Submitted by Programa de Pós-graduação em Biotecnologia (mebiotec.ufba@gmail.com) on 2017-09-12T15:09:05Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Final - Maiana Matos.pdf: 1573589 bytes, checksum: 18d3fa411a57db5da3c97181d134b36f (MD5) / Approved for entry into archive by Edvaldo Souza (edvaldosouza@ufba.br) on 2017-10-02T18:34:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação Final - Maiana Matos.pdf: 1573589 bytes, checksum: 18d3fa411a57db5da3c97181d134b36f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-02T18:34:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Final - Maiana Matos.pdf: 1573589 bytes, checksum: 18d3fa411a57db5da3c97181d134b36f (MD5) / Ministério da Educação / Este estudo in vitro e ex vivo buscou avaliar a eficácia antimicrobiana do Extrato bruto de Aroeira a 50% frente a uma cepa de Enterococcus faecalis (ATCC 29212). Para o estudo in vitro, foi realizado teste de difusão em Ágar para verificar o grupo com maior halo de inibição, o que foi observado no extrato bruto a 50% de Aroeira. Em seguida, para o estudo ex vivo, foram utilizados 40 (quarenta) dentes humanos unirradiculares tratados endodonticamente e fixados em placas de 24 poços. Os espécimes foram aleatoriamente divididos em quatro grupos com 10 (dez) dentes cada, de acordo com a medicação intracanal utilizada: CO - grupo controle; PA - grupo com medicação de Hidróxido de Cálcio PA + anestésico; CA - grupo com medicação Calen PMCC e EA - grupo com medicação de Extrato Bruto 50% de Aroeira. Posteriormente, os espécimes foram contaminados com E. faecalis (ATCC 29212) e incubados a 37°C durante 21 dias. A cada dois dias, houve adição do caldo BHI (Brain Heart Infusion) em cada dente, além da troca de água nos poços, fornecendo assim nutrição e umidade para o crescimento bacteriano. As amostras foram coletadas após 7 (sete) e 15 (quinze) dias com o auxílio de cones de papel estéreis e submetidas à cultura de placas de Petri contendo Ágar BHI. Após 24 horas de incubação, o crescimento bacteriano foi verificado através da contagem das unidades formadoras de colônias (UFC/mL). A análise dos dados mostrou que houve significativa redução dos microorganismos nos grupos PA, CA e EA, se comparado ao controle CO com p <0,0001. Observou-se ainda uma diferença estatística entre o PA e CA, com p< 0.0071, porém não houve diferença estatística entre CA e EA. Portanto, pode-se concluir que o Extrato Bruto de Aroeira a 50% (oitenta por cento) possui eficácia antimicrobiana frente ao Enterococcus faecalis. Sugere-se a realização de estudos clínicos com o extrato pesquisado de modo a fundamentar os efeitos antimicrobianos desta terapia fitoterápica.

O chá verde vem sendo utilizado na prevenção e tratamento de variadas doenças infecciosas e imunoinflamatórias, por apresentar efeitos benéficos decorrentes da presença de Epigalocatequina-3-galato (EGCG). Esta catequina apresenta papel antiinflamatório, anti-oxidante, anti-microbiano e mineralizador e poderia ser utilizado no tratamento da doença periapical. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito uma pasta à base de EGCG utilizada como curativo de demora em lesões periapicais experimentalmente induzidas em cães. Um total de 80 raízes de pré-molares de cão com rizogênese completa e lesões periapicais experimentalmente induzidas, foram aleatoriamente divididos em 4 grupos submetidos à diferentes protocolos de tratamento endodôntico: 1) curativo de demora com pasta à base de EGCG; 2) curativo de demora com EGCG em veículo aquoso; 3) curativo de demora com pasta à base hidróxido de cálcio (Pasta Calen); 4) tratamento endodôntico em sessão única. Para avaliação da resposta tecidual, os dentes foram avaliados radiograficamente e histopatologicamente. As imagens radiográficas obtidas antes e 120 dias após o tratamento, foram fotografadas e digitalizadas para o programa Image J 1.28 para mensuração das áreas (mm&sup2;) radiolúcidas periapicais. Aos 120 dias após a obturação doa canais radiculares os animais foram eutanasiados e os espécimes foram processados histotecnicamente, corados com HE e avaliados com microscopia de luz convencional e de fluorescência (infiltrado inflamatório, espessamento do ligamento periodontal e reabsorção de tecidos mineralizados). Os resultados obtidos foram analisados estatisticamente utilizando os testes quiquadrado, Fisher, Anova e pós teste de Tukey, com nível de significância de 5% em todos os testes. De acordo com os resultados radiográficos, o percentual médio de redução da área radiolúcida (± erro padrão da média) foi semelhante (p>0,05) nos grupos EGCG em veículo aquoso (64,57%; ±7,514); pasta à base de EGCG (59,95%; ±8,023) e pasta à base de hidróxido de cálcio (58,65%; ±6,192). Todos foram superiores ao grupo tratado em sessão única (19,49%; ±2,881) (p<0,01). A análise histopatológica mostrou que os grupos que receberam aplicação de curativo de demora com EGCG ou hidróxido de cálcio, apresentaram reaparação da lesão periapical com semelhança em todos os parâmetros avaliados. Por outro lado, o tratamento em sessão única resultou em manutenção da lesão periapical, com maior espessura do ligamento periodontal (p<0,001), persistência de infiltrado inflamatório moderado ou severo (p<0,01) e presença de reabsorção óssea e cementária (p<0,0001). Foi possível concluir que a pasta à base de EGCG proporcionou o reparo de lesões periapicais, constituindo possível medicação intracanal alternativa / Green tea has been used in the prevention and treatment of various infectious and immunoinflammatory diseases, since it has beneficial effects due to the presence of Epigallocatechin-3-gallate (EGCG). This catequin present anti-inflammatory, antimicrobial, antioxidant and mineralizing role that could be usefull in the treatment of periapical disease. The aim of the present study was to evaluate the effect of the intracanal dressing with an EGCG paste-based im periapical lesions experimentaly induced in dogs. A total of 80 dog premolar roots with complete rhizogenesis and experimentally induced periapical lesions were randomly divided into 4 groups submitted to different endodontic treatment protocols:1) intracanal dressing with EGCG based