• Refine Query
  • Source
  • Publication year
  • to
  • Language
  • 188
  • 41
  • 3
  • 3
  • 3
  • 3
  • 3
  • 2
  • Tagged with
  • 235
  • 83
  • 57
  • 56
  • 45
  • 43
  • 33
  • 26
  • 22
  • 22
  • 18
  • 18
  • 18
  • 16
  • 15
  • About
  • The Global ETD Search service is a free service for researchers to find electronic theses and dissertations. This service is provided by the Networked Digital Library of Theses and Dissertations.
    Our metadata is collected from universities around the world. If you manage a university/consortium/country archive and want to be added, details can be found on the NDLTD website.
1

Niveles de hemoglobina glicosilada en pacientes con periodontitis crónica

Velásquez Machuca, Victor Eder January 2016 (has links)
OBJETIVO: Evaluar si existe relación entre el nivel de hemoglobina glicosilada y la presencia de periodontitis crónica. MATERIALES Y MÉTODOS: se evaluaron 77 pacientes, 64 varones y 13 mujeres, se agruparon en dos grupos en función a si presentaban o no periodontitis crónica asociada a placa dental. Los datos fueron recolectados en una ficha de recolección donde se tomaron datos de edad, género, índice de masa corporal (IMC) y antecedentes de dislipidemias, adicionalmente, se llenaron los periodontogramas para establecer al grupo de pertenencia de los pacientes, se les envió a laboratorio clínico para recabar y procesar las muestras de hemoglobina glicosilada. Todos los pacientes firmaron el consentimiento informado. RESULTADO: se obtuvo un 5,58% de HbA1c para el grupo con periodontitis crónica, y un 5,31% para el grupo sin periodontitis, valores sin ajustar, se determinó estadísticamente una diferencia significativa (P=0,000), al realzar el estudio de las variables de riesgo, se obtuvo que no hay influencia estadística del género ni del IMC. Aun considerando estos factores de riesgo la diferencia seguía siendo significativa (P=0,001). No se halló una diferencia significativa (P=0,921) entre los varones (5,58%) y mujeres (5,60%) con periodontitis crónica. En el grupo de pacientes sin periodontitis crónica tampoco hubo diferencia significativa (P=0,230) entre varones (5,33%) y mujeres (5,29%). CONSLUSIONES: Se encontró una diferencia estadísticamente significativa en el porcentaje de Hemoglobina Glicosilada y la presencia de Periodontitis Crónica. No se halló diferencia significativa en los pacientes en función al género, tanto en el grupo con periodontitis crónica, como aquellos que no presentaban periodontitis crónica. El análisis de factores de riesgo, mostró que las causales de los niveles elevados de porcentaje de Hemoglobina Glicosilada fueron la presencia de periodontitis crónica, edad del paciente y la presencia de dislipidemias, más no del género y el Índice de Masa Corporal (IMC). La periodontitis crónica está relacionada con valores elevados de Hemoglobina Glicosilada, ya sea de manera directa, o aun relacionado a factores de riesgo. PALABRAS CLAVE: Periodontitis Crónica – Hemoglobina Glicosilada / --- OBJECTIVE: To evaluate the correlation between the level of glycosylated hemoglobin and the presence of chronic periodontitis. MATERIALS AND METHODS: 77 patients, 64 men and 13 women were evaluated were grouped into two groups according to whether or not Chronic periodontitis associated with dental plaque. Data were collected in a data sheet where took it data on age, gender, body mass index (BMI) and a history of dyslipidemia, additionally, periodontogram were filled to set the membership group of patients, were sent to clinical laboratory to collect and process samples glycosylated hemoglobin. All patients signed informed consent. RESULTS: HbA1c was 5.58% for the group with chronic periodontitis, and 5.31% for the group without periodontitis, unadjusted values, determined it statistically significant difference (P = 0.000), in conducting the study of risk variables it obtained no statistical influence of gender or BMI. Even considering these risk factors remained significant difference (P = 0.001). No significant differences were found (P = 0.921) among men (5.58%) and women (5.60%) with chronic periodontitis .In the group of patients without chronic periodontitis there is no significant difference (P = 0.230) between males (5.33%) and women (5.29%). CONCLUSIONS: A statistically significant difference was found in the percentage of Hemoglobin and the presence of chronic periodontitis. No significant difference was found in patients according to gender, both in the group with chronic periodontitis, such as those without chronic periodontitis. The analysis of risk factors showed that the causes of the high levels of percentage of Hemoglobin were the presence of chronic periodontitis, patient age and the presence of dyslipidemia, but not gender and Body Mass Index (BMI). Chronic periodontitis is associated with elevated levels of glycosylated hemoglobin, either directly, or even related to risk factors. KEYWORDS: Chronic Periodontitis – Glycosylated Hemoglobin / Tesis
2

