Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2017-04-11T17:35:54Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação_NataliaMFdeSousa.pdf: 1116322 bytes, checksum: 77d8197e0d2d507eaee531db39f9a1ae (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-11T17:35:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação_NataliaMFdeSousa.pdf: 1116322 bytes, checksum: 77d8197e0d2d507eaee531db39f9a1ae (MD5) Previous issue date: 2014-03-03 / CNPQ / A Mata Atlântica sofre intensas pressões antrópicas que têm posto em risco sua capacidade de prover importantes serviços ecossistêmicos. Atualmente, mais de 90% da área de abrangência dessa floresta foi devastada e atividades de recuperação têm sido incentivadas utilizando, no reflorestamento, espécies nativas que se apresentem resistentes e com capacidade para superar estresses pós transplantio. Diante disso, para testar a hipótese de que espécies florestais (pau-brasil-Caesalpinia echinata, moringa-Moringa oleífera e pau-ferro-Libidibia ferrea) de diferentes estágios de sucessão são beneficiadas com a micorrização com incrementos no crescimento e captação de CO2, objetivou-se determinar os efeitos da associação com FMA no crescimento de mudas de espécies utilizadas no reflorestamento da Mata Atlântica. Três experimentos foram conduzidos em telado em delineamento inteiramente casualizado em arranjo fatorial. Para pau-brasil e moringa, os tratamentos foram (2×3): adubação (com ou sem resíduo verde (5%) resultante da compostagem de troncos de árvores), controle sem inoculação-FMA Nativos (NI), inoculados com Claroideoglomus etunicatum (Ce) e Acaulospora longula (Al) e 8 repetições. Para pau-ferro (2×4): plantas Diplóides e Tetraplóides e os tratamentos (Controle absoluto - solo desinfestado e não inoculado); Controle relativo-FMA Nativos (solo não desinfestado e não inoculado), inoculação com Ce ou Al, com 8 repetições. No solo foram determinados: diversidade e infectividade; taxa de colonização e número de glomerosporos (antes e ao final dos experimentos); biometria das plantas, área foliar, biomassa fresca da parte aérea e da raiz; teor nutricional, trocas gasosas e eficiência fotossintética. Foram registradas 32 espécies de FMA e potencial médio de infectividade de 33 propágulos cm3 solo-1. No solo sem resíduo, mudas de pau-brasil associadas a Ce, tiveram maior área foliar (62,65 cm2) que os demais FMA; com exceção da matéria fresca da raiz, as demais variáveis de crescimento apresentaram maiores valores com a adição de resíduo; a assimilação de CO2 (A: 4,99 umolCO2 m-2.s-1) e eficiência do uso de água (EUA: 4,17 umol.mmol-1) foram mais elevadas nas mudas cultivadas em solo e associadas a Ce do que nos demais tratamentos com FMA enquanto no solo com resíduo os FMA nativos contribuíram para aumentar a A (4,24 umolCO2 m-2.s-1) e EUA (4,00 umol.mmol-1); o número de glomerosporos não foi alterado enquanto a colonização por Ce foi estimulada pela adição do resíduo. Para a moringa, a adição de resíduo contribuiu para o aumento do diâmetro do caule (5,84-5,69 mm2) e matéria fresca (7,76-9,03 g) e seca (3,85-3,54 g) da parte aérea em todos os tratamentos com FMA enquanto reduziu a produção de raízes nas mudas associadas a Ce (4,09 g); no solo a inoculação com FMA introduzidos contribuiu para o aumento nas trocas gasosas Ce (A:12,24 umolCO2 m-2.s-1; E:7,59 mmol.m-2.s-1; gs: 0,04 molm-1.s-1 ). Al (A:10,33 umolCO2 m-2.s-1; E:6,99 mmol.m-2.s-1; gs: 0,15 molm-1.s-1) enquanto reduziu a eficiência no uso da água (Al: 1,47 umol.mmol-1; Ce: 1,66 umol.mmol-1) em relação aos FMA nativos. Plantas diploides de pau-ferro foram beneficiadas pela inoculação de forma semelhante quando associadas aos FMA nativos e introduzidos; as tetraploides tiveram maior área foliar (18,69 cm2) com a inoculação com Al em relação a Ce. As taxas de assimilação de CO2 (7,67 umolCO2 m-2.s-1) e transpiração (2,26 mmol.m-2.s-1) foram maiores nas plantas diploides associadas a Ce e a atividade fotossintética foi similar, independentemente da ploidia. Assim, recomenda-se para a produção de mudas de estágio de sucessão primário (moringa) e secundário tardio (pau-brasil) a combinação de resíduo orgânico em solo não esterilizado com alta diversidade de FMA. Plantas de estágios iniciais de sucessão aproveitam mais os benefícios da associação com FMA do que as de estágio sucessionais superiores. Plantas tetraploides de pau-ferro aproveitam mais dos recursos fotossintéticos decorrentes da associação com os FMA do que as diploides. / The marjoritary of the Atlantic Forest area was devastated, due to environmental pressures on, endangering their ability to provide important ecosystem services. Therefore, reforestation activities are encouraged by planting species that have strength and ability to overcome environmental stresses after