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Identificação do potencial biotecnológico de microrganismos endofíticos na produção de compostos inseticidas e biorremediação / Identification of biotechnological potentialof endophytic microorganisms in the production of insecticidal compounds and bioremediation

Preto, Iara Donadão 24 July 2018 (has links)
Microrganismos endofíticos apresentam grande diversidade genética e metabólica, com enorme potencial biotecnológico para aplicações em diferentes áreas. A bioprospecção desses microrganismos possibilita a obtenção de novos bioprodutos agrícolas. Endofíticos podem ser aplicados, por exemplo, para a biorremediação de áreas contaminadas ou para o controle de insetos pragas pela produção de compostos entomotóxicos. Apesar de sua importância, ainda existem poucos estudos voltados à bioprospecção da microbiota endofítica em regiões tropicais. Assim, o presente trabalho pretendeu verificar a diversidade de microrganismos endofíticos cultiváveis em milho e a comparar a diversidade de metabólitos desses endofíticos ao de isolados de Citrus. Também foi explorado o potencial dos diferentes endófitos em degradar os principais inseticidas (lufenuron, spinosad, chlorpyrifos ethyl, lambda-cyhalothrin e deltamethrin) utilizados em lavouras de milho para o controle de lagartas de Spodoptera frugiperda (J.E. Smith, 1797) (Lepidoptera, Noctuidae), para exploração dos mesmos em programas de biorremediação. Finalmente, foi avaliado o potencial entomotoxida dos extratos orgânicos dos endofíticos estudados até a identificação das moléculas ativas. Foram isolados 30 microrganismos endofíticos de milho (27 bactérias e 3 fungos), os quais foram comparados aos endófitos de citros do acervo do Laboratório de Genética de Microrganismos \"Prof. João Lúcio de Azevedo\". Dos isolados obtidos, sete apresentaram capacidade de metabolização dos cinco inseticidas testados, sendo a maioria deles capaz de metabolizar pelo menos um dos inseticidas testados. Ensaios de bioatividade dos extratos orgânicos do cultivo dos endofíticos contra lagartas de S. frugiperda, levaram à identificação de extratos que induziram 100% de mortalidade de lagartas do terceiro ínstar. O isolamento e a caracterização da molécula ativa do extrato produzido pelo isolado LGM-CR-JM-02 - Streptomyces badius, permitiu a identificação da valinomicina (CL50 = 4,38 Mi g/mL) como molécula ativa. Assim, demonstramos que a comunidade de endofíticos pode reunir grande diversidade biológica e, principalmente, metabólica, sendo uma excelente oportunidade para exploração de microrganismos com potencial para biorremediação e produção de compostos com atividade inseticida / Endophytes are microorganisms with great genetic and metabolic diversity, and with a huge biotechnological potential for applications in different areas. The bioprospection of these microorganisms makes possible to obtain new agricultural bioproducts. Endophytes may be applied, for example, to bioremediation of contaminated areas or to the control of pest insects with entomotoxic compounds. Despite its importance, there are few studies focused on the bioprospection of endophytic microbiota in tropical regions. Thus, we investigated the biological diversity of culturable endophytes from maize and compared the diversity of metabolites endophytes from maize and Citrus produced. We also explored the potential of different endophytes to grow in minumum medium containing one of the main insecticides (lufenuron, spinosad, chlorpyrifos ethyl, lambda-cyhalothrin and deltamethrin) applied in maize crops to control the caterpillars Spodoptera frugiperda (J.E. Smith, 1797) (Lepidoptera, Noctuidae) as the only source of carbon in order to evaluate their potential use in bioremediation programs. Finally, we evaluated the entomotoxic potential of the organic extracts of the endophytes and the fractions up to the identification of the active molecules. In total, thirty maize endophytes (27 bacteria and 3 fungi) and five endophytes isolated from citrus that were deposited at the collection of the Laboratory of Genetics of Microorganisms \"Prof. João Lúcio de Azevedo\" were investigated. Seven out of 35 endophytes tested metabolized the five insecticides used, and most of them were able to metabolize at least one of the tested insecticides. Bioactivity assays of the organic extracts produced from cultured endophytes were fed to third instars of S. frugiperda causing 100% mortality. The isolation and characterization of the active molecule produced by one of these isolates (LGM-CR-JM-02 - Streptomyces badius) led to the identification of valinomycin (LC50 = 4.38 Mi g / mL) as the active molecule. Thus, we demonstrated that endophytes can gather great biological and metabolic diversities, demonstrating endophytes are an excellent opportunity for the identification of microorganisms with potential for bioremediation and production of compounds with insecticidal activity
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ISOLAMENTO, IDENTIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE LINHAGENS ENDOFÍTICAS DE Bacillus thuringiensis DE MANDIOCA (Manihot esculenta Crantz) / Isolation, identification and characterization of endophytic strains of Bacillus thuringiensis from cassava (Manihot esculenta Crantz)