Análise estrutural e funcional de hemoglobinas de ofídios /

Lombardi, Fábio Renato. January 2005 (has links)
Orientador: Gustavo Orlando Bonilla Rodriguez / Banca: Flávio Augusto Vicente Seixas / Banca: Marcos Roberto de Mattos Fontes / Banca: Mário Sérgio Palma / Banca: Arno Rudi Schwantes / Doutor
3

Relación entre ingesta de proteínas de alto valor biológico y hierro dietario con niveles de hemoglobina en mujeres gestantes que asisten a consulta nutricional, Hospital EsSalud Chincha, julio a setiembre de 2016

Echenique Yupanqui, Mario Efrain January 2017 (has links)
Determina la relación que existe entre la ingesta de proteínas de alto valor biológico y hierro dietario con niveles de hemoglobina en mujeres gestantes que se atendieron por consulta externa en el Servicio de Nutrición del Hospital de EsSalud Chincha. Es un estudio cuantitativo, diseño descriptivo, correlacional, transversal. Utiliza una muestra de 114 mujeres gestantes. La técnica de recojo de información es la entrevista y aplica una encuesta de frecuencia de consumo de alimentos. Emplea el análisis de regresión lineal múltiple para el tratamiento estadístico de los datos. Encuentra un 33% de gestantes anémicas, un 44% y 54% de gestantes con ingesta deficiente de proteínas de alto valor biológico y hierro dietario respectivamente. Existe correlación estadísticamente significativa entre la ingesta de proteínas de alto valor biológico y hierro dietario con los niveles de hemoglobina (r>0,80; p<0,001). La ingesta de proteínas de alto valor biológico y hierro dietario influyen directamente sobre los niveles de hemoglobina en mujeres gestantes. / Trabajo académico
4

Prevalencia de anemia en gestantes que acuden por signos de alarma al servicio de emergencia del Hospital Nacional Arzobispo Loayza del 1 junio al 30 de noviembre de 2016

Ayala Castillo, Ralph Fersen January 2017 (has links)
Determina la prevalencia de anemia, en gestantes que acuden por signos de alarma al servicio de emergencia del Hospital Nacional Arzobispo Loayza (HNAL), su severidad, sus tipos morfológicos y algunas características de las pacientes (edad, número de gestas, trimestre de gestación). Estudio realizado durante un período de 6 meses. Un total de 300 gestantes fueron incluidas en el estudio y los datos de importancia tomados mediante una hoja recolectora de datos para su posterior análisis. La presencia y tipos de anemia son determinados usando el sistema CELL DYN 1400 (Abbott Laboratories), y un extendido de sangre periférica. Se obtuvo frecuencia, porcentaje y se determinó la prevalencia por fórmula. / Tesis
5

Estudos estruturais e funcionais das hemoglobinas de Phrynops geoffroanus (Schweigger, 1812) /

