Différents mécanismes de tolérance centraux et périphériques permettent la sélection négative des lymphocytes B auto-réactifs tout en préservant la sélection positive et la différenciation en plasmocytes producteurs d’anticorps de haute affinité. Ces mécanismes de tolérance sont altérés dans les pathologies auto-immunes et ces altérations conduisent à la production d’auto-anticorps. Ainsi, un ciblage thérapeutique des lymphocytes B autoréactifs, notamment avec les anticorps monoclonaux anti-CD20, donne des résultats prometteurs dans différentes pathologies auto-immunes. Si ces traitements ont démontré leur efficacité dans les vascularites associées aux anticorps anti-protéines cytoplasmiques des polynucléaires neutrophiles (ANCA) (VAA), d’autres maladies auto-immunes à composante vasculaire, dont la sclérodermie systémique (ScS) ou l’hypertension artérielle pulmonaire idiopathique (iHTAP), restent insensibles à ce ciblage. D’autre part, la caractérisation des sous-populations lymphocytaires B pathologiques porte essentiellement sur la détection des cellules exprimant ces auto-anticorps. Ce projet a ainsi eu pour objectif une caractérisation phénotypique et fonctionnelle comparative des sous-populations lymphocytaires B impliquées dans ces différentes pathologies auto-immunes vasculaires.Les patients atteints de granulomatose avec polyangéite présentent une activation importante de l’immunité innée mais aussi une production augmentée d’IL6 par les lymphocytes B en lien avec une activation importante des lymphocytes T. Des modifications phénotypiques des lymphocytes B sont observées chez les patients atteints de VAA, notamment la polyangéite microscopique suggérant pour cette vascularite une composante auto-immune. Ainsi, le CD69, le CD95 et le récepteur à l’IL-6 permettent de discriminer les différentes formes de la maladie. Dans la ScS et plus particulièrement dans les formes les plus sévères, diffuses, et dans l’HTAP associée, une activation basale des lymphocytes B est observée avec une sécrétion importante d’IL-6 et de TGF-ß. Ce dernier contribue, in vitro, à la prolifération des fibroblastes et à la sécrétion de collagène, responsables des mécanismes fibrosants observés dans la pathologie. Enfin, les basophiles présents dans la ScS semblent également activés et participer à l’activation des lymphocytes B et des fibroblastes malades. Ces résultats montrent que le lymphocyte B, en plus de son rôle dans la production d’anticorps, peut intervenir en physiopathologie par la sécrétion de cytokines pro-inflammatoires ou pro-fibrosantes comme l’IL-6 et le TGF-ß, toutes deux impliquées dans les processus d’activation vasculaire. / Tolerance mechanisms allow the negative selection of auto-reactive B lymphocytes while protecting the positive selection and differentiation of plasmocytes that produce high affinity antibodies. Tolerance mechanisms are altered in various auto-immune diseases and allow the production of auto-antibodies. Indeed, therapeutic targeting of autoreactive B lymphocytes, notably using anti-CD20 monoclonal antibodies, gives promising results in several auto-immune pathologies. While these treatments show a relative efficacy in anti-neutrophil cytoplasmic antibodies associated vasculitis (ANCA) (AAV), other autoimmune diseases with vascular components, among which systemic sclerosis (SSc) or idiopathic high blood pressure (iPAH), remain resistant to the targeting. Previous studies have essentially addressed the characterization of auto-antibodies producing B cells sub-populations. Therefore, this thesis project aimed at delineating phenotypic and functional characterization of the lymphocytic B cells sub-populations involved in these various vascular autoimmune diseases.Patients affected by Granulomatosis with polyangiitis presented with important activation of innate immune system altogether with an increased production of IL6 by B lymphocytes correlated with T lymphocytes activation. Phenotypic alterations of B lymphocytes were observed for AAV patients, notably with MPA, suggesting an autoimmune component. Expression of CD69, CD95 and IL-6- receptor allowed discrimination between the various forms of the disease. In SSc, with particular emphasis in the most severe, diffuse forms, and in the associated PAH, a basal activation of the B cells was observed, allowing an important secretion of IL-6 and TGF-ß1. The latter contributed to the proliferation of fibroblasts and to the secretion of collagen, responsible for fibrosis induction as observed in the pathology. Finally, presence of activated basophils in SSc also participates in the activation of B cells and fibroblasts. These results place B lymphocytes, besides their role in antibody production, as important pathophysiological players through the secretion of pro-inflammatory and pro-fibrotic cytokines such as IL-6 and TGF-ß which are both implicated in endothelial cells activation in autoimmune vascular diseases.

