Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-01-30T15:48:55Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Lucyane Bastos.pdf: 1675598 bytes, checksum: 29a19e4c0ea7480cc62ca76f4bb084fc (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-01-30T15:49:11Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Lucyane Bastos.pdf: 1675598 bytes, checksum: 29a19e4c0ea7480cc62ca76f4bb084fc (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-01-30T15:49:31Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Lucyane Bastos.pdf: 1675598 bytes, checksum: 29a19e4c0ea7480cc62ca76f4bb084fc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-30T15:49:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Lucyane Bastos.pdf: 1675598 bytes, checksum: 29a19e4c0ea7480cc62ca76f4bb084fc (MD5) Previous issue date: 2016-04-20 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / The filaria worms are parasites which belong to the phylum Nematoda, superfamily They are transmitted by insect vectors as black flies, mosquitoes and ceratopogonidea. Among the filaria worms that cause diseases in humans, there are: Wuchereria bancrofti, Brugia malayi, Brugia timori, Onchocerca volvulus, Mansonella ozzardi, Mansonella perstans, Mansonella streptocerca and Loa loa. In the Brazilian Amazon, there are three species: O. volvulus, Onchocerciasis agent, and M. ozzardi and M. perstans, the mansonelliasis agents. The mansonelliasis caused by M. ozzardi is a disease whose pathogenicity is still a matter of debate, with some characteristic symptoms, being commonly confused with other tropical diseases such as malaria. This pathology shows that the prevalence increases with age, affecting preferably males with greater exposure to the vector. The infection by this parasite was typically rural, however the prevalence in urban areas has grown and it is now equivalent to those found in rural areas. In order to verify the occurrence of mansonelliasis in São Gabriel da Cachoeira (AM), an epidemiological study was conducted to collect blood by finger prick, for impregnation on filter paper and production of thick blood slide from July to August 2015. The material was stored at the cooling temperature of 4 ° C to 8 ° C until its arrival at the Multiuser Laboratory Leonidas Institute and Maria Deane of the Oswaldo Cruz Foundation in Manaus, where they were subjected to the later stages: DNA extraction, Nested PCR, sequencing and reading of thick films. Among 497 individuals analyzed, 81 (16.3%) were positive by molecular analysis and 39 (7.9%) by the thick drop technique, and of these, 50 (22.4%) were male and 31 (11 3%) female. Within 81 positive individuals by FnPCR, 37 (45.7%) live in areas considered urban (area 1), 20 (24.7%) in periurban area (area 2) and 24 (29.6%) in rural area (area 3). Within the 39 positive participants by the thick drop technique, 13 (33.3%) were living in urban areas, 14 (35.9%) in peri-urban and 12 (30.8%) in rural areas. The study revealed that there was no diversity of the parasite in the region from July to August 2015, with the acquisition of compatible sequences only the Mansonella ozzardi, further demonstrating that molecular technique represents an important potential for the lifting of the epidemiology of filaria in the region and can be used with simple collection, by fingerstick, on filter paper facilitating surveying in remote areas and logistical constraints. / As filárias são parasitas pertencentes ao filo Nematoda, superfamília Filarioidea, transmitidos por insetos vetores como simulídeos, ceratopogonídeos e culicídeos. Dentre as filárias que causam doenças em humanos, destacam-se: Wuchereria bancrofti, Brugia malayi, Brugia timori, Onchocerca volvulus, Mansonella ozzardi, Mansonella perstans, Mansonella streptocerca e Loa loa. Na Amazônia brasileira, destacam-se três espécies: O. volvulus, agente da oncocercose, e M. ozzardi e M. perstans, agentes da mansonelose. A mansonelose causada pela M. ozzardi trata-se de uma doença cuja patogenicidade ainda é alvo de discussões, apresentando sintomatologia pouco característica, sendo comumente confundida com outras patologias tropicais, como a malária. Essa patologia apresenta prevalências que aumentam com a