Ferrarezi, Ana Lúcia. January 2006 (has links)
Resumo: O presente trabalho tem por motivação efetuar a análise das hemoglobinas do 'cágado-de-barbicha', P. geoffroanus, realizando uma caracterização inédita na literatura e que contribuirá com os estudos de hemoglobinas de quelônios. Na medida em que a espécie estudada é capaz de permanecer por longos períodos submersa, quisemos observar as propriedades de transporte de oxigênio de suas hemoglobinas, e o controle alostérico exercido sobre elas. Para isso, traçamos o perfil das isoformas de hemoglobinas em amostras de sangue de Phrynops geoffroanus por procedimentos eletroforéticos em diferentes sistemas, efetuamos a caracterização funcional em relação às propriedades de transporte de oxigênio, fizemos análises da agregação ocasionada pela oxidação de cisteínas livres e também efetuamos análise enzimática de LDH em tecidos musculares. / Orientador: Gustavo Orlando Bonilla Rodriguez / Coorientador: Claudia Regina Bonini Domingos / Banca: Maria Luisa Schwantes / Banca: Carlos Roberto Ceron / Mestre
6

Oxidação da hemoglobina como modelo de estudo do sistema de óxido-redução eritrocitário: interação entre nitrito de sódio, azul de metileno e cistamina

Hokama, Newton Key [UNESP] January 2001 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001Bitstream added on 2014-06-13T19:42:37Z : No. of bitstreams: 1 hokama_nk_dr_botfm.pdf: 442709 bytes, checksum: 19c729c7bb99de9b488b0c496f8b3922 (MD5) / A hemoglobina, o componente principal do citoplasma eritrocitário, está sujeita à oxidação, fisiologicamente ou por agentes externos, seja através da formação de Metahemoglobina, ou pela oxidação da cisteína β93 por agentes tiois. Impossibilitado de sintetizar proteína, o eritrócito depende primordialmente da via glicolítica, que, além de fornecer ATP, através da integração da formação de NADH e da Via da Hexose Monofosfato, mantém o potencial redutor extremamente eficiente. A presente investigação teve como finalidade avaliar o sistema de óxido-redução eritrocitário, à partir da oxidação da hemoglobina pelas seguintes drogas: a) Nitrito de Sódio, indutora da formação de Metahemoglobina; b) Azul de Metileno, utilizado terapeuticamente e em testes laboratoriais na redução de Metahemoglobina; c) Cistamina, agente tiol, que induz à formação do complexo Hemoglobina-Etilamina, através da oxidação da cisteína β93. Doadores de sangue da Divisão Hemocentro foram convidados a participar do trabalho e tiverem seu sangue coletado após consentimento - 96 - verbal e por escrito. Todos os indivíduos eram do sexo masculino, não anêmicos e sem deficiência de G6PD. Foram utilizados, para os testes, glóbulos lavados, ressuspensos em PBS, pH 7.45, com hemoglobina ajustada entre 11 e 13 g/dl, na presença de glicose e incubados a 37o C com as drogas testadas, nos momentos 10. 90 e 180 minutos de incubação... / Hemoglobin, the essential component of erythrocyte cytoplasm, is physiologically prone to oxidation by external agents, through the formation of Methemoglobin or the oxidation of β93 cysteine by thiol agents. Unable to protein synthesis, the erythrocyte depends essentially on glycolysis, which, besides producing ATP, maintains the highly efficient reduction potential through the integration of NADH production and the Hexose Monophosphate Shunt. The present investigation’s purpose was to evaluate the erythrocyte antioxidant system by studying hemoglobin oxidation by the following substances: a) Sodium Nitrite (SN), a well known Methemoglobin-forming agent; b) Methylene Blue (MB), a Methemoglobin reductant reagent, available for therapeutic and laboratory tests; c) the thiol reagent Cystamine (CI), that reacts with hemoglobin through the β93 cysteine oxidation, forming the Hemoglobin-Ethylamine complex. After informed... (Complete abstract click electronic access below)
7

Estudo da hemoglobina como adjuvante na infecção experimental de eqüinos, via intraperitoneal, com Escherichia coli e/ou Bacteroides fragilis /