L'évolution des systèmes pendant leur vie opérationnelle est incontournable. Les systèmes sûrs de fonctionnement doivent évoluer pour s'adapter à des changements comme la confrontation à de nouveaux types de fautes ou la perte de ressources. L'ajout de cette dimension évolutive à la fiabilité conduit à la notion de résilience informatique. Parmi les différents aspects de la résilience, nous nous concentrons sur l'adaptativité. La sûreté de fonctionnement informatique est basée sur plusieurs moyens, dont la tolérance aux fautes à l'exécution, où l'on attache des mécanismes spécifiques (Fault Tolerance Mechanisms, FTMs) à l'application. A ce titre, l'adaptation des FTMs à l'exécution s'avère un défi pour développer des systèmes résilients. Dans la plupart des travaux de recherche existants, l'adaptation des FTMs à l'exécution est réalisée de manière préprogrammée ou se limite à faire varier quelques paramètres. Tous les FTMs envisageables doivent être connus dès le design du système et déployés et attachés à l'application dès le début. Pourtant, les changements ont des origines variées et, donc, vouloir équiper un système pour le pire scénario est impossible. Selon les observations pendant la vie opérationnelle, de nouveaux FTMs peuvent être développés hors-ligne, mais intégrés pendant l'exécution. On dénote cette capacité comme adaptation agile, par opposition à l'adaptation préprogrammée. Dans cette thèse, nous présentons une approche pour développer des systèmes sûrs de fonctionnement flexibles dont les FTMs peuvent s'adapter à l'exécution de manière agile par des modifications à grain fin pour minimiser l'impact sur l'architecture initiale. D'abord, nous proposons une classification d'un ensemble de FTMs existants basée sur des critères comme le modèle de faute, les caractéristiques de l'application et les ressources nécessaires. Ensuite, nous analysons ces FTMs et extrayons un schéma d'exécution générique identifiant leurs parties communes et leurs points de variabilité. Après, nous démontrons les bénéfices apportés par les outils et les concepts issus du domaine du génie logiciel, comme les intergiciels réflexifs à base de composants, pour développer une librairie de FTMs adaptatifs à grain fin. Nous évaluons l'agilité de l'approche et illustrons son utilité à travers deux exemples d'intégration : premièrement, dans un processus de développement dirigé par le design pour les systèmes ubiquitaires et, deuxièmement, dans un environnement pour le développement d'applications pour des réseaux de capteurs.

L'évolution des systèmes pendant leur vie opérationnelle est incontournable. Les systèmes sûrs de fonctionnement doivent évoluer pour s'adapter à des changements comme la confrontation à de nouveaux types de fautes ou la perte de ressources. L'ajout de cette dimension évolutive à la fiabilité conduit à la notion de résilience informatique. Parmi les différents aspects de la résilience, nous nous concentrons sur l'adaptativité. La sûreté de fonctionnement informatique est basée sur plusieurs moyens, dont la tolérance aux fautes à l'exécution, où l'on attache des mécanismes spécifiques (Fault Tolerance Mechanisms, FTMs) à l'application. A ce titre, l'adaptation des FTMs à l'exécution s'avère un défi pour développer des systèmes résilients. Dans la plupart des travaux de recherche existants, l'adaptation des FTMs à l'exécution est réalisée de manière préprogrammée ou se limite à faire varier quelques paramètres. Tous les FTMs envisageables doivent être connus dès le design du système et déployés et attachés à l'application dès le début. Pourtant, les changements ont des origines variées et, donc, vouloir équiper un système pour le pire scénario est impossible. Selon les observations pendant la vie opérationnelle, de nouveaux FTMs peuvent être développés hors-ligne, mais intégrés pendant l'exécution. On dénote cette capacité comme adaptation agile, par opposition à l'adaptation préprogrammée. Dans cette thèse, nous présentons une approche pour développer des systèmes sûrs de fonctionnement flexibles dont les FTMs peuvent s'adapter à l'exécution de manière agile par des modifications à grain fin pour minimiser l'impact sur l'architecture initiale. D'abord, nous proposons une classification d'un ensemble de FTMs existants basée sur des critères comme le modèle de faute, les caractéristiques de l'application et les ressources nécessaires. Ensuite, nous analysons ces FTMs et extrayons un schéma d'exécution générique identifiant leurs parties communes et leurs points de variabilité. Après, nous démontrons les bénéfices apportés par les outils et les concepts issus du domaine du génie logiciel, comme les intergiciels réflexifs à base de composants, pour développer une librairie de FTMs adaptatifs à grain fin. Nous évaluons l'agilité de l'approche et illustrons son utilité à travers deux exemples d'intégration : premièrement, dans un processus de développement dirigé par le design pour les systèmes ubiquitaires et, deuxièmement, dans un environnement pour le développement d'applications pour des réseaux de capteurs. / Evolution during service life is mandatory, particularly for long-lived systems. Dependable systems, which continuously deliver trustworthy services, must evolve to accommodate changes e.g., new fault tolerance requirements or variations in available resources. The addition of this evolutionary dimension to dependability leads to the notion of resilient computing. Among the various aspects of resilience, we focus on adaptivity. Dependability relies on fault tolerant computing at runtime, applications being augmented with fault tolerance mechanisms (FTMs). As such, on-line adaptation of FTMs is a key challenge towards resilience. In related work, on-line adaption of FTMs is most often performed in a preprogrammed manner or consists in tuning some parameters. Besides, FTMs are replaced monolithically. All the envisaged FTMs must be known at design time and deployed from the beginning. However, dynamics occurs along multiple dimensions and developing a system for the worst-case scenario is impossible. According to runtime observations, new FTMs can be developed off-line but integrated on-line. We denote this ability as agile adaption, as opposed to the preprogrammed one. In this thesis, we present an approach for developing flexible fault-tolerant systems in which FTMs can be adapted at runtime in an agile manner through fine-grained modifications for minimizing impact on the initial architecture. We first propose a classification of a set of existing FTMs based on criteria such as fault model, application characteristics and necessary resources. Next, we analyze these FTMs and extract a generic execution scheme which pinpoints the common parts and the variable features between them. Then, we demonstrate the use of state-of-the-art tools and concepts from the field of software engineering, such as component-based software engineering and reflective component-based middleware, for developing a library of fine-grained adaptive FTMs. We evaluate the agility of the approach and illustrate its usability throughout two examples of integration of the library: first, in a design-driven development process for applications in pervasive computing and, second, in a toolkit for developing applications for WSNs.