paste; 2) intracanal dressing with EGCG in aqueous vehicle; 3) intracanal dressing with based paste on calcium hydroxide (Calen paste); 4) single session endodontic treatment. To evaluate the tissue response, the teeth were evaluated radiographically and histopathologically. Radiographic images are selected before 120 days after treatment, were photographed and scanned for the program Image J 1.28 for the measurement of periapical radiolucent areas (mm2). To 120 days after the root canal filling animals were euthanasied and the specimens processed, stained in the rotin HE and evaluated under conventional and fluorescence microscopy (inflammatory infiltrate, periodontal ligament space and mineralized tissue resorption). The results were compared statistically using chisquare, Fisher, Anova and Tukey post-test, with a significance level of 5% in all tests. According to the radiographic results, the mean percentage reduction of the radiolucent area (standard pattern of the mean) was similar (p> 0.05) in the EGCG groups in aqueous vehicle (64.57%; ± 7.514); EGCG based paste (59.95%, ± 8.023) and calcium hydroxide based paste (58.65%, ± 6.192). All groups were higher for the group treated in single session (19.49%, ± 2.881) (p <0.01). The histopathological analysis showed that the groups that received the prescription of intracanal dressings with EGCG or calcium hydroxide, resulted in periapical lesion repair and were similar in all the evaluated parameters. However, treatment in single session did not repair the periapical lesion resulting in greatest measure of the periodontal ligament (p <0.001), persistence of moderate or severe inflammatory infiltrate (p <0.01) and presence of bone and cementum resorption (p <0.0001). It is possible to conclude that EGCG paste-based allows the periapical lesions repair, constituting possible alternative intracanal medication

O objetivo foi avaliar através da Microscopia Confocal de Varredura a Laser (MCVL) e cultura microbiológica (CM) a influência do veículo propilenoglicol e água destilada e agitação ultrassônica (U) na atividade antimicrobiana e penetrabilidade de pastas de hidróxido de cálcio (HC), em diferentes tempos de manutenção da medicação intra-canal. Para isso cento e noventa e três tubos de dentina bovina padronizados foram infectados com Enterococcus faecalis em caldo BHI (Brain Heart Infusion) utilizando um novo protocolo de contaminação com dois ciclos de centrifugação por 5 dias. Durante o período experimental os espécimes foram divididos em 8 grupos de acordo com o veículo da pasta de HC, água destilada (Ad) e propilenoglicol (prop), com o uso do ultrassom, e tempo experimental e de 7 e 15 dias: Grupo1- HC+pro+15d, Grupo 2 HC+prop+U+15d, Grupo3 HC+prop+7d, Grupo 4 HC+prop+U+7d Grupo5- HC+Ad+15d, Grupo 6 HC+Ad+U+15d, Grupo7 HC+Ad+7d, Grupo8 HC+Ad+U+7d . A agitação ultrassônica foi realizada durante 1 minuto nas direções vestíbulo-lingual e mésio-distal, com o auxílio de um inserto liso. As medicações permaneceram no interior dos espécimes durante cada período experimental. A MCVL analisou as bactérias viáveis (verde) e mortas (vermelho), com o auxílio do corante Live and Dead® nos tubos de dentina após o período de medicação. A contagem de Unidades Formadoras de Colônia (UFCs) foi realizada a partir da cultura microbiológica (CM). As raspas de dentina foram coletadas e diluídas para semeadura em placas de Petri com ágar BHI. Para a penetração foi utilizado o corante Rodamina B durante a manipulação das pastas de HC e as análises feitas por MCVL. O grupo 3 e 7 mostraram a maior viabilidade bacteriana nos tubos de dentina contaminados e os demais grupos as menores. A agitação ultrassônica (U) reduziu significativamente a viabilidade bacteriana, nos diferentes períodos. A pasta de HC + Prop+U 7 e 15 dias, mostraram-se mais eficazes, seguidas pela pasta HC+Ad+U+15. Concluiu-se que todas as pastas demonstraram ação antimicrobiana contra E. faecalis e com melhor desempenho quando potencializadas com ultrassom, mesmo em períodos de 7 dias, podendo ser de escolha clínica um curativo que permaneça menor tempo no interior do canal com a mesma efetividade, otimizando o tratamento endodôntico. / The purpose was to evaluate using Confocal Laser Scanning Microscopy (CLSM) and microbiological cultures (MC) of infected dentin the influence of veicol propylene glycol (prop) or distilled water (Ad) and ultrasonic agitation (U) on the antimicrobial potential and penetrability of calcium hydroxide (CH) pastes). one hundred ninetythree cylindrical dentin specimens were infected with Enterococcus faecalis in BHI broth using a new contamination protocol for 5 days with centrifugations. During the experimental period, the specimens were divided into 8 groups and dressed with the following during 7 or 15 days: Group1- HC+pro+15d, Group 2 HC+prop+U+15d, Group 3 HC+prop+7d, Group 4 HC+prop+U+7d Group 5- HC+Ad+15d, Group 6 HC+Ad+U+15d, Group 7 HC+Ad+7d, Group 8 HC+Ad+U+7d. The ultrasonic activation was made during 1 minute in both directions (buccal-lingual / mesio-distal), with the aid of a plain point insertion. The medications remained in the root canals for each experimental period. The CLSM analyzed the viable (green) and dead (red)bacteria in the infected dentinal tubules, with Live and Dead dye. The colony forming units (CFUs) count was made possible with the MC method. The dentinal wall debris were collected and diluted to be seeded on Petri BHI-agar plates. For the penetration test, the dye Rodamine B was added to CH pastes during the manipulation and analysed by CLSM. The groups 3 and 7 showed the greatest bacteria viability in the infected dentinal tubes and the other groups the lowest,. The pastes HC + Prop+U 7 and 15 days performed more efficacy, followed by HC+Ad+U+15d paste . We conclude that all the paste tested demostrated antimicrobial activity against E. faecalis from calcium hydroxide paste with propylene glycol and distilled water when leveraged with ultrasound, even in periods of seven days. Therefore, a dressing that remains less time inside the root canal with the same effectiveness can be the choice in clinical practice, optimizing the endodontic treatment.