Mendes, Luiz Cláudio Nogueira. January 2002 (has links)
Orientador: Luiz Carlos Marques / Banca: José Wanderley Cattelan / Banca: José Jurandir Fagliari / Banca: Francisco Leydon Formiga Feitosa / Banca: Alexandre Secorun Borges / Resumo: Quinze eqüinos adultos foram aleatoriamente divididos em 5 grupos com três animais cada, os quais foram inoculados intraperitonealmente com as seguintes suspensões: Grupo 1: 1x109unidades formadoras de colônias (UFC) de E. coli diluídas em 500 mL de solução salina a 0,9% adicionadas de 5 gramas de hemoglobina, Grupo 2: 1x109UFC de B. fragilis diluídas em 500 mL de solução salina a 0,9% adicionadas de 5 gramas de hemoglobina, Grupo 3: 1x109UFC de E. coli em combinação com 1x109UFC de B. fragilis diluídas em 500 mL de solução salina a 0,9% adicionadas de 5 gramas de hemoglobina, Grupo 4: 500 mL de solução salina a 0,9% adicionadas de 5 gramas de hemoglobina e Grupo 5: 500 mL de solução salina a 0,9%. Leucopenia com neutrofilia foram observadas nos grupos 1 e 3 dentro das primeiras seis horas do estudo e aumento da concentração plasmática de fibrinogênio nos eqüinos do Grupo 1 foi observado das 48 até as 120 horas após a inoculação (HAI). Houve aumento significativo na contagem total de células nucleadas do líquido peritoneal dos eqüinos dos Grupos 1, 2, 3 e 4 das 10 HAI até as 120 HAI. Os teores de proteína total do líquido peritoneal aumentaram significativamente das 2 HAI até o término das observações, nos eqüinos do Grupo 1; das 10 HAI até as 72 HAI, nos eqüinos do Grupo 2; das 6 HAI até as 72 HAI, nos eqüinos do grupo 3; e das 4 HAI até as 60 HAI nos eqüinos do Grupo 4, enquanto que aumento dos níveis de fibrinogênio no líquido peritoneal ocorreram das 2 as 120 HAI nos eqüinos do Grupo 1. Hipertermia, taquicardia, taquipnéia, aumento da tensão e sensibilidade da parede abdominal, diarréia, mímica de dor e diminuição dos sons intestinais foram os sinais clínicos mais freqüentemente observados nos eqüinos dos grupos 1, 2, 3 e 4... (resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Fifteen adult horses were randomly divided into 5 equal groups which was injected intraperitoneally with the following suspension: Group 1: 1x109 colony-forming units (CFU) of E. coli diluted in 500 mL of 0.9% saline plus 5 gr. of hemoglobin, Group 2: 1x109 CFU of B. fragilis diluted in 500 mL of 0.9% saline plus 5 gr. of hemoglobin, Group 3: 1x109 CFU of E. coli in combination with 1x109 CFU of B. fragilis diluted in 500 mL of 0.9% saline plus 5 gr. of hemoglobin, Group 4: 500 mL of 0.9% saline plus 5 gr. of hemoglobin and Group 5: 500 mL of 0.9% saline. Leukopenia with neutropenia was observed in groups 1 and 3 within the first 6 hours of the study and significant increase in plasma fibrinogen concentration in horses of group 1 was observed from 48 till 120 hours after inoculation (HAI). There was a significant increase in total nucleated cell count in peritoneal fluid in horses of groups 1, 2, 3 and 4 from 10 HAI till 120 HAI. Total protein had a significant increase from 2 HAI till the end of the study in G1, from 10 HAI till 72 HAI in G2, from 6 HAI till 72 HAI in G3 and from 4 HAI till 60 HAI in G4, while there was significant increased fibrinogen levels from 2 to 120 HAI in G1. Fever, tachicardia, tachipnea, abdominal wall sensitivity and tension, diarrhoea, colic, decreased borborigmi sounds were the most frequent clinical signs observed in horses of G1, G2, G3 and G4 similarly to others in natural and experimental peritonitis. Animals of Group 5 showed no physical signs alterations. Horses of Groups 2 and 4 demonstrated mild and self-limiting peritonitis, while those of groups 1 and 3 demonstrated clinical signs of higher intensity and duration... (complete abstract, access undermentioned eletronic address) / Doutor
8

