Background: Studies of assessing dietary fluoride intake in children have employed different dietary methods mainly “2-day duplicate” and “3-day food diary” methods. However, none of these methods have been validated or standardised. Main aims: The main aims of the current study were to develop a better understanding of strengths and weaknesses of dietary assessment methods “2-day duplicate plate” and “3-day food diary” by comparing dietary fluoride intake estimated by each method and evaluate the validity of the two methods for estimating dietary fluoride intake in young children. Methods: Sixty one healthy 4-6 year old children living in fluoridated area of the north-east of England since birth were recruited via 10 primary schools. Dietary information was collected using “2-day duplicate plate” and “3-day food diary” methods. Two 24-h urine samples and two samples of post brushing expectorate (a mixture of saliva, toothpaste and water used to rinse after brushing) from each child. Completeness of 24-h urine samples was checked using urinary excretion of creatinine and urinary flow rate. Validity of the two dietary assessment methods was checked by measuring urinary excretion of nitrogen and potassium as independent validity checks. Total daily fluoride intake from diet and toothpaste ingestion and urinary fluoride excretion was determined for each child. Results: All participated children completed all aspects of the study. According to the validity criteria, dietary data of 58 (95%) children, when collected by the 3-day food diary, were considered valid. However, when the dietary data were collected by the 2-day duplicate plate method, the data for 46 (75%) children were viewed as valid. Mean total dietary fluoride intake was 0.533 mg/d by the 3-day food diary method and 0.583 mg/d by the 2-day duplicate plate method. No statistically significant difference in total dietary fluoride intake was observed between the two methods. The mean difference in estimated dietary fluoride intake by the two dietary assessment methods was -0.050 mg/d with 95% limits of agreement of -0.501 to + 0.401 mg/d. Conclusion: Either the 3-day food diary or the 2-day duplicate plate method can be used when investigating mean total daily dietary fluoride intake of a population. However the methods cannot be used interchangeably at the individual level.

Neste trabalho foi desenvolvido uma metodologia para a determinação de metais (Cr, Cu, Fe, Mg, Mo, Pb), em óleos lubrificantes e estes quantificados pela técnica de espectrometria de emissão optica com plasma induzido por laser (LIBS). As amostras de óleo usadas foram coletadas em oficina de troca de óleo, variando-se a quilometragem, ano, marca do carro e a marca do óleo, com o preenchimento de formulários contendo as informações necessárias à pesquisa. A preparação de amostras foi realizada com o depósito ds mesmas em substrato de papel e sequente otimização dos parâmetros instrumentais. Para a calibração, foi utilizado o padrão de óleo S-21 multielementar da Conostan (SCP Science, Champlain, NY). Para a avaliação da exatidão do método desenvolvido foi utilizado o padrão de óleos lubrificantes (SRM 1084a) obtidos junto ao Instituto Nacional de Padrões e Tecnologia (NIST, Gaithersburg, MD). O método proposto apresentou as seguintes vantagens quando comparado com métodos de análise tradicionais (espectrometria de absorção atômica ou espectrometria de emissão optica acoplado ao plasma indutivo com diluição da amostra): mais rápida, sem desgaste do equipamento (em função da não introdução de solvente), geração de resíduo praticamente nula e menor consumo de reagentes. O método desenvolvido foi aplicado em amostras reais e o tratamento de dados realizado por análise estatística (equação de Stuarges, teste não paramétrico de Kruskalwallis). / In this work was developed a methodology for the determination of metals (Cr, Cu, Fe, Mg, Mo, Pb) in lubricating oils and these were quantified by Laser Induced Breakdown Spectroscopy (LIBS). Used oil samples used were collected in shop oil change, varying the mileage year, car make and oil brand with forms containing the information necessary for research filling out. For the calibration, the standard of 500ppm oil of S-21 multielement Conostan (SCP Science, Champlain, NY) was used, which was diluted with blank oil to achieve concentrations from 12.5 to 500 ppm necessary for the construction of analytical curve. For evaluating the accuracy of the method developed, we analyzed the standard of lubricating oils (SRM 1084th) obtained from the National Institute of Standards and Technology (NIST, Gaithersburg, MD). The proposed method has the following advantages compared to traditional methods of analysis (AAS or ICPOES with sample dilution): faster, without wear of the equipment (due to the introduction of non-solvent), generating virtually no residue and lower consumption reagents. The developed method was applied to real samples and the total processing performed by statistical analysis.

