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Purificação, caracterização, propriedades biológicas da Lectina de Rizoma de Microgramma vaccinifolia e estudo molecular de Fusarium oxysporum f. sp. lycopersiciPereira de Albuquerque, Lidiane 31 January 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Lectinas são proteínas que se ligam a carboidratos e glicoconjugados. Rizomas
de Microgramma vaccinifolia têm ampla utilização na medicina popular no tratamento
de hemoptises e hematúria. Os objetivos deste trabalho foram isolar, caracterizar,
avaliar as atividades tóxica, antibacteriana e antifúngica da lectina de rizoma de M.
vaccinifolia (MvRL) e identificar as raças 1, 2 e 3 de Fusarium oxysporum f. sp.
lycopersici por biologia molecular. As proteínas do extrato de rizoma (ER) foram
fracionadas com sulfato de amônio fornecendo a fração 0-60% (F0-60%). Atividade
hemaglutinante (AH) e concentração de proteína foram determinadas em ER e F0-60%.
MvRL foi isolada por cromatografia da F0-60% em Sephadex G-25. A AH de MvRL
foi avaliada em presença de carboidratos, glicoproteínas, preparações contendo
carboidrato das raças 1, 2 e 3 de Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici, em diferentes
temperaturas, valores de pH e na presença de íons. Eletroforese em gel de
poliacrilamida de MvRL foi realizada em condições nativas (PAGE) e desnaturadas
(SDS-PAGE). O efeito de MvRL sobre Artemia salina, bactérias e fungos foi também
avaliado. O DNA das raças 1, 2 e 3 de Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici foi
isolado utilizando marcadores moleculares ISSR e RAPD. MvRL aglutinou eritrócitos
humanos e sua AH foi inibida por manose, soro fetal bovino e preparações de F.
oxysporum f.sp. lycopersici. A AH de MvRL foi termoestável, ativa em pH 5,0 e
dependente de íons. PAGE revelou MvRL como uma proteína ácida e SDS-PAGE
revelou banda polipeptídica glicosilada de massa molecular 17 kDa. Cromatografia de
gel filtração definiu a massa molecular nativa de MvRL como 100 kDa indicando a
lectina como um agregado molecular. MvRL foi tóxica sobre A. salina (CL50 de 154,16
μg/mL), não exibiu atividade antibacteriana e apresentou atividade antifúngica. MvRL
foi mais ativa em inibir o crescimento da raça 3 de F. oxysporum f.sp. lycopersici. Os
marcadores moleculares foram adequados para avaliar a variabilidade genética das
raças. Em conclusão MvRL é uma lectina com atividade antifúngica e o efeito sobre F.
oxysporum f.sp. lycopersici foi diferente para as três raças
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