CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O presente trabalho descreve o estudo fitoquÃmico de Pilocarpus sulcatus Skorupa e o levantamento acerca dos metabÃlitos secundÃrios jà isolados do tÃxon Pilocarpus. O trabalho envolveu a extraÃÃo e identificaÃÃo dos constituintes volÃteis das folhas, casca do caule, lenho do caule, cascas das raÃzes e lenho das raÃzes alÃm do isolamento e determinaÃÃo estrutural dos constituintes fixos das folhas e lenho do caule de P. sulcatus. Trata-se de uma espÃcie com descriÃÃo botÃnica recente, ainda sem estudo fitoquÃmico publicado, com localizaÃÃo geogrÃfica restrita ao sul do estado da Bahia e norte de Minas Gerais. Foram extraÃdos e identificados dezoito constituintes volÃteis dos Ãleos essÃncias das diversas partes de P. sulcatus estando as metilcetonas alifÃticas, pentadecan-2-ona e tridecan-2-ona, presentes em todos os cinco Ãleos analisados, onde, com exceÃÃo do Ãleo essencial das folhas, a tridecan-2-ona foi identificada como o constituinte majoritÃrio. No desenvolvimento deste trabalho foram isoladas e determinadas as estruturas de seis substÃncias. Do extrato etanÃlico das folhas de P. sulcatus foram isolados o triterpeno do tipo taraxerano taraxerol, a furanocumarina isopimpinelina e o esterÃide β-sitosterol. Do extrato etanÃlico do lenho do caule foram isoladas as furanocumarinas elisina e amirina alÃm da piranocumarina xantiletina. A determinaÃÃo estrutural dos metabÃlitos secundÃrios isolados envolveu o uso de tÃcnicas espectromÃtricas como IV e RMN 1H e 13C, incluindo tÃcnicas bidimensionais (COSY, HSQC e HMBC), bem como comparaÃÃo com dados descritos na literatura. Os Ãleos essenciais extraÃdos foram analisados por CG-EM e a identificaÃÃo dos constituintes ocorreu atravÃs da interpretaÃÃo dos respectivos espectros de massa, pesquisa na espectroteca e comparaÃÃo com dados descritos na literatura. / The present work describes the phytochemical study of Pilocarpus sulcatus Skorupa and survey about the secondary metabolites isolated from the taxon Pilocarpus. The work involved the extraction and identification of volatile leaves constituents, stem bark, stem wood, bark root and wood root besides the isolation and determination of the fixed constituents of the leaves and stem wood of P. sulcatus. This is a species with recent botanical description, still without a published phytochemical study. It is restricted located in the south of Bahia and the north of Minas Gerais. It was extracted and identified eighteen volatile constituents of essential oils from different parts of P. sulcatus, with the aliphatic methyl ketones, pentadecan-2-one and tridecan-2-one, present in all five essential oils tested, which, aside from the essential oil of leaves, tridecan-2-one was identified as the major constituent. In this work, six substances were isolated and had its structures determined. From the ethanolic extract of P. sulcatus were isolated the triterpene taraxerol, the furanocumarin isopimpinellin and the steroid β-sitosterol. From the ethanolic extract of the stem wood were isolated the furanocoumarins elisin and amyrin besides the pyranocoumarin xanthyletin. The structural determination of all secondary metabolites isolated in this work involved spectrometric techniques such as: IR e NMR including 2D experiments (COSY, HSQC e HMBC), as well as, comparison with published data. The essential oils extracted were analyzed by GC-MS and the constituents identification occurred by interpretation of their respective mass spectra, in spectra library search and comparison with previously reported data.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Periconia hispidula is an endophytic fungus isolated from dried leaves from semi-arid dunes of Bahia. The fungus was subjected to cultivation by varying nutritional factors in four different culture mediuns: MPD (malt, peptone and dextrose), BD (potato dextrose), BDL (potato, dextrose and yeast) and MntPL (mannitol, peptone and yeast), and analyzing the extracts on different incubation days (7, 14, 21, 28 days). A survey of primary cytotoxic activity was carried out from the extracts against tumor cell line of colon cancer (HCT-116). The MPD extracts - 28 days BDL - 28 days and BD - 21 days showed a promising cytotoxic activity and were preliminarily selected for the chemical study. The chromatographic fractionation of MPD-28 days extract resulted in the isolation of 11 secondary metabolites characterized as {4-chromanone, 6-hydroxy-(R) -methyl- (PS-1)}, {4-chromanone, 6-hydroxy-(S) -methyl- (PS-2)}, {E, 1-(2,5 dihydroxyphenyl) but-2-en-1-one (PS-3)}, {1-(2, 5 dihydroxyphenyl)-butan-1-one (PS-4)}, {Z-methyl-3-(3-hydroxyphenyl) propenoate (PS-5)}, modiolide A (PS-7), fusanolide B (PS-8), stagonolide E (PS-9), {(3R,4R)-3,4-dihydro, 3,4,8- trihdroxy, naphthalen-1(2H)-one (PS-11)}, {(4S) isosclerona (PS-12)}, furtermore PS-10 without structural characterization yet. The BDL-BD-28 days and 21 days extracts presented a chromatographic profile very similar to MPD-28 days extract, thus, the chromatographic fractionations of both extracts were targeted for isolation of substances absent in MPD-28 days. The 3,4 dihydoxy-benzoic acid was isolated just from the BD-extract 21 days, while the fractionation of the extract BDL 28days gave (PS-13 without structural characterization yet) as different. Among the isolated metabolites, {4-chromanone, 6-hydroxy-(S) -methyl- (PS-2)}, fusanolido B and PS10 (probably) showed were new compounds. The isolated compounds were shown to be inactive in cytotoxicity assays against strains of HCT-116 and MC-27 (breast adenocarcinoma). However, the 1- (2,5-dihydroxyphenyl) but-2-en-1-one showed strong inhibition with a MIC of 62.5 Âg/mL to be subjected to antimicrobial test against strains of fungi Candida Krusei (ATCC 142432TM) and Candida albicans (ATCC 10231TM) and CIM of 125 Âg/mL against Candida parapsilosis (ATCC 22019TM), while {4-chromanone, 6-hydroxy-(S) -methyl-}, Z-3-(3-hydroxyphenyl) propenoate methyl, modiolide A, estagonolide E, fusanolido B and 3R,4R-dihydro-3,4,8-trihydroxy-1-(2H) -naftalelone showed moderate activity with MIC of 500 Âg / mL.Usual chromatographic techniques including liquid-liquid partitioning, flash chromatography and high pressure liquid chromatography (HPLC) were used for the isolation of secondary metabolites, while the structural characterization was possible through the use of spectrometric techniques using infrared (IR), mass spectrometry (MS), and uni and bidimensional techniques of nuclear magnetic resonance (NMR), and comparison with literature data. / Periconia hipidula à um fungo endofÃtico isolado de folhas secas provenientes de dunas do semiÃrido do estado da Bahia. O fungo foi submetido ao cultivo atravÃs da variaÃÃo de fatores nutricionais em quatro meios diferentes: MPD (malte, peptona e dextrose), BD (batata, dextrose), BDL (batata, dextrose e levedura) e MntPL (manitol, peptona e levedura), e anÃlise dos extratos em diferentes dias de incubaÃÃo (7, 14, 21, 28 dias). A prospecÃÃo da atividade citotÃxica preliminar foi realizada a partir dos extratos obtidos frente à linhagem de cÃlulas tumorais de cÃncer de cÃlon (HCT-116). Os extratos MPD â 28 dias, BDL - 28 dias e BD - 21 dias apresentaram uma atividade citotÃxica promissora e foram preliminarmente selecionados para o estudo quÃmico. O fracionamento cromatogrÃfico do extrato MPD-28 dias, resultou no isolamento de 11 metabÃlitos secundÃrios caracterizados como {(R), 6-hidroxi-2-metil, 4-cromanona (PS-1)}, { (S), 6-hidroxi-2-metil, 4-cromanona (PS-2)}, {E, 1-(2,5 diidroxi-fenil) but-2-en-1-ona (PS-3)}, {1-(2, 5 diidroxi-fenil)-butan-1-ona (PS-4)}, Z-3-(3 hidroxifenil) propenoato de metila (PS-5), modiolido A (PS-7), fusanolido B (PS-8), estagonolido E (PS-9), {(3R,4R)-3,4diidro,3,4,8 triidroxi,naftalen-1-(2H)-ona (PS-11)}, (4S)-isosclerona (PS-12), alÃm de PS-10 que se encontram em fase de caracterizaÃÃo estrutural. Os extratos BDL-28 dias e BD-21 dias apresentaram um perfil cromatogrÃfico bastante semelhante ao extrato MPD-28 dias, desta forma, os fracionamentos cromatogrÃficos de ambos os extratos foram direcionados para o isolamento de substÃncias ausentes em MPD-28 dias. O Ãcido 3,4 diidroxi-benzÃico (PS-6) foi isolado apenas do extrato BD-21 dias, enquanto que o fracionamento do extrato BDL 28d forneceu PS-13 (em fase de caracterizaÃÃo estrutural) como diferente. Dentre os metabÃlitos isolados, os compostos (2S)-6-hidroxi-2-metil-4-cromanona, fusanolido B apresentaram carÃter inÃdito na literatura. Os compostos isolados mostraram-se inativos em ensaios de atividade citotÃxica frente a cepas de HCT-116 e MC-27 (adenocarcinoma de mama). No entanto, o composto 1-(2,5-diidroxifenil)-but-2-en-1-ona apresentou elevada inibiÃÃo com CIM de 62,5 Âg/mL ao ser submetido à ensaio antimicrobiano frente a cepas de fungos Candida Krusei (ATCC 142432TM) e Candida albicans (ATCC 10231TM) e 125 Âg/mL frente à Candida parapsilosis (ATCC 22019TM), enquanto que o (2R)-6-hidroxi-2-metil-4-cromanona, Z-3-(3-hidroxifenil)-propenoato de metila, o modiolido A, o estagonolido E, o fusanolido B e a 3,4-diidro- 3,4,8-triidroxi-1(2H)-naftalelona apresentaram moderada atividade com CIM de 500 Âg/mL. TÃcnicas cromatogrÃficas usuais, incluindo partiÃÃo lÃquido-lÃquido, coluna de sÃlica flash e cromatografia de alta eficiÃncia (CLAE) foram utilizadas para o isolamento dos metabÃlitos secundÃrios, enquanto que a caracterizaÃÃo estrutural foi possÃvel atravÃs do uso de tÃcnicas espectromÃtricas utilizando infravermelho (IV), espectrometria de massa (EM) e ressonÃncia magnÃtica nuclear (RMN) com experimentos uni e bidimensionais, alÃm de comparaÃÃo com dados da literatura.