Neste trabalho foi desenvolvido uma metodologia para a determinação de metais (Cr, Cu, Fe, Mg, Mo, Pb), em óleos lubrificantes e estes quantificados pela técnica de espectrometria de emissão optica com plasma induzido por laser (LIBS). As amostras de óleo usadas foram coletadas em oficina de troca de óleo, variando-se a quilometragem, ano, marca do carro e a marca do óleo, com o preenchimento de formulários contendo as informações necessárias à pesquisa. A preparação de amostras foi realizada com o depósito ds mesmas em substrato de papel e sequente otimização dos parâmetros instrumentais. Para a calibração, foi utilizado o padrão de óleo S-21 multielementar da Conostan (SCP Science, Champlain, NY). Para a avaliação da exatidão do método desenvolvido foi utilizado o padrão de óleos lubrificantes (SRM 1084a) obtidos junto ao Instituto Nacional de Padrões e Tecnologia (NIST, Gaithersburg, MD). O método proposto apresentou as seguintes vantagens quando comparado com métodos de análise tradicionais (espectrometria de absorção atômica ou espectrometria de emissão optica acoplado ao plasma indutivo com diluição da amostra): mais rápida, sem desgaste do equipamento (em função da não introdução de solvente), geração de resíduo praticamente nula e menor consumo de reagentes. O método desenvolvido foi aplicado em amostras reais e o tratamento de dados realizado por análise estatística (equação de Stuarges, teste não paramétrico de Kruskalwallis). / In this work was developed a methodology for the determination of metals (Cr, Cu, Fe, Mg, Mo, Pb) in lubricating oils and these were quantified by Laser Induced Breakdown Spectroscopy (LIBS). Used oil samples used were collected in shop oil change, varying the mileage year, car make and oil brand with forms containing the information necessary for research filling out. For the calibration, the standard of 500ppm oil of S-21 multielement Conostan (SCP Science, Champlain, NY) was used, which was diluted with blank oil to achieve concentrations from 12.5 to 500 ppm necessary for the construction of analytical curve. For evaluating the accuracy of the method developed, we analyzed the standard of lubricating oils (SRM 1084th) obtained from the National Institute of Standards and Technology (NIST, Gaithersburg, MD). The proposed method has the following advantages compared to traditional methods of analysis (AAS or ICPOES with sample dilution): faster, without wear of the equipment (due to the introduction of non-solvent), generating virtually no residue and lower consumption reagents. The developed method was applied to real samples and the total processing performed by statistical analysis.

The overproduction of reactive oxygen and nitrogen species or the reduction in the antioxidant capacity results in the oxidative stress. The lipid peroxidation involves the oxidative deterioration of polyunsaturated fatty acids and it process is involved in the pathogenesis of diseases such as cancer, diabetes, atherosclerosis and neuro-degenerative diseases. Since it is complex to carry out the free radical quantification directly in vivo, it is necessary to do the measure of their reaction products and the malondialdehyde (MDA) is one of the most known secondary products of the lipid peroxidation used as an indicator of cell membrane injury. The MDA has been measured by its reaction with the thiobarbituric acid (TBA), which produces the MDA-TBA2 complex that can be detected by spectrophotometry method known such thiobarbituric acid reactive substances (TBARS). However, the major problem in this method is the lack of specificity, once TBA reacts with a variety of compounds, overestimating the real levels of MDA. Thus, methods involving high performance liquid chromatography (HPLC) have been reported, which are specifics and sensitive. In this study, a rapid and reliable method was optimized and validated to quantify plasmatic MDA by HPLC, using visible detection. The analytical parameters evaluated were: linearity, precision, accuracy, recovery, sensibility, robustness, and stability. The optimized method was applied in subjects from a retirement home in Santa Maria. The plasma sample underwent alkaline hydrolysis with NaOH, to a complete release of protein bound to the MDA, followed to acid deproteinization with H3PO4 and derivatization with TBA. To removal of interferents, a sample extraction with n-butanol before the chromatographic injection was carried out. The MDA analysis was performed in a C18 column, integrated with a guard-column. The mobile phase was constituted by KH2PO4 2.5 mM and methanol (50:50), with isocratic elution