En raison des activités anthropiques croissantes, de larges sites sont contaminés par les métaux lourds qui affectent les systèmes biologiques. La souche Oidiodendron maius Zn pourrait être un organisme intéressant dans un programme de bioremédiation étant à la fois un champignon mycorhizien éricoïde et une souche tolérante aux métaux lourds. Pour comprendre les mécanismes de la tolérance de cette souche, trois approches différentes ont été menées.La première approche a abouti à la génération de mutants du gène superoxyde dismutase 1 (OmSOD1). Il s'agit de la première délétion d'un gène par recombinaison homologue chez un champignon mycorhizien. Nous démontrons que l'absence d'OmSOD1 cause un déséquilibre dans l'homéostasie rédox et un changement dans le dialogue entre le champignon et sa plante hôte.La deuxième approche a été basée sur la complémentation fonctionnelle d'un mutant de levure en utilisant une banque d'ADNc d'O. maius. Nous décrivons les premiers transporteurs d'un champignon mycorhizien éricoïde capables de conférer la tolérance au Zn dans des levures. Deux gènes ont été isolés et nommés OmCDF et OmFET. L'expression hétérologue de ces deux gènes dans différents mutants de levure a permis de conférer la tolérance au Zn. De plus, OmCDF a également permis de conférer la tolérance au Co. Nos données suggérent que OmCDF est un transporteur de Zn responsable du transfert du Zn cytoplasmique vers le réticulum endoplasmique, tandis que l'expression d'OmFET pourrait neutraliser la toxicité engendrée par le Zn en augmentant le contenu du Fe dans la cellule. La troisième approche a concerné le criblage d'une collection de mutants aléatoires d'O. maius sur Zn, Cd et ménadione. Nous décrivons la caractérisation d'un mutant dans le gène nmr. Dans ce mutant, une diminution de la teneur en glutamine et asparagine, ainsi qu'une réduction de l'activité de la glutamine synthétase ont été enregistrées. Les liens possibles entre la tolérance au stress oxydatif et le métabolisme azoté sont discutés. / Due to increasing anthropogenic activities, large areas are highly contaminated by heavy metals which are affecting biological systems. Oidiodendron maius strain Zn could be an interesting organism in a bioremediation program being both an ericoid mycorrhizal fungus and a heavy metal-tolerant strain. To understand the mechanisms underlying the oxidative stress tolerance of this strain, three different approaches were used. The first approach allowed us to obtain superoxide dismutase 1 (SOD1) null mutants. The most important technical advance in this work was the first successful disruption of a gene by homologous recombination in a mycorrhizal fungus. We demonstrate that the lack of OmSOD may cause an imbalance in the redox homeostasis and an alteration in the delicate dialogue between the fungus and its host plant. The second approach was based on a yeast functional complementation screening using an O. maius cDNA library. In this work we report the first transporters of an ericoid mycorrhizal fungus capable of conferring Zn tolerance to yeast transformants. Two full-length cDNAs were isolated and named OmCDF and OmFET. The heterologous expression of these two genes in various yeast mutants conferred resistance to zinc. Additionally, OmCDF expression also conferred Co tolerance. We provide evidence that OmCDF functions as a Zn transporter responsible for relocating cytoplasmic Zn into the endoplasmic reticulum, whereas expression of OmFET could counteract Zn toxicity by increasing Fe content of cells. The third approach consisted in the screening of a collection of O. maius random-mutants on Zn, Cd and menadione. We report the characterization of an O. maius-mutant that carries a mutation in the nmr gene. In this mutant, a decrease of glutamine and asparagine pools, and a reduction of the activity of glutamine synthase were recorded. Possible links between the oxidative stress tolerance and the nitrogen metabolism are discussed.