Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Nitric oxide (NO) is a reactive free radical, that acts as a messenger molecule, mediating several functions, including vasodilation, platelet aggregation inhibition, neurotransmission, antimicrobial and antitumor activities. In several pathological conditions, NO is associated with increased circulatory concentrations of cytokines and endotoxins in inflammatory processes in especially. Because this radical to have a short half-life, its determination is difficult, therefore, measurement of metabolites nitrite/nitrate (NOx) is most often used to evaluate NO production. The objective of this study the effect of pre-analytical interferences been investigating on the NOx and determine the limits of urinary and serum reference for a healthy population. In the simulation of bilirubin, lipemia and hemolysis on serum samples, we evaluated the pre-analytical interference in the measurement of NOx All bilirubin concentrations used (9, 19, 38, 75, 150 and 300 mg /L), Intralipid® (0.67, 1.25, 2.5, 5 and 10 g/L) and hemoglobin (0.5, 1.0, 2.0, 4.0 and 5.0 g/L) resulted in a difference between the original amount of NOx being checked greater than 10 percent %, thus, considered an analytical interference. The reference limits were evaluated following the recommendations of the International Federation of Clinical Chemistry (IFCC), and urinary values of 46.1 mmol / L to 1533.0 mmol/L, and serum values 56.8 mmol/L at 340, 3 mmol/L for a presumably healthy population. Thus, we conclude that bilirubin, lipemia and hemolysis interfere with the measurement of serum activity of NOx. The reference limits were evaluated following the recommendations of the International Federation of Clinical Chemistry (IFCC), and urinary values of 46.1 mmol/L to 1533.0 mmol/L, and serum values 56.8 mmol/L at 340, 3 mmol/L for a healthy population. Thus, we conclude that bilirubin, lipemia and hemolysis interfere with the measurement of serum activity of NOx. / O óxido nítrico (NO) é um radical livre reativo, que age como uma molécula mensageira, mediando diversas funções, incluindo vasodilatação, inibição da agregação plaquetária, neurotransmissão, atividades antimicrobianas e antitumorais. Em várias condições patológicas, o NO está associado com o aumento da concentração circulatória de citocinas e endotoxinas especialmente em processos inflamatórios. Pelo fato deste radical possuir uma meia-vida curta, a sua determinação torna-se difícil e, consequentemente, a mensuração de seus metabólitos nitrito/nitrato (NOx) é mais frequentemente utilizado para avaliar a produção de NO. Assim, o objetivo deste estudo foi investigar o efeito de interferentes pré-analíticos sobre os níveis de NOx, bem como determinar os limites de referência urinária e sérica para uma população saudável. Na simulação da icterícia, lipemia e hemólise em amostras séricas, avaliou-se a interferência pré-analítica na mensuração do NOx. Todas as concentrações utilizadas de bilirrubina (9, 19, 38, 75, 150 and 300 mg/L), de Intralipid® (0,67; 1,25; 2,5; 5 e 10 g/L) e de hemoglobina (0,5; 1,0; 2,0; 4,0 e 5,0 g/L) resultaram em uma diferença do valor original de NOx, sendo verificada uma porcentagem maior que 10%, sendo assim, considerada uma interferência analítica. Os limites de referência foram avaliados seguindo recomendações da International Federation of Clinical Chemistry (IFCC), sendo os valores urinários de 46,1 μmol/L a 1533,0 μmol/L, e os valores séricos 56,8 μmol/L a 340,3 μmol/L para uma população saudável. Também foi possível concluir que a bilirrubina, lipemia e hemólise causam interferência na mensuração da concentração sérica do NOx.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Glutathione (γ-L-glutamyl-L-cysteinylglycine) is the major non-protein thiol body and is involved in cellular antioxidant defense. The free glutathione is present mainly in its reduced form (GSH) and can be converted to the oxidized form (GSSG) in the presence of reactive oxygen species (ROS). The GSH/GSSG ratio high is very important for the cellular redox state and a reduction of this ratio is often used as an indicator of oxidative stress. The enzyme glutathione reductase (GR) catalyzes the reduction of GSSG to GSH using NADPH. Because of the great importance of the antioxidant glutathione and considering that it is present in almost all organisms, numerous studies involving several attempts to detect GSH, GSSG and GR in biological systems has been performed. The objective of this study was to validate an automated analytical method, based on a spectrophotometric method proposed by Mannervick and