Made available in DSpace on 2017-07-24T19:22:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Daniel Rodrigo Herrera Morante.pdf: 1673034 bytes, checksum: f8b0c769f1ac31b1801d00664c171a8e (MD5) Previous issue date: 2010-03-12 / The aim of this in vitro study was to evaluate antimicrobial activity of four auxiliary substances against Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus and Candida albicans, commonly isolated microorganisms in endodontic failure cases, on which was tested: 2% chlorhexidine gel (CHX), 2% Uncaria tomentosa gel (UG), 2% CHX gel and UG in equal parts (1:1) (CHX + UG) and Natrosol (NAT). Firstly, the agar diffusion method was used; the inhibition halos were measured and significance was determined using ANOVA and Tukey`s test (p <0.05). The more effective auxiliary substance against E. faecalis and C. albicans was CHX + UG, followed by CHX and UG. Against S. aureus, CHX+UG had a similar effect to that shown by CHX and UG.The NAT group had not effect against any microorganism. Secondly was evaluating antimicrobial activity of auxiliary substances in infected dentin. It was used a total of 120 pre-molars, which were divided for each organism into 4 groups (n = 10). Microbiological samples were collected before the chemomechanical preparation (PQM) (S1), after PQM (S2) and after 7 days of intracanal medication (MIC) for each group (S3). The count of colony forming units (CFU/mL) was statistically analyzed by Kruskal-Wallis and Mann-Whitney test (p <0.05). In S2, all groups showed a significant reduction of CFU/mL compared with S1 In groups CHX, CHX+UG and UG there was no CFU/mL. In S3, specimens contaminated with E. faecalis of the CHX and NAT groups had significantly higher microbial load compared with S2, but CHX+UG group kept the value obtained in S2, similar to that obtained by UG group. Specimens contaminated with S. aureus and C. albicans of the CHX, CHX+UG and UG groups remained the negative values of S2. With results obtained it was concluded, that the association CHX+UG has the ability to inhibit microbial growth of E. faecalis and C. albicans higher than shown by CHX and UG. Against S. aureus, CHX and UG had a similar effect. It was also found that CHX, CHX+UG and UG were effective in disinfecting the canal after PQM, but only after 7 days the groups that received CHX+UG and UG as MIC, remained root canals free of CFU of E. faecalis. Thus, UG alone or in combination with CHX, was effective in disinfecting root canals. / O objetivo deste estudo foi avaliar, por meio de testes in vitro, o potencial antimicrobiano de quatro substâncias auxiliares sobre microrganismos comumente isolados nos casos de insucesso do tratamento endodôntico, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus e Candida albicans; Foram testados: gel de digluconato clorexidina a 2% (CHX), gel de Uncaria tomentosa a 2% (UG), gel de CHX e UG a 2% em partes iguais (1:1) (CHX+UG) e Natrosol (NAT). Primeiramente foi utilizado o método de difusão em ágar. Os valores coletados pela mensuração dos halos de inibição foram analisados estatisticamente com ANOVA de um critério e o teste de Tukey (p<0,05). A substância auxiliar que mostrou-se mais efetiva sobre E. faecalis e C. albicans foi CHX+UG , seguida da CHX e UG. Frente a S. aureus, CHX+UG apresentou um efeito semelhante ao mostrado pela CHX e UG. O Grupo NAT não mostrou capacidade de inibição sobre nenhum dos microrganismos. A segunda parte do estudo visou avaliar a capacidade antimicrobiana das sustâncias auxiliares em dentina contaminada. Foi utilizado um total de 120 pré-molares inferiores distribuídos em 4 grupos para cada microrganismo (n=10). Foram feitas coletas microbiológicas antes do preparo químico-mecânico (PQM) (S1), após PQM (S2), e após 7 dias com medicação intracanal (MIC) (S3). A contagem das unidades formadoras de colônia (UFC/mL) foi analisada estatisticamente pelo teste de Kruskal-Wallis e teste de Mann-Whitney (p<0,05). Em (S2), todos os grupos apresentaram uma redução significativa de UFC/mL em comparação com S1. Nos grupos CHX, UG e CHX+UG não houve a presença de UFC/mL; para S3, os espécimes contaminados com E. faecalis dos grupos CHX e NAT apresentaram carga microbiana significativamente maior à apresentada em S2; porém o grupo CHX+UG manteve o valor obtido em S2, valor que foi semelhante ao obtido pelo grupo UG. Os espécimes contaminados com S. aureus e C. albicans dos grupos CHX, UG e CHX+UG mantiveram os valores negativos de S2, assim não apresentaram UFC/mL. Concluiu-se que a associação CHX+UG apresenta capacidade de inibição do crescimento microbiano sobre E. faecalis e C. albicans superior ao mostrado por CHX e UG. Frente a S. aureus, CHX e UG apresentaram efeito semelhante. Concluiu-se também que CHX, UG e CHX+UG foram eficazes na desinfecção do canal após PQM, porém após 7 dias só os grupos que receberam CHX+UG e UG como MIC, mantiveram os canais livres de UFC de E. faecalis. Assim, UG só ou em associação com CHX, se mostrou eficaz na desinfecção de canais radiculares.