transplanting, characteristics determined by the association with AMF. This study aimed to determine the effects of AMF inoculation on the development of species seedlings used in reforestation of the Atlantic Forest. Plants were inoculated with the AMF, Claroideoglomus etunicatum e Acaulospora longula. Caesalpinia echinata e Moringa oleifera (tested for fertilization) and Libidibia ferrea (the two ploidy levels). Three experiments were conducted in a greenhouse in a completely randomized design in a factorial arrangement. For Brazil-wood and moringa, treatments were (2 × 3) fertilizer (with or without green waste (5%) resulting from the composting of tree trunks), uninoculated controls-FMA Natives (NI), inoculated with Claroideoglomus etunicatum (Ce) and Acaulospora longula (Al) and 8 repetitions. To iron-wood (2 × 4): tetraploid and diploid plants treatments (absolute control (not inoculated and fumigated soil); Native Control on-FMA (not fumigated soil and uninoculated), inoculation with Ce or Al, with 8. replications in soil samples were analyzed: diversity and infectivity; colonization rate and number of glomerosporos (before and at the end of the experiments); biometrics plant, leaf area, shoot biomass and root; nutritional content, gas exchange and photosynthetic efficiency. No residue in the soil , seedlings of Brazil wood associated with Ce , had higher leaf area ( 62.65 cm2 ) than other fungi , with the exception of root fresh matter , the other growth variables were higher with the addition of residue , CO2 assimilation ( a: 4.99 umolCO2 m - 2 s - 1 ) and water use efficiency ( USA : 4.17 umol.mmol - 1 ) were higher in seedlings grown in soil and associated with Ce than the other treatments with AMF while in soil with residue native AMF contributed to the increase ( 4.24 umolCO2 m - 2 s - 1 ) and USA ( 4.00 umol.mmol - 1 ), the number of glomerosporos not been changed while colonization by Ce was stimulated by the addition of the residue . To moringa , adding residue contributed to the increase in stem diameter (5.84 to 5.69 mm2) and fresh weight (7.76 to 9.03 g) and dried (3.85 to 3.54 g) of shoots in all treatments with AMF as reduced root growth in seedlings associated with Ce (4.09 g), soil inoculation with AMF introduced contributed to the increase in gas exchange Ce (A: 12.24 umolCO2 m-2s-1, and 7.59 mmol m-2s-1, gs : 0.04 mol m-1s-1), Al ( A: 10.33 umol CO2 m-2s-1, E: 6.99 mmol m-2s-1, gs:0.15 molm-1s-1) while reducing the efficiency in the use water (Al:1.47 umol.mmol-1, Ce:1.66 umol.mmol-1) compared to the native FMA . Diploid plants ironwood benefited by inoculation similarly when combined native and introduced the AMF, the tetraploid had higher leaf area (18.69 cm2) with inoculation with Al relative to Ce . The CO2 assimilation rates (7.67 umolCO2 m-2s-1) and transpiration (2.26 mmol m-2s-1) were higher in diploid plants associated with Ce and photosynthetic activity was similar regardless ploidy. Thus, it is recommended for the production of seedlings stage of primary succession (moringa) and secondary late (Brazil wood) the combination of organic waste in non-sterile soil with high diversity of AMF. Plants of early successional enjoying more benefits of membership in the FMA than the higher successional stage. Tetraploid plants ironwood benefit more photosynthetic resources arising from association with the FMA than the diploid.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2830202 bytes, checksum: 646d57cf2258798f7f8bcfe375e2b6ab (MD5) Previous issue date: 2009-03-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Hydnangium sp. is a basidiomycetous fungus that is capable of forming ectomycorrhiza with Eucalyptus species. The in vitro mycorrhization system is widely used for mycorrhizal interactions studies, becoming a simple and reproducible system for the symbiosis-regulated genes expression analysis. In this work, the in vitro mycorrhization system for the Hydnangium sp. and Eucalyptus grandis interaction was performed for the colonization, differentiation and functioning phases for the ectomicorriza formation. The colonization phase were verified after five days of inoculation with the Hydnangium sp., the differentiation phase after ten days and the functioning phase after 20 days of inoculation. The extern morphology was analyzed by stereomicroscopy and the section microscopy was performed for the mantle and Hartig net detection. The total RNA extraction was performed for each phase, with the objective of to analyze genes expression. However, the material quantity from roots of 130 seedlings for each phase was insufficient for the transcripts detection through RTPCR. The intron analysis of the partial sequences of the genes that encode ATP sintase (atp) and acetyl-CoA acetyltransferase (aat) of Hydnangium