Made available in DSpace on 2014-06-12T18:01:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3087_1.pdf: 6663197 bytes, checksum: 5a8f3700cbca1aab6e9ddd9f246972fa (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Os Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV) e o Vírus Linfotrópico de Células T Humanas (HTLV) são membros da família Retroviridae e agentes etiológicos da síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS) e da leucemia de células T do adulto/paraparesia espástica tropical, respectivamente. Estas infecções são importantes problemas de saúde pública, de modo que a triagem de doadores de sangue e populações de risco, através de métodos de diagnóstico altamente sensíveis e específicos, é considerada crucial. Os principais sistemas de diagnóstico são ainda baseados na detecção de anticorpos contra as proteínas virais p24 e envelope Env através da técnica Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay ELISA, a qual, embora útil, é limitada pela necessidade de grandes volumes de amostra, mão-de-obra e equipamentos especializados, elevado custo e tempo de processamento. A fim de superar estes entraves, nós desenvolvemos um ensaio baseado em p24 e Env através da técnica de microarranjos líquidos. Para tanto, sequências de aminoácidos codificantes das proteínas p24 e Env de HIV-1/2 e HTLV-1/2 de isolados da América do Sul foram selecionadas, em bancos de dados públicos, e alinhadas para a geração das respectivas sequências consenso. Estas foram submetidas à busca por homologia e, a partir dos melhores homólogos, dois tipos de antígenos foram desenvolvidos: (1) contendo a sequência completa e (2) contendo as regiões mais hidrofílicas de cada proteína. As sequências obtidas foram otimizadas para expressão bacteriana e submetidas à síntese comercial. Em seguida, estas foram clonadas em vetores de expressão procarióticos, os quais foram utilizados para transformar bactérias, visando à produção dos respectivos antígenos de HIV e HTLV. Os antígenos foram expressos, à exceção das proteínas completas do Env, e validados através de ensaios de microarranjos líquidos, utilizando três painéis padrão: HIV-1/2 (135 amostras), HTLV-1/2 (81 amostras) e negativo (347 amostras). Os antígenos completos p24 de HIV-1/2 e HTLV-1/2 foram considerados altamente sensíveis e específicos, e seu desempenho foi comparável ao observado utilizando antígenos comerciais como controle. Dentre os antígenos hidrofílicos, os melhores resultados foram obtidos a partir dos antígenos gp46 HTLV-1/2, os quais permitiram a diferenciação do subtipo viral. As proteínas p24 de HIV-1/2 e HTLV-1/2 foram ainda utilizadas para a produção de anticorpos policlonais através da imunização de coelhos, e os anticorpos obtidos serão ainda avaliados quanto à capacidade de capturar o antígeno p24 humano em casos de infecções iniciais. Os resultados obtidos neste projeto foram considerados extremamente promissores, permitindo o desenvolvimento de um teste diagnóstico com maior precisão, além de redução do custo, tempo de realização e volume de amostras