Estudo da hemoglobina como adjuvante na infecção experimental de eqüinos, via intraperitoneal, com Escherichia coli e/ou Bacteroides fragilis

Mendes, Luiz Cláudio Nogueira [UNESP] 29 October 2002 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002-10-29Bitstream added on 2014-06-13T20:41:34Z : No. of bitstreams: 1 mendes_lcn_dr_jabo.pdf: 366850 bytes, checksum: f17f9a24a35f6a63b085647431bd07eb (MD5) / Quinze eqüinos adultos foram aleatoriamente divididos em 5 grupos com três animais cada, os quais foram inoculados intraperitonealmente com as seguintes suspensões: Grupo 1: 1x109unidades formadoras de colônias (UFC) de E. coli diluídas em 500 mL de solução salina a 0,9% adicionadas de 5 gramas de hemoglobina, Grupo 2: 1x109UFC de B. fragilis diluídas em 500 mL de solução salina a 0,9% adicionadas de 5 gramas de hemoglobina, Grupo 3: 1x109UFC de E. coli em combinação com 1x109UFC de B. fragilis diluídas em 500 mL de solução salina a 0,9% adicionadas de 5 gramas de hemoglobina, Grupo 4: 500 mL de solução salina a 0,9% adicionadas de 5 gramas de hemoglobina e Grupo 5: 500 mL de solução salina a 0,9%. Leucopenia com neutrofilia foram observadas nos grupos 1 e 3 dentro das primeiras seis horas do estudo e aumento da concentração plasmática de fibrinogênio nos eqüinos do Grupo 1 foi observado das 48 até as 120 horas após a inoculação (HAI). Houve aumento significativo na contagem total de células nucleadas do líquido peritoneal dos eqüinos dos Grupos 1, 2, 3 e 4 das 10 HAI até as 120 HAI. Os teores de proteína total do líquido peritoneal aumentaram significativamente das 2 HAI até o término das observações, nos eqüinos do Grupo 1; das 10 HAI até as 72 HAI, nos eqüinos do Grupo 2; das 6 HAI até as 72 HAI, nos eqüinos do grupo 3; e das 4 HAI até as 60 HAI nos eqüinos do Grupo 4, enquanto que aumento dos níveis de fibrinogênio no líquido peritoneal ocorreram das 2 as 120 HAI nos eqüinos do Grupo 1. Hipertermia, taquicardia, taquipnéia, aumento da tensão e sensibilidade da parede abdominal, diarréia, mímica de dor e diminuição dos sons intestinais foram os sinais clínicos mais freqüentemente observados nos eqüinos dos grupos 1, 2, 3 e 4... / Fifteen adult horses were randomly divided into 5 equal groups which was injected intraperitoneally with the following suspension: Group 1: 1x109 colony-forming units (CFU) of E. coli diluted in 500 mL of 0.9% saline plus 5 gr. of hemoglobin, Group 2: 1x109 CFU of B. fragilis diluted in 500 mL of 0.9% saline plus 5 gr. of hemoglobin, Group 3: 1x109 CFU of E. coli in combination with 1x109 CFU of B. fragilis diluted in 500 mL of 0.9% saline plus 5 gr. of hemoglobin, Group 4: 500 mL of 0.9% saline plus 5 gr. of hemoglobin and Group 5: 500 mL of 0.9% saline. Leukopenia with neutropenia was observed in groups 1 and 3 within the first 6 hours of the study and significant increase in plasma fibrinogen concentration in horses of group 1 was observed from 48 till 120 hours after inoculation (HAI). There was a significant increase in total nucleated cell count in peritoneal fluid in horses of groups 1, 2, 3 and 4 from 10 HAI till 120 HAI. Total protein had a significant increase from 2 HAI till the end of the study in G1, from 10 HAI till 72 HAI in G2, from 6 HAI till 72 HAI in G3 and from 4 HAI till 60 HAI in G4, while there was significant increased fibrinogen levels from 2 to 120 HAI in G1. Fever, tachicardia, tachipnea, abdominal wall sensitivity and tension, diarrhoea, colic, decreased borborigmi sounds were the most frequent clinical signs observed in horses of G1, G2, G3 and G4 similarly to others in natural and experimental peritonitis. Animals of Group 5 showed no physical signs alterations. Horses of Groups 2 and 4 demonstrated mild and self-limiting peritonitis, while those of groups 1 and 3 demonstrated clinical signs of higher intensity and duration... (complete abstract, access undermentioned eletronic address)
9