O objetivo foi avaliar através da Microscopia Confocal de Varredura a Laser (MCVL) e cultura microbiológica (CM) a influência do veículo propilenoglicol e água destilada e agitação ultrassônica (U) na atividade antimicrobiana e penetrabilidade de pastas de hidróxido de cálcio (HC), em diferentes tempos de manutenção da medicação intra-canal. Para isso cento e noventa e três tubos de dentina bovina padronizados foram infectados com Enterococcus faecalis em caldo BHI (Brain Heart Infusion) utilizando um novo protocolo de contaminação com dois ciclos de centrifugação por 5 dias. Durante o período experimental os espécimes foram divididos em 8 grupos de acordo com o veículo da pasta de HC, água destilada (Ad) e propilenoglicol (prop), com o uso do ultrassom, e tempo experimental e de 7 e 15 dias: Grupo1- HC+pro+15d, Grupo 2 HC+prop+U+15d, Grupo3 HC+prop+7d, Grupo 4 HC+prop+U+7d Grupo5- HC+Ad+15d, Grupo 6 HC+Ad+U+15d, Grupo7 HC+Ad+7d, Grupo8 HC+Ad+U+7d . A agitação ultrassônica foi realizada durante 1 minuto nas direções vestíbulo-lingual e mésio-distal, com o auxílio de um inserto liso. As medicações permaneceram no interior dos espécimes durante cada período experimental. A MCVL analisou as bactérias viáveis (verde) e mortas (vermelho), com o auxílio do corante Live and Dead® nos tubos de dentina após o período de medicação. A contagem de Unidades Formadoras de Colônia (UFCs) foi realizada a partir da cultura microbiológica (CM). As raspas de dentina foram coletadas e diluídas para semeadura em placas de Petri com ágar BHI. Para a penetração foi utilizado o corante Rodamina B durante a manipulação das pastas de HC e as análises feitas por MCVL. O grupo 3 e 7 mostraram a maior viabilidade bacteriana nos tubos de dentina contaminados e os demais grupos as menores. A agitação ultrassônica (U) reduziu significativamente a viabilidade bacteriana, nos diferentes períodos. A pasta de HC + Prop+U 7 e 15 dias, mostraram-se mais eficazes, seguidas pela pasta HC+Ad+U+15. Concluiu-se que todas as pastas demonstraram ação antimicrobiana contra E. faecalis e com melhor desempenho quando potencializadas com ultrassom, mesmo em períodos de 7 dias, podendo ser de escolha clínica um curativo que permaneça menor tempo no interior do canal com a mesma efetividade, otimizando o tratamento endodôntico. / The purpose was to evaluate using Confocal Laser Scanning Microscopy (CLSM) and microbiological cultures (MC) of infected dentin the influence of veicol propylene glycol (prop) or distilled water (Ad) and ultrasonic agitation (U) on the antimicrobial potential and penetrability of calcium hydroxide (CH) pastes). one hundred ninetythree cylindrical dentin specimens were infected with Enterococcus faecalis in BHI broth using a new contamination protocol for 5 days with centrifugations. During the experimental period, the specimens were divided into 8 groups and dressed with the following during 7 or 15 days: Group1- HC+pro+15d, Group 2 HC+prop+U+15d, Group 3 HC+prop+7d, Group 4 HC+prop+U+7d Group 5- HC+Ad+15d, Group 6 HC+Ad+U+15d, Group 7 HC+Ad+7d, Group 8 HC+Ad+U+7d. The ultrasonic activation was made during 1 minute in both directions (buccal-lingual / mesio-distal), with the aid of a plain point insertion. The medications remained in the root canals for each experimental period. The CLSM analyzed the viable (green) and dead (red)bacteria in the infected dentinal tubules, with Live and Dead dye. The colony forming units (CFUs) count was made possible with the MC method. The dentinal wall debris were collected and diluted to be seeded on Petri BHI-agar plates. For the penetration test, the dye Rodamine B was added to CH pastes during the manipulation and analysed by CLSM. The groups 3 and 7 showed the greatest bacteria viability in the infected dentinal tubes and the other groups the lowest,. The pastes HC + Prop+U 7 and 15 days performed more efficacy, followed by HC+Ad+U+15d paste . We conclude that all the paste tested demostrated antimicrobial activity against E. faecalis from calcium hydroxide paste with propylene glycol and distilled water when leveraged with ultrasound, even in periods of seven days. Therefore, a dressing that remains less time inside the root canal with the same effectiveness can be the choice in clinical practice, optimizing the endodontic treatment.