idade, acometendo preferencialmente, indivíduos do sexo masculino e com maior exposição ao vetor. A infecção por esse parasita era tipicamente rural, no entanto as prevalências em áreas urbanas tem crescido e se equiparado àquelas encontradas em áreas rurais. Com o intuito de verificar a ocorrência de mansonelose no município de São Gabriel da Cachoeira(AM), foi realizado um estudo epidemiológico transversal, com coleta de sangue, através de punção digital, para impregnação em papel de filtro e confecção de lâmina de gota espessa, nos períodos de Julho a Agosto de 2015. O material foi armazenado em temperatura de geladeira (4oC a 8oC) até a chegada ao Laboratório Multiusuário do Instituto Leônidas e Maria Deane da Fundação Oswaldo Cruz, em Manaus, onde foram submetidas às etapas posteriores, de extração de DNA, Nested PCR, sequenciamento e leitura das lâminas de gota espessa. Dos 497 indivíduos analisados, 81 (16,3%) apresentaram resultado positivo pela análise molecular e 39 (7,9%) pela técnica de gota espessa, sendo que destes 50 (22,4%) pertenciam ao sexo masculino e 31 (11,3%) ao sexo feminino. Dos 81 indivíduos positivos pela FnPCR, 37 (45,7%) residiam em área considerada urbana (área 1), 20 (24,7%) em área periurbana (área 2) e 24 (29,6%) em área rura (área 3). Dos 39 participantes positivos pela técnica de gota espessa, 13 (33,3%) eram residentes em área urbana, 14 (35,9%) em área periurbana e 12 (30,8%) em área rural. O estudo revelou que não foi encontrada diversidade do parasita na região, no período de julho a agosto de 2015, com a obtenção de sequências compatíveis apenas com as de Mansonella ozzardi, demonstrando ainda que técnica molecular representa um potencial importante para o levantamento da epidemiologia de filárias na região, podendo ser utilizada com coleta simples, por punção digital, em papel de filtro facilitando a realização de levantamentos em áreas distantes e com restrições logísticas.

Estudo preliminar da redução da microfilaremia in vivo de Mansonella ozzardi (Manson, 1897) com uso de ivermectina, utilizando a técnica de filtração em membrana de policarbonato, Lábrea, Amazonas, Brasil. Estudou-se a eficácia do uso de dose única de ivermectina 0,15 mg/kg de peso no tratamento de 74 pacientes com infecção por Mansonella ozzardi. Inicialmente foi realizado a coleta de sangue para o diagnóstico parasitológico utilizando a filtração de sangue em membrana de policarbonato e para análises bioquímicas e hematológicas. Foi realizado a quantificação de microfilárias antes e depois do tratamento seguindo-os até 1 ano. Foi observado uma redução estatisticamente significativa em relação à densidade de microfilárias (&#967;2 de Friedman = 159,00; valor-p < 0, 0001) após 1 ano do uso da medicação, e que não houve alterações laboratoriais e efeitos adversos que comprometessem o uso da ivermectina. Concluiu-se que o fármaco nesta dose é eficaz e seguro, e mantém o \"clearance\" de microfilaremia pelo menos 1 ano após o uso. / Preliminary study of the reduction of microfilaremia in vivo of Mansonella ozzardi (Manson, 1897) with use of ivermectin, using the blood filtration polycarbonate membrane technique, in Labrea, Brazilian Amazon, Brazil. The study focused in the efficacy and tolerability of a single-dose use of ivermectin 0.15 mg / kg body weight in the treatment of 74 patients infected by the filarial worm M. ozzardi. Before and after the parasitological diagnosis by a blood filtration polycarbonate membrane and treatment, anamnesis, clinical examination and blood collection for quantification of microfilariae, biochemical and hematological analysis were done, comparing the outcomes of patients the in first day and after 72 hours and at least following up the patients for 1 year. The study concluded that there was a statistically significant reduction in microfilariaemia density (&#967;2 Friedman = 159, 00; p-value <0, 0001) after 1 year of use of the medication, and that there were no laboratory abnormalities and clinical symptoms that compromised the use of ivermectin. In conclusion, the use of ivermectin is an effective microfilaricide and maintains a suppressive effect for at least 1 year and the adverse reactions are not an obstacle for the treatment.