Suzuki, Marise Tanaka 08 June 2006 (has links)
Bactérias endofíticas provavelmente desenvolveram uma relação com planta hospedeira através de processos coevolucionários, podendo influenciar de alguma forma na fisiologia da planta. Na literatura, há muitos relatos sobre espécies de Bacillus endofíticos, no entanto, poucos se referem a espécie B. thuringiensis (Bt). Dessa forma, o objetivo desse trabalho foi isolar, identificar e caracterizar Bt de mandioca. Todos os isolados identificados como Bt produziram cristais pontuais e apenas um isolado, IIRAC22, produziu cristais amorfos maiores. Esse isolado apresentou genes cry4A, cry4B e cry10 e toxicidade a larvas de Aedes aegypti e Culex quinquefasciatus, evidenciando ser Bt var. israelensis. Todos os isolados produziram quitinase, sugerindo que elas podem ter ação controladora sobre fungos fitopatogênicos e insetos. Houve também produção de pectinase, enzimas envolvidas na penetração de planta hospedeira e estabelecimento como endófito. Esses Bt endofíticos podem levar ao desenvolvimento de produtos biotecnológicos para controle de insetos. / Endophytic bacteria probably developed a relationship with their plant host through coevoltionary processes what could influence in the physiology of the plant. In the literature, there are many reports about endophytic Bacillus species, however, few reports cite endophytic B. thuringiensis (Bt). Thus, the aim of the present work was to isolate, identify and characterize Bt from cassava. All the isolates identified as Bt were able to produce punctual crystals, but only one isolate, IIRAC22, produced large amorphous crystals. This isolate presented cry4A, cry4B and cry10 genes and toxicity against larvae of Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus, evidencing to be Bt var. israelensis. All the isolates produced quitinase, suggesting that they can control phytopathogeni fungi and insects. There was also pectinase production, enzyme involved in the penetration of plant hosts and establishment as endophytes. These endophytic Bt can take to the development of biotechnological products for the control of insect.
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ISOLAMENTO, IDENTIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE LINHAGENS ENDOFÍTICAS DE Bacillus thuringiensis DE MANDIOCA (Manihot esculenta Crantz) / Isolation, identification and characterization of endophytic strains of Bacillus thuringiensis from cassava (Manihot esculenta Crantz)

Marise Tanaka Suzuki 08 June 2006 (has links)
Bactérias endofíticas provavelmente desenvolveram uma relação com planta hospedeira através de processos coevolucionários, podendo influenciar de alguma forma na fisiologia da planta. Na literatura, há muitos relatos sobre espécies de Bacillus endofíticos, no entanto, poucos se referem a espécie B. thuringiensis (Bt). Dessa forma, o objetivo desse trabalho foi isolar, identificar e caracterizar Bt de mandioca. Todos os isolados identificados como Bt produziram cristais pontuais e apenas um isolado, IIRAC22, produziu cristais amorfos maiores. Esse isolado apresentou genes cry4A, cry4B e cry10 e toxicidade a larvas de Aedes aegypti e Culex quinquefasciatus, evidenciando ser Bt var. israelensis. Todos os isolados produziram quitinase, sugerindo que elas podem ter ação controladora sobre fungos fitopatogênicos e insetos. Houve também produção de pectinase, enzimas envolvidas na penetração de planta hospedeira e estabelecimento como endófito. Esses Bt endofíticos podem levar ao desenvolvimento de produtos biotecnológicos para controle de insetos. / Endophytic bacteria probably developed a relationship with their plant host through coevoltionary processes what could influence in the physiology of the plant. In the literature, there are many reports about endophytic Bacillus species, however, few reports cite endophytic B. thuringiensis (Bt). Thus, the aim of the present work was to isolate, identify and characterize Bt from cassava. All the isolates identified as Bt were able to produce punctual crystals, but only one isolate, IIRAC22, produced large amorphous crystals. This isolate presented cry4A, cry4B and cry10 genes and toxicity against larvae of Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus, evidencing to be Bt var. israelensis. All the isolates produced quitinase, suggesting that they can control phytopathogeni fungi and insects. There was also pectinase production, enzyme involved in the penetration of plant hosts and establishment as endophytes. These endophytic Bt can take to the development of biotechnological products for the control of insect.

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