O sucesso da terapia endodôntica depende da limpeza, anti-sepsia, escultura e obturação hermética dos canais radiculares, no entanto, o preparo biomecânico não gera redução microbiana suficiente na totalidade dos casos. Devido à inconfiabilidade inerente ao tratamento, parte dos casos ainda resulta em insucesso. As pastas de hidróxido de cálcio vêm sendo empregadas com a finalidade de ampliar a eficiência anti-séptica do tratamento dos canais radiculares além de estimular a recuperação dos tecidos afetados pela infecção endodôntica. O digluconato de clorexidina tem sido empregado na endodontia devido ao amplo espectro de ação principalmente contra \"Enterococcus faecalis\" e \"Candida albicans\" e vem sendo adicionado às pastas de hidróxido de cálcio uma vez que as virtudes de um complementam as deficiências do outro. No entanto, devido à estrutura molecular da clorexidina e aos níveis elevados de pH promovidos pelo hidróxido de cálcio, há indícios de risco sistêmico na sua utilização por causa da provável decomposição da clorexidina em radicais livres e para-cloroanilina que está classificada como possível agente carcinogênico em humanos pela IARC. O presente estudo teve como objetivo investigar quimicamente, por meio da Espectrometria de Massas (ESI-TOF-MS) e Cromatografia Líquida (HPLC), a solução de digluconato de clorexidina a 0,2% isolada ou misturada ao hidróxido de cálcio. As análises foram realizadas logo em seguida ao preparo das amostras e após os períodos de 7 e 14 dias de armazenamento à temperatura de 36,5 ºC. Constatou-se que a solução de digluconato de clorexidina isolada foi decomposta em diferentes subprodutos, inclusive em para-cloroanilina oferecendo riscos sistêmicos. Em contato com o hidróxido de cálcio, a decomposição da clorexidina é total com formação de diferentes compostos. Apesar de não ter sido demonstrada a presença de para-cloroanilina na pasta medicamentosa, o elevado número de espécies reativas possui alto potencial de dano sobre o material genético das células do paciente afetadas pela medicação intracanal. É imperativo estabelecer vínculos diagnóstico-terapêuticos precisos por meio do desenvolvimento de protocolos clínicos que restrinjam o uso dessas medicações intracanais a quadros clínicos com infecção endodôntica disseminada e periodontites apicais persistentes. É necessário desenvolver estratégias mais eficientes que utilizem processos biomecânicos de maior eficácia e medicações intracanais efetivas que não ofereçam riscos locais e sistêmicos para que se contemplem os objetivos do tratamento dos canais radiculares com previsibilidade e segurança. / The success of endodontic therapy depends upon root canal cleanliness, antisepsis, sculpture, and hermetic obturation. However, biomechanical preparation does not always provide an adequate microbial reduction. Due to the inherent unreliability of the treatment, some cases still are unsuccessful. Calcium hydroxide pastes have been used with the aim to improve antisepsis effectiveness in root canal treatments, in addition to stimulating the recovery of tissues affected by endodontic infection. Chlorhexidine digluconate has been used in endodontics due to its broad action spectrum, mainly against \"Enterococcus faecalis\" and \"Candida albicans\", and has been added to calcium hydroxide pastes so that the advantages of one would compensate for the other\'s deficiencies. However, the structure of the chlorhexidine molecule in addition to the high pH values promoted by calcium hydroxide pose a systemic risk in its use due to the likely decomposition of chlorhexidine into free radicals and para-chloroaniline, which International Agency for Research on Cancer (IARC) has classified as a possible carcinogenic agents in humans. The purpose of the present study was to perform a chemical analysis of chlorhexidine digluconate at 0.2%, isolated or mixed to calcium hydroxide, using Mass Spectrometry and High- Efficiency Liquid Chromatography. The analyses were performed shortly after the samples were prepared, and after 7 and 14 days of storage at 36.5 ºC. It was found that the isolated chlorhexidine digluconate solution formed different byproducts, including para-chloroaniline, posing systemic risks. In contact with calcium hydroxide, chlorhexidine decomposes completely and forms different compounds. Though the study did not demonstrate the presence of para-chloroaniline in the medication paste, the high number of reactive species poses a high risk over the genetic material of the host cells affected by intracanal medication. It is mandatory to establish a precise diagnostic-therapeutic relation by developing clinical protocols that would restrict the use of these intracanal medications to clinical conditions with disseminated endodontic infection and persistent apical periodontitis. There is a need for more efficient strategies that use more effective biomechanical processes and intracanal medications that do not offer any local or systemic risk so root canal treatment goals can be considered with predictability and safety.