Carlberg in 1985 to measurement the GR activity which is the oxidation of NADPH, which is monitored spectrophotometrically at a wavelength of 340 nm using the automated analyzer Cobas Mira®, determine its limits of reference for a healthy population and further evaluate the pre-analytical interference that influence the analytical phase of hemoglobin, bilirubin and lipemia. The automated method for measuring of the GR activity was validated as recommended by the EMEA and ANVISA. Since it was linear (r2 = 0.990), precise, with a coefficient of variation (CV) in precision intraassay of 5.7% (50 U/L) and 3.4% (100 U/L) and precision interassay CV of 9.5% (50 U/L) and 9.9% (100 U/L). In addition, we observed a recovery of 114.1% with this method considered accurate. The reference limits were evaluated as recommended by the International Federation of Clinical Chemistry (IFCC), and were 21.7 U / L to 60.3 U / L, for a healthy population. In the simulation of hemolysis, lipemia and jaundice in plasma samples, we evaluated the pre-analytical interference in the activity of the GR. All concentrations of Intralipid® (0.67, 1.25, 2.5, 5 and 10 mg / dL), hemoglobin standard (0.0625, 0.125, 0.25, 0.5 and 1 g / dL), and bilirubin (0.9, 1.9, 3.8, 7.5, 15 and 30 mg / dL) resulted in a difference from the original value of GR, and verified a percentage greater than 5%, and this percentage considered for enzymes, analytical interference. Thus, it was concluded that the automated method developed was linear, precise, accurate, simple and inexpensive, and can be adapted to the Cobas Mira® analyzer. The reference limits for a healthy population were established. Furthermore, it was demonstrated that hemoglobin, lipemia and bilirubin interfere in the measurement of the GR activity. / A glutationa (L-γ-glutamil-L-cysteinylglycine) é o principal tiol não proteico do organismo e está envolvida na defesa celular antioxidante. A glutationa livre está presente principalmente na sua forma reduzida (GSH) e pode ser convertida para a forma oxidada (GSSG) na presença de espécies reativas de oxigênio (EROs). A razão GSH/GSSG elevada é muito importante para o estado redox celular e uma redução desta razão é frequentemente utilizada como um indicador do estresse oxidativo. A enzima glutationa redutase (GR) catalisa a redução de GSSG a GSH utilizando NADPH. Devido a grande importância antioxidante da glutationa e considerando que a mesma está presente em quase todos os organismos, numerosas pesquisas envolvendo as mais diversas tentativas de detecção de GSH, GSSG e GR em sistemas biológicos tem sido realizadas. Assim, o objetivo deste estudo foi validar um método analítico automatizado, baseado em um método espectrofotométrico proposto por Mannervick e Carlberg em 1985 para a mensuração da atividade da GR que consiste na oxidação do NADPH, o qual é monitorado espectrofotometricamente no comprimento de onda de 340 nm utilizando o analisador automatizado Cobas Mira®, determinar seus limites de referência para uma população saudável e ainda avaliar a interferência pré-analítica que influenciam na fase analítica da hemoglobina, lipemia e bilirrubina. O método automatizado para a mensuração da atividade da enzima GR foi validado seguindo recomendações da ANVISA e EMEA. Sendo que o mesmo foi linear (r2=0,990), preciso, apresentando um coeficiente de variação (CV) na precisão intraensaio de 5,7% (50 U/L) e 3,4% (100 U/L) e na precisão interensaio um CV de 9,5% (50U/L) e 9,9% (100 U/L). Além disso, foi observada uma recuperação de 114,1%, sendo este método considerado exato. Os limites de referência foram avaliados seguindo recomendações da International Federation of Clinical Chemistry (IFCC), sendo que foram de 21,7 U/L a 60,3 U/L, para uma população saudável. Na simulação da hemólise, lipemia e icterícia em amostras de plasma, avaliou-se a interferência pré-analítica na atividade da GR. Todas as concentrações utilizadas de Intralipid® (0,67; 1,25; 2,5; 5 e 10 mg/dL), de padrão de hemoglobina (0,0625; 0,125; 0,25; 0,5 e 1 g/dL) e de bilirrubina (0,9; 1,9; 3,8; 7,5; 15 e 30 mg/dL) resultaram em uma diferença do valor original de GR, sendo verificada uma porcentagem maior que 5%, sendo essa porcentagem considerada, para enzimas, interferência analítica. Dessa forma, foi possível concluir que o método automatizado desenvolvido foi linear, preciso, exato, simples e de baixo custo, podendo ser adaptado ao analisador Cobas Mira®. Os limites de referência para uma população saudável também foram estabelecidos. Além disso, foi demonstrado que a hemoglobina, a lipemia e a bilirrubina interferem na mensuração da atividade da GR.