Relación entre la hemoglobina glicosilada (HbA1c) y el perfil lipídico en pacientes que acudieron al SAAAC durante el período 2010-2013

Fernandez Espejo, José Abel, Cayao Leon, Miguel Nino, Fernandez Espejo, José Abel, Cayao Leon, Miguel Nino January 2015 (has links)
Se realizó un estudio observacional, descriptivo, correlacional, retrospectivo y de corte transversal con el objetivo principal de explicar la relación bioquímica entre la hemoglobina glicosilada y el perfil lipídico en 222 pacientes, con edades comprendidas entre 30 a 90 años, que acudieron al Servicio Académico Asistencial de Análisis Clínicos (SAAAC) de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, del 2010 al 2013, a los cuales se les realizó las siguientes pruebas de laboratorio: determinación de hemoglobina glicosilada por el método de resina ion-cambio, glucosa por el método de glucosa oxidasa y peroxidasa; colesterol total, triglicéridos y HDLc por los métodos enzimáticos convencionales. Para el cálculo de LDLc y VLDLc se utilizó la fórmula de Friedewald. Se encontró que 79,3 % de la población tiene valores de HbA1c por encima del rango normal; 52,2 % presentaron hipertrigliceridemia y 39,6 % hipercolesterolemia. Los coeficientes de correlación de Pearson demostraron relación directa estadísticamente significativa entre la HbA1c y el colesterol total, LDLc, VLDLc y triglicéridos, mientras que con el HDLc, la relación resultó inversa y no significativa. Aplicando correlación de Pearson para cada grupo clasificado según nivel de hemoglobina HbA1c, género y edad, se halló un incremento significativo en la correlación en el grupo con nivel elevado de HbA1c (sólo en CT, VLDLc y TG), en el género femenino y en el grupo de 51 a 70 años (sólo en CT, VLDLc y TG). Los mecanismos bioquímicos que sustentarían la relación son específicos según el estado de salud del paciente: acetil-CoA y glicerol-3fosfato mediarían la relación en sujetos sanos; mientras que los AGEs y las alteraciones de las proteínas reguladoras serían las causas en pacientes diabéticos. Palabras clave: hemoglobina glicosilada, perfil lipídico, lipoproteínas. / --- An observational, descriptive, correlational , cross-sectional and retrospective study was conducted was done in order to explain the main biochemical relationship between Glycated hemoglobin and lipid profile in 222 patients with ages included between 30 to 90 years who presented to the Academic Assistance Clinical Analysis (SAAAC), of The Faculty of Pharmacy and Biochemistry of The Major National University of San Marcos (UNMSM), from 2010 to 2013. It was done laboratory tests in these patients: glycated hemoglobin determination by the method of ion-exchange resin, glucose by the method of glucose oxidase and peroxidase, total cholesterol, triglycerides and HDLc by the conventional enzymatic methods. It was used the Friedewald formula for the calculation of LDLc and VLDLc. It was found that 79.3% of the population have HbA1c values above the normal range, 52.2% had hypertriglyceridemia, and 39.6% had hypercholesterolemia. The Pearson correlation coefficients showed statistically significant direct relationship between HbA1c and total cholesterol, LDLc, VLDLc and triglycerides, whereas with HDLc, the relationship was inverse and not significant. Applying Pearson correlation for each classified group according to levels of HbA1c, gender and age a significant increase in the correlation in the group with elevated HbA1c (only CT , VLDLc and TG ) in females and in the group of 51-70 years ( only CT , VLDLc and TG) was found.The biochemical mechanisms that support the relationship probably are specific of the state of health of patient: the acetyl-CoA and glycerol-3-phosphate would mediate the relationship in healthy subjects; while AGEs and alterations in regulatory proteins would be intermediaries in diabetic patients Keywords: glycosylated hemoglobin, lipid profile, lipoproteins. / Tesis
10

