectively of patients in CP and 93,2% and 36,4% in AP. Only 2 patients are alive in BC. Imatinib is well tolerated with high rates of response

Orientador: Fernando Ferreira Costa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T16:15:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alberto_FernandoLopes_D.pdf: 5633645 bytes, checksum: 7354434461195623d47c6efe24126229 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Câncer é o resultado de anomalias no genoma acumuladas ao longo do tempo e corresponde a doença genética mais freqüente na população humana. Os últimos anos têm presenciado enormes avanços tecnológicos que facilitaram o desenvolvimento de técnicas para análise em larga escala do conjunto dos genes expressos nos diferentes tecidos, sendo responsável pela explosão do conhecimento em medicina molecular. No presente trabalho avaliamos o transcriptoma da leucemia mielóide crônica através da técnica de ORESTES (Open Reading Frame Expressed Sequence Tags). As seqüências geradas foram agrupadas de acordo com sua homologia através do pacote de bioinformática Phrap. Essa estratégia aumentou o grau de cobertura genômica, já que as seqüências originais apresentavam tamanho máximo de 500 a 700 bases. Após a retirada dos contaminantes, obtivemos 2933 agrupamentos de seqüências (contigs) e 11568 seqüências isoladas. Cada contig representa um gene em potencial e o seu conjunto foi submetido a comparação com o banco de dados público nr para possibilitar a anotação e classificação funcional. Os agrupamentos ORESTES foram classificados em comunicação celular (19%); crescimento, desenvolvimento e manutenção celular (9%); metabolismo celular (30%); estrutura, motilidade e transporte celular (15%); função desconhecida (28%). Adicionalmente, estabelecemos o mapeamento cromossômico dos contigs obtidos, observando distribuição relativamente homogênea e proporcional representada em todos os cromossomos humanos. O mapeamento dos contigs gerados por ORESTES apresentou-se com padrão de distribuição semelhante ao observado por Venter e colaborasores, 2001. Comparamos o padrão de expressão obtido com o transcriptoma de medula óssea de paciente portador de anemia hemolítica hereditária (doença hematológica não neoplásica) gerado por SAGE (Serial Analysis of Gene Expression). Os genes encontrados foram ordenados de acordo com sua representatividade ou nível de expressão. Não houve correlação entre os padrões de expressão observados pos SAGE e por ORESTES. Do conjunto dos 100 genes mais representados nos ORESTES, dez foram selecionados para validação da expressão por PCR quantitativo em tempo real, utilizando o agente fluorescente SybrGreen I. Identificamos e confirmamos o aumento da expressão em nove genes na LMC. Destes, sete tinham aumento superior a 10 vezes o controle (CAMP, ABR, DEFA3, CSF3R, MLL2, S100A8 e MS4A3), com dois deles (DEFA3 e ABR) com aumento de cerca de 50 vezes ou mais. A análise funcional particularizada para cada um deste genes em LMC tem o potencial de identicar possíveis alvos para novas intervenções terapeuticas. O método mostrou-se poderoso para evidenciar e validar as diferenças de expressão gênica observadas pelas técnicas de seqüenciamento utilizadas anteriormente. Os dados deste trabalho constituem a primeira descrição do transcriptoma da leucemia mielóide crônica / Abstract: The complete collection of transcripts generated from the human genome cannot be predicted from the genome sequence, but should be directly determined for each tissue, due to variations of gene expression in different tissues and disease states, and because genes can encode multiple transcripts derived from alternate splicing and polyadenylation sites. As part of larger project that produced up to 1.2 million ORESTES (open reading frames expressed sequence tags) from different cancer tissues, we constructed a set of cDNAs obtained from bone marrow cells of patients with CML, that represented partial expressed gene sequences that are biased toward the central coding regions of the resulting transcripts (Dias-Neto E et al, Proc Nat Acad Sci USA 97:3491, 2000). The 27,361 ESTs were assembled into contigs using the Phrap package producing 2933 clusters containing 2 to 210 ESTs (leaving 11568 isolated sequences). Functional categories were attributed to the contigs on the basis of the annotation of the matched sequences in nr, into 5 major functional categories and 22 subcategories (cell communication (19%); cell growth, development and m contigs formed by the larger number of EST in bone marrow cells was co mpared with a control bone marrow sample obtained from a non-neoplastic hematologic condition (hereditary hemolytic anemia) and evaluated with SAGE (serial analysis of gene expression). Ten out of 100 most representative contigs had their expression data evaluated further by realtime quantitative PCR with Sybr Green I reagent, confirming the ORESTES data. Seven out of the 10 genes were more than 10-fold upregulated (CAMP, ABR, DEFA3, CSF3R, MLL2, S100A8 e MS4A3) and two additional genes were 50-fold or higher upregulated in CML (DEFA3 e ABR). The wealthy of information provided by this approach demonstrates its usefulness for the analysis of gene expression in specific hematopoietic tissues and diseases / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Foram analisados os resultados retrospectivos do transplante de medula óssea alogênico em 100 pacientes portadores de leucemia mielóide crônica, divididos em dois grupos: Grupo I, de 49 pacientes que recebeu alta hospitalar após a pega medular, e grupo II, de 51 pacientes, que recebeu alta precocemente, antes da pega medular, para acompanhamento ambulatorial. Foram comparados os dias de ocupação de leitos hospitalares, a morbidade e a mortalidade entre os grupos de alta até o dia 100 pós transplante. Verificou-se que, no grupo de alta precoce, houve, significativamente, menos dias de ocupação de leitos hospitalares, sem aumento da morbidade e da mortalidade / We analyzed the results of a retrospective study of 100 patients with chronic myelogenous leukemia submitted to allogeneic stem cell transplantation in one of two settings: Group I, with 49 patients, transplanted in the traditional inpatient and group II, with 51 patients, in partial outpatient. We compared the median number of days spent in hospital, morbidity and mortality within 100 after bone marrow transplantation. We concluded that there was a significant reduction in the median of hospital length of stay in the partial outpatient group, without increasing morbidity and mortality

Foram analisados os resultados retrospectivos do transplante de medula óssea alogênico em 100 pacientes portadores de leucemia mielóide crônica, divididos em dois grupos: Grupo I, de 49 pacientes que recebeu alta hospitalar após a pega medular, e grupo II, de 51 pacientes, que recebeu alta precocemente, antes da pega medular, para acompanhamento ambulatorial. Foram comparados os dias de ocupação de leitos hospitalares, a morbidade e a mortalidade entre os grupos de alta até o dia 100 pós transplante. Verificou-se que, no grupo de alta precoce, houve, significativamente, menos dias de ocupação de leitos hospitalares, sem aumento da morbidade e da mortalidade / We analyzed the results of a retrospective study of 100 patients with chronic myelogenous leukemia submitted to allogeneic stem cell transplantation in one of two settings: Group I, with 49 patients, transplanted in the traditional inpatient and group II, with 51 patients, in partial outpatient. We compared the median number of days spent in hospital, morbidity and mortality within 100 after bone marrow transplantation. We concluded that there was a significant reduction in the median of hospital length of stay in the partial outpatient group, without increasing morbidity and mortality