As infecções humanas com a filaria Mansonella ozzardi ocorrem em focos situados em regiões tropicais e subtropicais da América Central e do Sul e frequentemente coexistem com outras doenças endêmicas tropicais. Na Amazônia brasileira, as infecções são geralmente assintomáticas e a maior parte delas, consequentemente, deixam de ser diagnosticada. As filarioses crônicas, geralmente não tratadas, podem criar um ambiente imunorregulador, caracterizado pela expansão de linfócitos T produtores de IL-10, que mediam a supressão de respostas proliferativas de células T frente a antígenos específicos bem como a antígenos não-relacionados. Neste trabalho, utilizamos marcadores de ativação celular (CD69 e HLA-DR) e de atividade reguladora (CD39, CTLA-4, OX40, GITR, LAG3, PD-1, LAP-TGF-&#946; e TNFRII) para caracterizar populações de células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) em indivíduos infectados por M. ozzardi bem como em controles saudáveis de uma área endêmica deste parasito na Amazônia Brasileira. A análise de PBMCs, por citometria de fluxo multiparamétrica de 49 pacientes infectados por M. ozzardi, mostrou que pacientes e controles apresentam proporções similares de Treg clássicas circulantes, no entanto, indivíduos infectados apresentam um aumento da proporção de células CD4+ e células T reguladoras (Tregs) que expressam a molécula CD39. Células Treg CD39+ parecem definir uma população distinta entre as Treg, pois ao compararmos os marcadores de regulação e ativação entre Tregs CD39+ e CD39- encontramos proporções aumentas destes marcadores nas Treg CD39+. O bloqueio dessa molécula em condições de reestimulo celular aumenta a produção de citocinas inflamatórias e diminui a produção de IL-10 confirmando seu papel regulador. / Human infections with the filarial parasite Mansonella ozzardi are common in areas of tropical and subtropical Central and South America and often coexist with other endemic tropical diseases, such as malaria. In the Amazonian Basin of Brazil, infections are typically asymptomatic; most of them will remain undiagnosed. These chronic, untreated filarial infections are potentially associated with a regulatory immune environment, dominated by IL-10-producing T-cells, which mediate the suppression of T-cell proliferation in response to filarial and non-related antigens. Here, we used markers of cell activation (CD69 and HLA-DR) and regulatory activity (CD39, CTLA-4, OX40, GITR, and TNFRII) to characterize peripheral-blood mononuclear cell (PBMCs) subpopulations in individuals infected with |M. ozzardi and in healthy controls living in an area of M. ozzardi endemicity in the Brazilian Amazon. Multiparameter flow cytometry analysis of PBMCs from 49 malaria patients showed that patients and controls have similar proportions of classic circulating Tregs, however, the proportion of CD4 + cells and Tregs expressing the CD39 (an ectonucleotidase that regulates the balance of immune responses through Phosphohydrolysis of ATP, an inflammatory molecule in adenosine, an anti-inflammatory molecule), is increased in infected patients. CD39+Treg cells seem to define a distinct population among Tregs, compare activation and regulatory markers between CD39+ and CD39- Tregs - we found increased proportions of these markers in the CD39+ Tregs. Blocking this molecule under cellular restimulation conditions increases production of inflammatory cytokines and decreases IL-10 production, improving its regulatory role.