sp. enabled two introns identification in partial sequence of atp gene (53 and 65 bp), while in partial sequence of aat gene were identified three introns (52, 52 e 46 bp). All introns analyzed have the canonical sequence 5 GT 3 AG on splicing sites, ranging the adjacent nucleotides. The phylogenetic analysis, using the partial sequences of amino acids of atp and aat genes, enabled the correct group separation, corroborating the Hydnangium sp. classification as belonging the same family of Laccaria bicolor. / Hydnangium sp. é um fungo basidiomiceto capaz de formar ectomicorriza com espécies de Eucalyptus. Os sistemas de micorrização in vitro vêm sendo largamente utilizados para estudar interações micorrízicas, tornando-se um sistema simples e reproduzível para as análises de expressão de genes envolvidos na interação. Neste trabalho, a técnica de micorrização in vitro para a interação do fungo Hydnangium sp. com E. grandis foi realizada para as fases de colonização, diferenciação e funcionamento da ectomicorriza. A fase de colonização foi verificada após cinco dias de inoculação com Hydnangium sp., a fase de diferenciação após 10 dias e a fase de funcionamento após 20 dias de inoculação. A morfologia externa foi analisada por lupa e foram avaliados cortes microscópicos para a detecção do manto e da rede de Hartig. A extração de RNA total foi realizada para cada uma das fases, com o objetivo de analisar a expressão gênica. Entretanto, a quantidade de material proveniente de raízes de 130 plântulas para cada fase, foi insuficiente para a detecção de transcritos por meio de RTPCR. A análise dos íntrons das seqüências parciais dos genes que codificam ATP sintase (atp) e acetil-CoA acetiltransferase (aat) de Hydnangium sp. permitiu a identificação de dois íntrons na seqüência parcial do gene atp (53 e 65 pb), enquanto que na seqüência parcial do gene aat foram identificados três íntrons (52, 52 e 46 pb). Todos os íntrons analisados possuem a seqüência padrão 5 GT 3 AG no sítio de processamento, variando os nucleotídeos adjacentes. A análise filogenética, utilizando as seqüências parciais de aminoácidos deduzidas dos genes atp e aat, permitiu a separação correta dos grupos, corroborando a classificação do fungo Hydnangium sp. como pertencente à mesma família de Laccaria bicolor.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:36:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 623531 bytes, checksum: 3e10a939648d01ae404b0a09438fda4c (MD5) Previous issue date: 2007-08-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The high acidity, the intense intemperism, and high aluminum content are limiting factors to plant development in Brazilian Cerrado Upon abiotic stress conditions the association with mycorrhizal fungi can assist the host plant in absorbing nutrients and water from soil. The high availability of these elements to the host plant improved by arbusculares mycorrhizal fungi (AMF) is determinant in plant survival and structuring of plant ecosystems. The presence of dark septate entophytic fungi in plant roots is another type of symbiotic association related to abiotic conditions such as low humid and day length. The reduced number of publications about these associationsin cerrado species is mainly a function of edaphic conditions and root structural characteristics of native species which difficult the in loco studies of these characters. In this work, it was aimed to study the association between AMF and cerrado native species. It was evaluated and adapted methods for fungal structures observation in symbiosis with Annonaceae, Anacardiaceae, Leguminosae, Melastomataceae, Myrsinaceae, Myrtaceae and Rubiaceae families, which were collected during dry season on senso strictu Cerrado in Floresta Nacional (FLONA) in the municipal district of Paraopeba, Minas Gerais State. Root samples were submitted to three protocols for fungal structures observationg. All evaluated species were colonized by AMF and dark septate fungi, except Xylopia aromatica, which not presented dark septate strutctures. The best diaphanization procedure was obtained when the root samples were autoclaved at 121ºC by 20 minutes in a 2% KOH solution and transferred to a 2% KOH solution by 24 hours at room temperature. This procedure was repeated twice and, after that, the samples were submerged in a 2% KOH solution for 2 hours. The arbuscules were observed with more detail after been included in resin, sectioned and stained with toluidine blue. The non-specific characteristic of AMF observed in sensu stricto Cerrado species was confirmed and suggested for dark septate associations. It indicates that these associations were important as adaptive strategies to cerrado conditions. Roupala montana Aubl. is a species from Proteaceae family which presents a large distribution