O uso de diferentes tipos de medicação intracanal para o controle do processo infeccioso, principalmente nos casos em que há presença de microrganismos resistentes às manobras de desinfecção, tem sido alvo de muitas pesquisas. A proposta deste estudo foi avaliar, in vitro, o efeito antimicrobiano de bacteriófagos específicos diante de cinco cepas de Enterococcus faecalis e a ação de um lisado híbrido polivalente na eliminação da infecção causada por essas cinco cepas da mesma espécie. Foram utilizados 37 dentes unirradiculares humanos, recentemente extraídos e de proporções aproximadas. As coroas foram removidas e os canais instrumentados até a lima tipo K de número 45. Os espécimes foram, então, esterilizados e utilizados em dois experimentos distintos. O primeiro experimento utilizou 25 raízes divididas em cinco grupos de cinco espécimes. Três espécimes de cada grupo foram inoculados com uma das culturas bacterianas e seus fagos correspondentes na proporção 1:1, por um período de três horas a 37 °C, enquanto os outros dois, receberam a cultura de microrganismos ou somente meio de cultura (controle positivo e negativo, respectivamente). No segundo experimento, 11 espécimes receberam um inóculo formado pelas cinco cepas por um período de 10 dias de incubação a 37 °C, com o propósito de manter condições apropriadas para a penetração das bactérias no interior dos túbulos dentinários, e um outro espécime recebeu apenas meio de cultura (controle negativo). Essa penetração foi confirmada empregando-se microscopia ótica e eletrônica realizada em dois espécimes. Após o período de incubação, o lisado polivalente, preparado com os cinco fagos, foi aplicado por 24 horas a 37 °C em 8 espécimes, e os demais preenchidos com meio de cultura (controle positivo e negativo). Alíquotas do interior de todos os canais foram colhidas antes e depois do contato com os fagos e no segundo experimento, também 24 e 48 horas depois, para semeadura e contagem de unidades formadoras de colônia. Os resultados do primeiro experimento mostraram 100% de redução do crescimento bacteriano nos espécimes que receberam a suspensão de fagos específicos, em comparação a seus respectivos controles positivos, em todos os grupos. No segundo experimento, foi comparado o crescimento obtido após os 10 dias de infecção com aquele posterior a aplicação dos fagos, redução que variou entre 50% e 100%. Diante desses resultados, conclui-se que os bacteriófagos foram eficazes na diminuição dos microrganismos presentes no interior de canais radiculares e nos túbulos dentinários de dentes humanos. / Many studies have investigated different intracanal medications to control infection processes, especially in cases of microbial resistance to disinfection procedures. The purpose of this study was to evaluate the in vitro antimicrobial effect of specific bacteriophages on five isolates of Enterococcus faecalis, as well as the activity of a lysate cocktail in eliminating the infection caused by these bacteria. Thirty-seven recently extracted human teeth of approximately equal size and with single roots were used. The crowns were removed and each canal was prepared using K files,up to # 45, and sterile physiological saline. Specimens were then sterilized and used in two separate studies. The first study utilized 25 individual roots divided into five groups of five specimens each. Three specimens of each group were inoculated with one of the bacterial cultures and the corresponding bacteriophage in a proportion of 1:1, and incubated for three hours at 37°C; the other two specimens were inoculated with only the bacterial culture or only the culture medium (positive and negative controls, respectively). In the second study, 11 specimens were inoculated with all five strains and incubated for ten days at 37°C in order to allow bacteria to penetrate the interior of the dental tubules, and another one, received just the culture medium (negative control). Penetration into the tubules was confirmed by optical and electron microscopy of two specimens. Following incubation, the lysate cocktail prepared using all five bacteriophages was applied to the other 8 specimens for 24 hours at 37°C, and 2 specimens were filled with the culture medium (positive and negative controls). In the first study, samples were taken from the lumen of all canals before and after contact with bacteriophages; in the second, aliquots were also taken 24 and 48 hours after the bacteria were exposed to the phages. All samples were diluted and plated and the number of colony forming units was counted. In the first study, there was a 100% reduction in bacterial growth in specimens that received the specific bacteriophage suspension compared to the positive controls within each group. In the second study, after ten days the number of bacteria was reduced by 50% to 100% following the bacteriophage application. These results suggest that bacteriophages are effective in reducing the number of bacteria inside the root canal and in the dental tubules of human teeth.

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Host defense peptides (HDPs) have a therapeutic potential because of its characteristics as broad spectrum antimicrobial activity, immunomodulatory capacity and repair induction. The present study aimed to demonstrate HDPs HHC-10, LL-37 and synoeca-MP activities compared to the commonly used chemical agents Ca(OH)2, NaOCl and chlorhexidine (CHX) in in vitro and in vivo environments. In vitro analysis involved (1) antimicrobial assays for MIC/MBC/MFC determination, antibiofilm and synergistic activities (against Candida albicans, Enterococcus faecalis and Staphylococcus aureus), (2) hemolytic assay and determination of therapeutic index, (3) immunomodulation assays (from RAW 264.7 monocytes) and (4) osteoclastogenesis assays (from mouse bone marrow cells). In vivo assays were based on periradicular lesions induced and treated in rats with subsequent analysis by radiographic, tomographic and histological examinations. Results demonstrated effective antimicrobial activity of HHC-10 (except antibiofilm activity) and synoeca-MP besides NaOCl and CHX. Higher therapeutic index was observed for peptides (HHC-10 and synoeca-MP) with low or no hemolytic activity. Synergism analysis demonstrated better interaction between synoeca-MP and CHX. Immune assays from monocyte cultures demonstrated a pro-inflammatory activity of LL-37 and synoeca-MP and a pro- and anti-inflammatory effect of HHC-10 and Ca(OH)2. However, none of the agents tested reduced osteoclastogenesis in vitro. In in vivo endodontic treatment conditions, HHC-10, synoeca-MP and Ca(OH)2 significantly reduced periapical lesions, although only peptides were able to reduce inflammation in histological analysis. Therefore, HHC-10 and synoeca-MP demonstrated in vitro and in vivo potential for application in endodontic therapy. However, further researches are needed regarding the mechanism of action of HDPs and the possible therapeutic formulations for future analysis in animal models. / O insucesso da terapia endodôntica está baseado na persistência de microrganismos principalmente no interior do sistema de canais radiculares, perpetuando as patologias perirradiculares associadas à tal infecção. A necessidade de reintervenção endodôntica reduz o percentual de sucesso e, portanto, o surgimento