Made available in DSpace on 2016-08-15T20:31:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LiviaBC_DISSERT.pdf: 1623953 bytes, checksum: e19274f0d36484b576e3067f86dd3035 (MD5) Previous issue date: 2015-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Conventional tests that evaluate sperm quality do not have the ability to measure the potential of a fertilizing sample. This study aimed to determine the ability of the collared peccary of sperm in interacting with swine oocytes recovered from antral follicles, perivitelline membrane binding capacity of the chicken egg, and finally identify relationships between sperm parameters and in vitro interaction tests. Thus study was divided in two experiments with 11 male collared peccaries from the Multiplication Center of Wild Animals (CEMAS/UFERSA). In all experiments, the semen was collected by electroejaculation and evaluated for motility, vigour, viability, normal morphology, membrane integrity, and kinetic motility parameters by CASA. In the first experiment, semen samples were analyzed by an in vitro interaction test with swine oocytes conducted under a humidified atmosphere containing 5% CO2 for 18 h at 38.5ºC. Thus, it was found that in all oocytes there interactions with the presence of spermatozoa (mean 100.00 ± 0.0), observed the mean of 19.85 ± 5.5 oocytes penetrated by spermatozoa, number bound spermatozoa 39.4 ± 4.6 and penetrated spermatozoa 2.46 ± 0.7. Also, verified a significant association between the number of bound sperm and straightness (STR) (R2=61.7%; P=0.04). In the second experiment, semen samples were frozen in a Tris-based extender plus egg yolk (10%), Aloe vera (10%) and glycerol (6%). After thawing, samples were analyzed by an egg perivitelline membrane biding test conducted under a humidified atmosphere containing 5% CO2 for 20 min at 38.5ºC. As result, we identify 140.6 ± 19.4 sperm bound to the perivitelline membrane to fresh samples (binding range 33.9 308,7), while in frozen-thawed samples, a total of 125.1 ± 5.5 sperm were found (binding range 49.8 250.7) (P>0.05). Significant associations between frozen/thawed sperm bound to perivitelline membrane and various sperm parameters as vigor (54.6%), amplitude lateral head (R=55.1%), beat cross frequency (R=76.8%), straightness (R=61.8%) and linearity (R=62.2%) were found. In conclusion, that the two tests can be used for the functional evaluation of peccaries sperm. The perivitelline membrane binding test is a reliable, practical and relatively simple method that does not require expensive equipment and can be efficiently incorporated into the routine analysis of peccaries semen samples / Os testes convencionais, que avaliam a qualidade seminal, não possuem a capacidade de predizer o potencial fecundante de uma amostra. Com o intuito de superar esse entrave, objetivou-se determinar a capacidade dos espermatozoides de catetos em promover interações com oócitos suínos recuperados de folículos antrais, bem como a capacidade de ligação à membrana perivitelina do ovo de galinha e identificação das relações dos mesmos com os parâmetros espermáticos. Para tanto, o estudo foi dividido em dois experimentos, sendo utilizados 11 catetos machos, oriundos do Centro de Multiplicação de Animais Silvestres (CEMAS/UFERSA). Em todos os experimentos, o sêmen foi colhido por eletroejaculação e avaliado quanto à motilidade espermática, vigor, viabilidade, morfologia, parâmetros cinéticos por análise computadorizada (CASA), integridade e funcionalidade da membrana espermática. No primeiro experimento, as amostras de sêmen fresco foram analisadas pelo teste de interação in vitro com oócitos suínos em 5% CO2 por 18 h a 38,5ºC. Assim, verificou-se que em todos os oócitos avaliados existia a presença de interações com espermatozoides (média de 100 ± 0,0), tendo sido observado uma média de 19,85 ± 5,5 de oócitos com espermatozoides penetrados, 39,4 ± 4,6 espermatozoides ligados/oócito e 2,46 ± 0,7 espermatozoides penetrados/oócito. Ainda, observou-se uma significativa associação entre o número de espermatozoides ligados com índice de progressão (R=61,7%). No segundo experimento, o sêmen foi criopreservado em diluente a base de Tris, suplementado com gema de ovo (10%), Aloe vera (10%) e glicerol (3%). Após a descongelação, as amostras foram analisadas pelo teste de ligação à membrana perivitelina da gema do ovo de galinha, que foi realizado em atmosfera controlada contendo 5% CO2 por 20 min a 38,5ºC. As amostras de sêmen fresco apresentaram 140,6 ± 19,4 espermatozoides ligados a membrana perivitelina (taxa de variação de 33,9 308,7), já no sêmen congelado/descongelado, verificaram-se 125,1 ± 5,5 espermatozoides ligados (taxa de variação de 49,8 250,07) (P>0,05). Em adição, observou-se a existência de relações entre o teste de ligação e os parâmetros espermáticos: vigor (54,6%), deslocamento lateral da cabeça (R=55,1%), frequência de batimento cruzado (R=76,8%), índice de progressão (R=61,8%) e índice de linearidade (R=62,2%). Diante disso, conclui-se que ambos os testes podem ser utilizados para a avaliação funcional dos espermatozoides de catetos. Ainda, o teste de ligação à membrana perivitelina é um método confiável, prático e relativamente simples e que pode ser eficientemente incorporado à análise de rotina de amostras de sêmen catetos