As infecções humanas com a filaria Mansonella ozzardi ocorrem em focos situados em regiões tropicais e subtropicais da América Central e do Sul e frequentemente coexistem com outras doenças endêmicas tropicais. Na Amazônia brasileira, as infecções são geralmente assintomáticas e a maior parte delas, consequentemente, deixam de ser diagnosticada. As filarioses crônicas, geralmente não tratadas, podem criar um ambiente imunorregulador, caracterizado pela expansão de linfócitos T produtores de IL-10, que mediam a supressão de respostas proliferativas de células T frente a antígenos específicos bem como a antígenos não-relacionados. Neste trabalho, utilizamos marcadores de ativação celular (CD69 e HLA-DR) e de atividade reguladora (CD39, CTLA-4, OX40, GITR, LAG3, PD-1, LAP-TGF-&#946; e TNFRII) para caracterizar populações de células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) em indivíduos infectados por M. ozzardi bem como em controles saudáveis de uma área endêmica deste parasito na Amazônia Brasileira. A análise de PBMCs, por citometria de fluxo multiparamétrica de 49 pacientes infectados por M. ozzardi, mostrou que pacientes e controles apresentam proporções similares de Treg clássicas circulantes, no entanto, indivíduos infectados apresentam um aumento da proporção de células CD4+ e células T reguladoras (Tregs) que expressam a molécula CD39. Células Treg CD39+ parecem definir uma população distinta entre as Treg, pois ao compararmos os marcadores de regulação e ativação entre Tregs CD39+ e CD39- encontramos proporções aumentas destes marcadores nas Treg CD39+. O bloqueio dessa molécula em condições de reestimulo celular aumenta a produção de citocinas inflamatórias e diminui a produção de IL-10 confirmando seu papel regulador. / Human infections with the filarial parasite Mansonella ozzardi are common in areas of tropical and subtropical Central and South America and often coexist with other endemic tropical diseases, such as malaria. In the Amazonian Basin of Brazil, infections are typically asymptomatic; most of them will remain undiagnosed. These chronic, untreated filarial infections are potentially associated with a regulatory immune environment, dominated by IL-10-producing T-cells, which mediate the suppression of T-cell proliferation in response to filarial and non-related antigens. Here, we used markers of cell activation (CD69 and HLA-DR) and regulatory activity (CD39, CTLA-4, OX40, GITR, and TNFRII) to characterize peripheral-blood mononuclear cell (PBMCs) subpopulations in individuals infected with |M. ozzardi and in healthy controls living in an area of M. ozzardi endemicity in the Brazilian Amazon. Multiparameter flow cytometry analysis of PBMCs from 49 malaria patients showed that patients and controls have similar proportions of classic circulating Tregs, however, the proportion of CD4 + cells and Tregs expressing the CD39 (an ectonucleotidase that regulates the balance of immune responses through Phosphohydrolysis of ATP, an inflammatory molecule in adenosine, an anti-inflammatory molecule), is increased in infected patients. CD39+Treg cells seem to define a distinct population among Tregs, compare activation and regulatory markers between CD39+ and CD39- Tregs - we found increased proportions of these markers in the CD39+ Tregs. Blocking this molecule under cellular restimulation conditions increases production of inflammatory cytokines and decreases IL-10 production, improving its regulatory role.

Estudo preliminar da redução da microfilaremia in vivo de Mansonella ozzardi (Manson, 1897) com uso de ivermectina, utilizando a técnica de filtração em membrana de policarbonato, Lábrea, Amazonas, Brasil. Estudou-se a eficácia do uso de dose única de ivermectina 0,15 mg/kg de peso no tratamento de 74 pacientes com infecção por Mansonella ozzardi. Inicialmente foi realizado a coleta de sangue para o diagnóstico parasitológico utilizando a filtração de sangue em membrana de policarbonato e para análises bioquímicas e hematológicas. Foi realizado a quantificação de microfilárias antes e depois do tratamento seguindo-os até 1 ano. Foi observado uma redução estatisticamente significativa em relação à densidade de microfilárias (&#967;2 de Friedman = 159,00; valor-p < 0, 0001) após 1 ano do uso da medicação, e que não houve alterações laboratoriais e efeitos adversos que comprometessem o uso da ivermectina. Concluiu-se que o fármaco nesta dose é eficaz e seguro, e mantém o \"clearance\" de microfilaremia pelo menos 1 ano após o uso. / Preliminary study of the reduction of microfilaremia in vivo of Mansonella ozzardi (Manson, 1897) with use of ivermectin, using the blood filtration polycarbonate membrane technique, in Labrea, Brazilian Amazon, Brazil. The study focused in the efficacy and tolerability of a single-dose use of ivermectin 0.15 mg / kg body weight in the treatment of 74 patients infected by the filarial worm M. ozzardi. Before and after the parasitological diagnosis by a blood filtration polycarbonate membrane and treatment, anamnesis, clinical examination and blood collection for quantification of microfilariae, biochemical and hematological analysis were done, comparing the outcomes of patients the in first day and after 72 hours and at least following up the patients for 1 year. The study concluded that there was a statistically significant reduction in microfilariaemia density (&#967;2 Friedman = 159, 00; p-value <0, 0001) after 1 year of use of the medication, and that there were no laboratory abnormalities and clinical symptoms that compromised the use of ivermectin. In conclusion, the use of ivermectin is an effective microfilaricide and maintains a suppressive effect for at least 1 year and the adverse reactions are not an obstacle for the treatment.