de novas terapias é necessário. Dessa forma, peptídeos de defesa do hospedeiro (PDHs) possuem potencial terapêutico associado às suas características de atividade antimicrobiana de amplo espectro, capacidade imunomodulatória e indução de reparo. O presente estudo objetivou demonstrar a atividade dos PDHs HHC-10, LL-37 e synoeca-MP comparado aos agentes químicos comumente utilizados Ca(OH)2, NaOCl e clorexidina (CHX) em ambientes in vitro e in vivo. Para tanto, foram realizadas análises in vitro envolvendo: (1) ensaios antimicrobianos com determinação de MIC/MBC/MFC, atividade antibiofilme e atividade sinérgica (contra Candida albicans, Enterococcus faecalis e Staphylococcus aureus), (2) ensaio hemolítico e determinação do índice terapêutico, (3) ensaios de imunomodulação (a partir de monócitos RAW 264.7) e (4) ensaios osteoclastogênese (a partir de células da medula óssea de camundongos). Os ensaios in vivo foram conduzidos a partir das lesões perirradiculares induzidas e tratadas em ratos com subsequente análise por exames radiográficos, tomográficos e histológicos. Assim, os resultados demonstraram efetiva atividade antimicrobiana dos peptídeos HHC-10 (exceto atividade antibiofilme) e synoeca-MP além do NaOCl e CHX. Observou-se maiores índices terapêuticos para os peptídeos (HHC-10 e synoeca-MP) com baixa ou nenhuma atividade hemolítica. As análises de interação demonstraram combinação sinérgica necessitando de menor concentração a partir da interação entre synoeca-MP e CHX. A partir da cultura de monócitos, observou-se uma atividade pró-inflamatória a partir dos peptídeos LL-37 e synoeca-MP e um efeito pró- e anti-inflamatório do peptídeo HHC-10 e do Ca(OH)2. No entanto, nenhum dos agentes testados reduziram a osteoclastogênese in vitro. Já em condições de tratamento endodôntico in vivo, os PDHs HHC-10, synoeca-MP e o Ca(OH)2 reduziram significativamente lesões periapicais, apesar de somente os peptídeos serem capazes de reduzir inflamação em análises histológicas. Portanto, os peptídeos HHC-10 e synoeca-MP demonstraram potencial in vitro e in vivo para aplicação na terapia endodôntica. No entanto, faz-se necessário maiores investigações sobre o mecanismo de ação dos mesmos e possíveis formulações terapêuticas para futuros testes em modelos animais.

O sucesso da terapia endodôntica depende da limpeza, anti-sepsia, escultura e obturação hermética dos canais radiculares, no entanto, o preparo biomecânico não gera redução microbiana suficiente na totalidade dos casos. Devido à inconfiabilidade inerente ao tratamento, parte dos casos ainda resulta em insucesso. As pastas de hidróxido de cálcio vêm sendo empregadas com a finalidade de ampliar a eficiência anti-séptica do tratamento dos canais radiculares além de estimular a recuperação dos tecidos afetados pela infecção endodôntica. O digluconato de clorexidina tem sido empregado na endodontia devido ao amplo espectro de ação principalmente contra \"Enterococcus faecalis\" e \"Candida albicans\" e vem sendo adicionado às pastas de hidróxido de cálcio uma vez que as virtudes de um complementam as deficiências do outro. No entanto, devido à estrutura molecular da clorexidina e aos níveis elevados de pH promovidos pelo hidróxido de cálcio, há indícios de risco sistêmico na sua utilização por causa da provável decomposição da clorexidina em radicais livres e para-cloroanilina que está classificada como possível agente carcinogênico em humanos pela IARC. O presente estudo teve como objetivo investigar quimicamente, por meio da Espectrometria de Massas (ESI-TOF-MS) e Cromatografia Líquida (HPLC), a solução de digluconato de clorexidina a 0,2% isolada ou misturada ao hidróxido de cálcio. As análises foram realizadas logo em seguida ao preparo das amostras e após os períodos de 7 e 14 dias de armazenamento à temperatura de 36,5 ºC. Constatou-se que a solução de digluconato de clorexidina isolada foi decomposta em diferentes subprodutos, inclusive em para-cloroanilina oferecendo riscos sistêmicos. Em contato com o hidróxido de cálcio, a decomposição da clorexidina é total com formação de diferentes compostos. Apesar de não ter sido demonstrada a presença de para-cloroanilina na pasta medicamentosa, o elevado número de espécies reativas possui alto potencial de dano sobre o material genético das células do paciente afetadas pela medicação intracanal. É imperativo estabelecer vínculos diagnóstico-terapêuticos precisos por meio do desenvolvimento de protocolos clínicos que restrinjam o uso dessas medicações intracanais a quadros clínicos com infecção endodôntica disseminada e periodontites apicais persistentes. É necessário desenvolver estratégias mais eficientes que utilizem processos biomecânicos de maior eficácia e medicações intracanais efetivas que não ofereçam riscos locais e sistêmicos para que se contemplem os objetivos do tratamento dos canais radiculares com previsibilidade e segurança. / The success of endodontic therapy depends upon root canal cleanliness, antisepsis, sculpture, and hermetic obturation. However, biomechanical preparation does not always provide an adequate microbial reduction. Due to the inherent unreliability of the treatment, some cases still are unsuccessful. Calcium hydroxide pastes have been used with the aim to improve antisepsis effectiveness in root canal treatments, in addition to stimulating the recovery of tissues affected by endodontic infection. Chlorhexidine digluconate has been used in endodontics due to its broad action spectrum, mainly against \"Enterococcus faecalis\" and \"Candida albicans\", and has been added to calcium hydroxide pastes so that the advantages of one would compensate for the other\'s deficiencies. However, the structure of the chlorhexidine molecule in addition to the high pH values promoted by calcium hydroxide pose a systemic risk in its use due to the likely decomposition of chlorhexidine into free radicals and para-chloroaniline, which International Agency for Research on Cancer (IARC) has classified as a possible carcinogenic agents in humans. The purpose of the present study was to perform a chemical analysis of chlorhexidine digluconate at 0.2%, isolated or mixed to calcium hydroxide, using Mass Spectrometry and High- Efficiency Liquid Chromatography. The analyses were performed shortly after the samples were prepared, and after 7 and 14 days of storage at 36.5 ºC. It was found that the isolated chlorhexidine digluconate solution formed different byproducts, including para-chloroaniline, posing systemic risks. In contact with calcium hydroxide, chlorhexidine decomposes completely and forms different compounds. Though the study did not demonstrate the presence of para-chloroaniline in the medication paste, the high number of reactive species poses a high risk over the genetic material of the host cells affected by intracanal medication. It is mandatory to establish a precise diagnostic-therapeutic relation by developing clinical protocols that would restrict the use of these intracanal medications to clinical conditions with disseminated endodontic infection and persistent apical periodontitis. There is a need for more efficient strategies that use more effective biomechanical processes and intracanal medications that do not offer any local or systemic risk so root canal treatment goals can be considered with predictability and safety.