and detection at 532 nm. The assay was linear from 0.28 to 6.6 μM. The precisions intra and inter-day were obtained with CV% < 4% and < 11%, respectively. The accuracy (bias%) ranged from -4.1 to 2% and the recovery ranged from 95.9 to 102.7%. The limit of detection was 0.05 μM and the limit of quantification was 0.17 μM. For the stability test, it was observed that the MDA standard solutions were stable for, at least, 18 months at -20ºC. The plasma sample was stable for 24h when it was stored at -20ºC, but it was not stable at 4ºC. After alkaline hydrolysis storage at -20ºC, plasmatic MDA was not stable; on the other hand, the sample remained stable for 30 days after TBA reaction storage at -20ºC. After n-butanol extraction storage, the MDA levels were stable for 3 days at -20ºC. The method was applied in plasma samples in healthy subjects from 60 to 80 years. The elderly subjects had MDA plasma levels of 4.45 ± 0.81 μM for women and 4.60 ± 0.95 μM for men, without a significant difference. These levels were considered such as reference values to this age in our laboratory. Thus, the results demonstrated that a simple, rapid and specific technique was optimized and validated. The method showed to be consistent in all analytical parameters and can be used in the routines in clinical laboratories. / A superprodução de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio ou a redução na capacidade antioxidante resulta no estresse oxidativo. A peroxidação lipídica envolve a degradação oxidativa de ácidos graxos polinsaturados e este processo está envolvido na patogênese de doenças como câncer, diabetes, aterosclerose e doenças neurodegenerativas. Já que a quantificação direta de radicais livres in vivo é complexa, torna-se necessário realizar a medida de seus produtos de reação, e o malondialdeído (MDA) é um dos produtos secundários da peroxidação lipídica mais conhecidos utilizado como indicador de injúria da membrana celular. O MDA tem sido medido através de sua reação com o ácido tiobarbitúrico (TBA), o qual produz o complexo MDA-TBA2, detectado por espectrofotometria método conhecido como substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Porém, o maior problema neste método é a falta de especificidade, uma vez que o TBA reage com uma variedade de compostos, superestimando os valores reais de MDA. Assim, métodos envolvendo cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) têm sido descritos, sendo mais específicos e sensíveis. Neste estudo, um método rápido e confiável para quantificar MDA plasmático por CLAE, com detecção visível, foi otimizado e validado. Os parâmetros analíticos avaliados foram: linearidade, precisão, exatidão, recuperação, sensibilidade, robustez e estabilidade. O método otimizado foi aplicado em pessoas de um asilo da cidade de Santa Maria. As amostras de plasma sofreram hidrólise alcalina com NaOH, para uma liberação completa das proteínas ligadas ao MDA, seguida por desproteinização ácida com H3PO4 e derivatização com TBA. Para remoção de interferentes, realizou-se extração da amostra com n-butanol antes da injeção no cromatógrafo. A análise de MDA foi feita em coluna C18, integrada a uma pré-coluna. A fase móvel constituía de KH2PO4 2,5 mM e metanol (50:50), com eluição isocrática e detecção a 532 nm. A análise foi linear de 0,28 a 6,6 μM. As precisões intra e inter-dia foram obtidas com CV% < 4% a < 11%, respectivamente. A exatidão (bias%) variou de -4,1 a 2% e a recuperação variou de 95,9 a 102,7%. O limite de detecção foi de 0,05 μM e o limite de quantificação foi de 0,17μM. Para os testes de estabilidade, observou-se que as soluções padrões de MDA foram estáveis por, no mínimo, 18 meses a -20ºC. O plasma foi estável por 24h quando estocado a -20ºC e instável 4ºC. Armazenado a -20ºC após hidrólise alcalina, o MDA plasmático não permaneceu estável; por outro lado, as amostras continuaram estáveis por 30 dias quando armazenadas após derivatização com TBA, a -20ºC. Depois da extração com n-butanol, os níveis de MDA foram estáveis por 3 dias armazenados a -20ºC. O método foi aplicado em amostras de plasma de indivíduos saudáveis entre 60 e 80 anos. Os idosos apresentaram níveis plasmáticos de MDA de 4,45 ± 0,81 μM para mulheres e 4,60 ± 0,95μM para homens, sem diferença significativa. Estes valores foram considerados como valores de referência para esta faixa etária em nosso laboratório. Assim sendo, os resultados demonstraram que uma técnica simples, rápida e específica foi otimizada e validada. O método mostrou ser confiável em todos os parâmetros analíticos, e pode ser usado em rotinas nos laboratórios clínicos.