Resolução da estrutura cristalográfica e análise da estabilidade estrutural da hemoglobina de Cerdocyon thous

Esteves, Gisele Ferreira January 2007 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2007. / Submitted by Aline Jacob (alinesjacob@hotmail.com) on 2010-01-21T19:05:20Z No. of bitstreams: 1 2007_GiseleFerreiraEsteves.pdf: 4786645 bytes, checksum: 022fe241400fc9eeb51f7a8933799cca (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-01-21T22:29:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_GiseleFerreiraEsteves.pdf: 4786645 bytes, checksum: 022fe241400fc9eeb51f7a8933799cca (MD5) / Made available in DSpace on 2010-01-21T22:29:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_GiseleFerreiraEsteves.pdf: 4786645 bytes, checksum: 022fe241400fc9eeb51f7a8933799cca (MD5) Previous issue date: 2007 / A hemoglobina de Cerdocyon thous (HbCt) foi purificada e cristalizada pelo método de difusão de vapor a 21°C na condição PEG 4000 16%, Hepes-Na 0,1 M pH 7,8. Os dados cristalográficos foram coletados no Laboratório Nacional de Luz Síncrotron (LNLS). O grupo espacial do cristal é do tipo P212121, com os eixos da célula unitária de a=52,73; b=84,24 e c=130,28 Å, correspondentes a cristais do sistema ortorrômbico. A estrutura cristalográfica da HbCt foi resolvida até o limite de 2,2 Å de resolução, pelo método de substituição molecular utilizando a estrutura da hemoglobina de Chrysocyon brachyurus (PDB ID: 1FHJ) como modelo. O modelo final obtido após o refinamento foi depositado no PDB com o código 2B7H, apresentando boa qualidade conforme indicado por vários parâmetros, dentre eles, o valor baixo dos fatores de temperatura, o Rfactor de 0,168 e Rfree de 0,232. A estrutura dessa hemoglobina apresenta uma água como ligante do ferro e sua organização estrutural assemelha-se às hemoglobinas do tipo metahemoglobina. A sua estrutura cristalográfica foi utilizada como um modelo de estudo para análise do comprometimento estrutural tridimensional com substituições de aminoácidos em posições específicas. Para isso, foram utilizadas estruturas cristalográficas de hemoglobinas de humano e de cavalo, disponíveis no PDB. Além dessas substituições uma análise detalhada da relação estrutura vs estabilidade foi feita. Por ser uma proteína multimérica, a desnaturação da hemoglobina varia de acordo com a condição de pH e o tipo de desnaturante utilizado. Neste trabalho, o processo de desdobramento da HbCt e da hemoglobina de Pseudalopex vetulus (HbPv) foi realizado para analisar a estabilidade dessas moléculas. Estes ensaios foram acompanhados por fluorescência e dicroísmo circular utilizando a uréia, a guanidina, diferentes pHs e a temperatura como agentes desnaturantes. Além disso, foi analisado o efeito do surfactante catiônico brometo de hexadeciltrimetil amônio (CTAB) na estabilidade das hemoglobinas, por dicroísmo circular. A HbCt é mais estável em pH ácido e mais instável do que a HbPv em pH básico. Esses dados foram comparados com a cianometahemoglobina humana. O CTAB na concentração de 0,5 e 1 mM para HbCt e HbPv, respectivamente estabiliza as hemoglobinas principalmente pelo efeito de hidratação preferencial. Uma análise da relação da estabilidade de hemoglobinas com a estrutura tridimensional foi feita baseando-se nos modelos tridimensionais da HbCt, humana e de cavalo. Comparando com a hemoglobina humana, as modificações apresentadas na HbCt tendem a ser estabilizadoras. Em contrapartida, comparando com a hemoglobina eqüina, as modificações apresentadas na HbCt tendem a ser desfavoráveis