O uso de diferentes tipos de medicação intracanal para o controle do processo infeccioso, principalmente nos casos em que há presença de microrganismos resistentes às manobras de desinfecção, tem sido alvo de muitas pesquisas. A proposta deste estudo foi avaliar, in vitro, o efeito antimicrobiano de bacteriófagos específicos diante de cinco cepas de Enterococcus faecalis e a ação de um lisado híbrido polivalente na eliminação da infecção causada por essas cinco cepas da mesma espécie. Foram utilizados 37 dentes unirradiculares humanos, recentemente extraídos e de proporções aproximadas. As coroas foram removidas e os canais instrumentados até a lima tipo K de número 45. Os espécimes foram, então, esterilizados e utilizados em dois experimentos distintos. O primeiro experimento utilizou 25 raízes divididas em cinco grupos de cinco espécimes. Três espécimes de cada grupo foram inoculados com uma das culturas bacterianas e seus fagos correspondentes na proporção 1:1, por um período de três horas a 37 °C, enquanto os outros dois, receberam a cultura de microrganismos ou somente meio de cultura (controle positivo e negativo, respectivamente). No segundo experimento, 11 espécimes receberam um inóculo formado pelas cinco cepas por um período de 10 dias de incubação a 37 °C, com o propósito de manter condições apropriadas para a penetração das bactérias no interior dos túbulos dentinários, e um outro espécime recebeu apenas meio de cultura (controle negativo). Essa penetração foi confirmada empregando-se microscopia ótica e eletrônica realizada em dois espécimes. Após o período de incubação, o lisado polivalente, preparado com os cinco fagos, foi aplicado por 24 horas a 37 °C em 8 espécimes, e os demais preenchidos com meio de cultura (controle positivo e negativo). Alíquotas do interior de todos os canais foram colhidas antes e depois do contato com os fagos e no segundo experimento, também 24 e 48 horas depois, para semeadura e contagem de unidades formadoras de colônia. Os resultados do primeiro experimento mostraram 100% de redução do crescimento bacteriano nos espécimes que receberam a suspensão de fagos específicos, em comparação a seus respectivos controles positivos, em todos os grupos. No segundo experimento, foi comparado o crescimento obtido após os 10 dias de infecção com aquele posterior a aplicação dos fagos, redução que variou entre 50% e 100%. Diante desses resultados, conclui-se que os bacteriófagos foram eficazes na diminuição dos microrganismos presentes no interior de canais radiculares e nos túbulos dentinários de dentes humanos. / Many studies have investigated different intracanal medications to control infection processes, especially in cases of microbial resistance to disinfection procedures. The purpose of this study was to evaluate the in vitro antimicrobial effect of specific bacteriophages on five isolates of Enterococcus faecalis, as well as the activity of a lysate cocktail in eliminating the infection caused by these bacteria. Thirty-seven recently extracted human teeth of approximately equal size and with single roots were used. The crowns were removed and each canal was prepared using K files,up to # 45, and sterile physiological saline. Specimens were then sterilized and used in two separate studies. The first study utilized 25 individual roots divided into five groups of five specimens each. Three specimens of each group were inoculated with one of the bacterial cultures and the corresponding bacteriophage in a proportion of 1:1, and incubated for three hours at 37°C; the other two specimens were inoculated with only the bacterial culture or only the culture medium (positive and negative controls, respectively). In the second study, 11 specimens were inoculated with all five strains and incubated for ten days at 37°C in order to allow bacteria to penetrate the interior of the dental tubules, and another one, received just the culture medium (negative control). Penetration into the tubules was confirmed by optical and electron microscopy of two specimens. Following incubation, the lysate cocktail prepared using all five bacteriophages was applied to the other 8 specimens for 24 hours at 37°C, and 2 specimens were filled with the culture medium (positive and negative controls). In the first study, samples were taken from the lumen of all canals before and after contact with bacteriophages; in the second, aliquots were also taken 24 and 48 hours after the bacteria were exposed to the phages. All samples were diluted and plated and the number of colony forming units was counted. In the first study, there was a 100% reduction in bacterial growth in specimens that received the specific bacteriophage suspension compared to the positive controls within each group. In the second study, after ten days the number of bacteria was reduced by 50% to 100% following the bacteriophage application. These results suggest that bacteriophages are effective in reducing the number of bacteria inside the root canal and in the dental tubules of human teeth.