on different phytophysiognomies of cerrado. Recent studies have been showed that several mycorrhizal fungi structures occurred in these species said to be typically non- mycorrhizal. The low pH and nutrients deficiency in cerrado soils propitiate good conditions for development and establishment of mycorrhizal association in R. montana, as observed in other Proteaceae species. Therefore, in this work it was also aimed to confirm the presence of AMF in R. montana specimens growing at natural cerrado conditions, and correlated the mycorrhizal frequency with nutritional status and edaphic conditions. Three individuals of R. montana were collected in FLONA on cerrado senso strictu, dense cerrado senso strictu, and cerradão during dry and rain seasons. The mycorrhizal occurrence was positively correlated with P, Al, and Mg contents in the soil, and P, K, and Ca in the leaves, and negatively correlated with Ca, Mn, and N contents in the soil. The cerrado soils are acid and have high Al contents which can inhibit the transport of Ca and K to the plants. In this way, the presence of mycorrhizal fungi in R. montana could be a adaptive mechanism for plant surviving under Brazilian cerrado conditions. / A elevada acidez, o intenso intemperismo e os altos teores de alumínio nos solos do Cerrado são fatores limitantes do desenvolvimento vegetal. Em condições de estresses abióticos a associação com fungos micorrízicos auxilia a planta hospedeira na absorção de nutrientes e água do solo. A maior disponibilidades desses elementos para a planta hospedeira pelos fungos micorrízicos arbusculares (FMAs) é determinante na sobrevivência das plantas e na estruturação de formações vegetais. A presença de fungo endofítico do tipo dark septate (DSEF) nas raízes das plantas é outro tipo de associação simbiótica relacionada às condições abióticas como baixa umidade e comprimento do dia. O reduzido número de trabalhos encontrados na literatura dessas associações em espécies de cerrado se deve em parte, pelas condições edáficas e características estruturais radiculares das espécies nativas que dificultam a realização de estudos in loco. Neste trabalho teve-se por objetivo estudar a associação de FMAs em espécies de plantas nativas do cerrado. Para isso, foram testados e adaptados métodos para observação das estruturas fúngicas em simbiose em espécies das famílias Annonaceae, Anacardiaceae, Leguminosae, Melastomataceae, Myrsinaceae, Myrtaceae e Rubiaceae coletadas durante a estação seca em cerrado senso strictu na Floresta Nacional (FLONA) do município de Paraopeba, Minas Gerais. Amostras radiculares foram submetidas a três tipos de protocolos para observação de estruturas fúngicas. Todas as espécies investigadas encontravam-se colonizadas por FMAs e DSEF, exceto DSEF em Xylopia aromática. O melhor método de diafanização foi observado quando as raízes foram autoclavadas a 121 °C em KOH 2 %, por 20 min e, subseqüentemente transferidas para solução nova de KOH 2 % por 24 horas à temperatura ambiente. Este procedimento foi repetido por duas vezes e, em seguida, essas amostras foram imersas em H2O2 2 % por 2 horas. Os arbúsculos foram observados com maiores detalhes após as raízes serem incluídas em resina, seccionadas e coradas com azul de toluidina. O caráter generalista dos FMAs observado nas espécies vegetais do cerrado sensu stricto foi confirmado e sugerido para DSEFs, indicando a importância destas simbioses como estratégia adaptativa às condições de cerrado. Roupala montana Aubl. é uma espécie da família Proteaceae com ampla distribuição nas diferentes fitofisionomias do cerrado. Estudos recentes têm relatado estruturas típicas de fungos micorrízicos em condições de estresses abióticos em espécies dessa família tipicamente não micorrizável. A acidez e deficiência dos solos de cerrado provem apropriadas condições para o desenvolvimento e formação de associações micorrízicas em R. montana, como observado em outros espécies da família Proteaceae. Assim, este trabalho também teve por objetivo confirmar a presença de fungos micorrízicos arbusculares em R. montana crescidas naturalmente em cerrado, correlacionando a freqüência de micorrização com o estado nutricional e condições edáficas. Em três repetições, indivíduos de R. montana foram coletados na FLONA em cerrado senso strictu, cerrado senso strictu denso e cerradão nas estações seca e chuvosa. A micorrização em R. montana foi correlacionada positivamente com o teor de P, Al, e Mg, no solo e de P, K e Ca nas folhas, e negativamente com Ca, Mn e N no solo. Os solos de Cerrado são ácidos com altas concentrações de Al, os quais podem inibir o transporte de Ca e K para as plantas, sugerindo que a presença de fungos micorrízicos em R. montana é um mecanismo adaptativo de sobrevivência as condições do cerrado brasileiro.