para a estabilidade conformacional. As substituições e o comprometimento com a organização estrutural, causadas no ambiente molecular, foram caracterizadas e podem servir de modelo para o desenho racional de proteínas mais estáveis, com vistas à aplicação biotecnológica, como é o caso do desenvolvimento do sangue artificial recentemente descrito na literatura. Esse tipo de estudo pode ser aplicado como um modelo da relação estrutura vs estabilidade de proteínas em geral, mas principalmente para aquelas com maior número de entradas no PDB e que merecem atenção pela função e aplicação biotecnológica. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The hemoglobin from C. thous (HbCt) was purified and crystallized by hanging drop vapor diffusion method at 21oC in 16% PEG 4000, 0.1 M Hepes-Na pH 7.8. The crystallographic data were collected in the National Laboratory of Synchrotron Light (LNLS). The crystals grew in space group P212121 (orthorhombic type) with cell dimensions of a=52.73, b=84.24 and c=130.28 Å. The crystallographic structure of the HbCt was solved at 2.2 Å resolution, by molecular replacement using the structure of the hemoglobin from Chrysocyon brachyurus (pdb 1FHJ)as a search model. The model was refined and deposited in the PDB under the code 2B7H with structural quality indicated by some parameters, among them, the low value of B-factor, the Rfactor of 0.168 and the Rfree of 0.232. The hemoglobin presents one water molecule as ligand of the iron characterizing the methemoglobin form. The structural organization of the subunits of the HbCt is similar to the known hemoglobins. The crystallographic structure of HbCt and hemoglobins from human and horse were used as models to study the structural effects concerning the amino acid substitutions in specific positions and the consequent conformational changes of the respective molecular environment. Indeed, an extensive analysis of the relationship between estructure and stability was done. The hemoglobin is a multimeric protein and its unfolding process depends of several conditions such as pH and denaturing agent. In this work, the unfolding process of the HbCt and the hemoglobin from Pseudalopex vetulus (HbPv) was performed by fluorescence and circular dichroism using urea, guanidine, different pHs and temperature as denaturing agents. Moreover, the stabilizing effect of the cationic surfactant hexadecyltrimethyl ammonium bromide (CTAB) was analyzed by circular dichroism. HbCt is more stable in acid pH and more instable than HbPv in basic pH. The CTAB, at 0.5 and 1.0 mM for HbCt and HbPv, respectively, stabilizes the hemoglobins mainly by preferential hydration. An analysis of the relationship between stability and the threedimensional structure was done based on the three-dimensional models of HbCt, human and horse. The differences in amino acidic content of HbCt comparing with the human hemoglobin tend to stabilize the HbCt. On the other hand, comparing with equine hemoglobin, the modifications presented in HbCt tend to be unfavorable for the conformational stability. VII The amino acidic substitutions and the consequent conformational changes in the molecular environment of the HbCt were characterized. Generally, this study is very important for rational design of stable proteins with biotechnological applications. For hemoglobin, in particular, this study is fundamental in order to produce the artificial blood, a new tendency of pharmaceutical companies, as recently described in the literature.

Page generated in 0.0283 seconds