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_carine_dahl_corcini.pdf: 732454 bytes, checksum: 17c0395123a3b5438e40b167f5247599 (MD5) Previous issue date: 2010-06-25 / The knowledge of the reproductive potential of a male has economical and reproductive importance, especially if he is used in artificial insemination programs. The conventional assays for evaluating seminal quality do not have the capacity of measuring the fertilizing potential of a sample, they only indicate if it is within the acceptable parameters for insemination, according to the Brazilian College of Animal Reproduction. Into this context, the in vitro sperm penetration assay presents itself as an alternative laboratorial test to categorize fertile males regarding their fecundation capacity, since they mimic in vitro what happens in vivo. However, this assay has its use limited by the difficulty of execution and by the utilization of high cost equipment. The present work aimed to find a new biological model to study male reproductive aspects and to evaluate alternatives to simplify and to decrease costs of the assay execution: use of the chicken egg inner perivitelline layer (IPVL) penetration assay and its association with in vitro and in vivo parameters; use of BTS as incubation media for the in vitro penetration assay, and female gametes cryopreservation using different methods. It was concluded that: 1) Calomys laucha can be used as a biological model; 2) it is possible to use the inner perivitelline layer as a substrate in assays to predict fertility of Calomys laucha males; 3) the IPVL has receptors that allow swine sperm binding, therefore presents potential for use in male fertility diagnostic tests; 4) it is possible to use BTS as incubation media for the in vitro penetration assay, in oocytes or in IPVL, and in water-bath without CO2, and 5) the cryopreservation of ovaries at -20ºC or the refrigeration of oocytes in PBS at 5ºC before the execution of the in vitro oocyte penetration assay, using mTBM media, is an alternative to the use of fresh oocytes in tests to predict swine semen fertility. / O conhecimento do potencial reprodutivo de um macho é de importância econômica e reprodutiva, principalmente se ele é utilizado em programa de inseminação artificial. Os testes convencionais que avaliam a qualidade seminal não possuem a capacidade de medir o potencial fertilizante de uma amostra e, apenas indicam se a mesma se encontra dentro dos parâmetros aceitáveis para a inseminação segundo o Colégio Brasileiro de Reprodução Animal. O teste de penetração espermática in vitro, aparece neste contexto como um teste laboratorial alternativo para categorizar os machos férteis, quanto a sua capacidade de fecundação, pois mimetizam in vitro o que acontece in vivo. No entanto, este teste tem seu uso limitado por ser de difícil execução e por utilizar equipamentos de alto custo. O presente trabalho objetivou encontrar um novo modelo biológico para estudos sobre aspectos reprodutivos de machos e avaliar alternativas para simplificar e diminuir custos para execução do teste: utilização do teste de penetração na membrana perivitelina interna do ovo da galinha (IPVL) e sua associação com parâmetros in vitro e in vivo; utiilização do BTS como meio de incubação do teste de penetração in vitro e utilização de diferentes maneiras de criopreservação de gametas femininos. Foi concluído que: 1) Calomys laucha pode ser utilizado como modelo biológico; 2) é possível utilizar a membrana perivitelina interna como substrato de teste para predizer a fertilidade de machos Calomys laucha; 3) a IPVL possui receptores que permitiram a ligação do espermatozóide suíno, apresentando potencial para ser utilizada em diagnóstico de fertilidade de machos; 4) é viável utilizar BTS como meio para realização do teste de penetração in vitro em ovócito ou IPVL, em banho-maria sem a presença de CO2 e 5) o congelamento de ovários a -20ºC ou o acondicionamento a 5º C dos ovócitos em PBS para realizar o teste de penetração ovocitária in vitro, utilizando o meio mTBM, é uma alternativa para predizer a fertilidade de sêmen suíno.