Šio darbo tikslas buvo gauti monokloninius antikūnus prieš Hendra ir Nipah virusų nukleokapsidės baltymus. Dėl didelės Henipavirus genties virusų nukleokapsidės baltym�� homologijos sunku gauti monokloninius antikūnus, specifiškus konkretaus viruso nukleokapsidės baltymui. Siekiant išspręsti šią problemą, buvo panaudoti chimeriniai rekombinantiniai baltymai, sukonstruoti pelės poliomos viruso pagrindinio kapsidės baltymo VP1 pagrindu, į kurį buvo įterptos nehomologiškos Nipah ir Hendra virusų nukleokapsidės baltymų sekos. Imunizacijoms panaudojus tokius chimerinius baltymus, buvo nustatyta, kad jie sukelia stiprų imuninį atsaką. Buvo sukurti nauji monokloniniai antikūnai, specifiški tik Nipah viruso nukleokapsidės baltymui ir nereaguojantys su Hendra viruso nukleokapsidės baltymu. Taip pat buvo sukurti monokloniniai antikūnai prieš baltymą-nešiklį – pelės poliomos viruso pagrindinį kapsidės baltymą VP1. Naujai sukurtų antikūnų specifiškumas buvo patvirtintas imunofermentinės analizės ir imunoblotingo metodais. Monokloninių antikūnų prieš Hendra viruso nukleokapsidės baltymą gauti nepavyko. / The aim of this study was to generate monoclonal antibodies against Hendra and Nipah virus nucleocapsid proteins. There is high homology between nucleocapsid proteins of Henipavirus genus members, therefore it is difficult to generate monoclonal antibodies that do not show any cross-reactivity with both antigens. This problem was solved by using recombinant chimeric proteins designed by insertion of non-homological segments of Hendra and Nipah virus nucleocapsid proteins into the mouse polyomavirus capsid protein VP1. Mice were immunized with these chimeric proteins and it was determined that they induce a strong immune response. Monoclonal antibodies against Nipah virus nucleocapsid protein as well as carrier protein – mouse polyomavirus capsid protein VP1 – were generated. The specificities of newly developed monoclonal antibodies were confirmed by ELISA and immunoblot. The generation of specific monoclonal antibodies against Hendra virus nucleocapsid protein failed.

The dissertation describes development and characterization of monoclonal antibodies against recombinant yeast-expressed antigens: nucleocapsid (N) proteins of human parainfluenza virus type 3, Menangle virus, hantavirus and rabies virus. The newly developed antibodies were investigated by different immunochemical assays for their specificity, affinity and ability to recognize native viruses in infected cells. It was determined that the antibodies raised against recombinant yeast-expressed viral proteins are suitable to identify virusinfected cells. These data confirmed that recombinant yeast-expressed viral N proteins possess antigenic properties similar to that of native viral nucleocapsids. The monoclonal antibodies were also used to study the antigenic structure of viral N proteins and localize their immunodominant regions. The obtained results may have impact on the development of new immunodiagnostic test systems for the detection of viral infections. The dissertation consists of the introduction, three sections, references, and the list of author’s publications. In the Introductory Chapter, the research topic, the actuality, the aim and tasks, scientific novelty and practical value of the dissertation are discussed. Author’s publications and conference reports are also presented. The first Chapter of the dissertation provides literature overview on the genome organization, structural proteins, pathogenesis and epidemiology of parainfluenza viruses, Menangle virus... [to full text] / Disertacijoje aprašomi monokloniniai antikūnai, sukurti prieš rekombinantinius mielėse susintetintus antigenus: žmogaus paragripo treciojo tipo viruso, Menangle viruso, hantavirusų bei pasiutligės viruso nukleokapsidės (N) baltymus. Sukurtieji antikūnai buvo visapusiškai charakterizuoti įvairiais imunocheminės analizės metodais, įvertintas jų specifiškumas, afiniškumas, sugebėjimas atpažinti natyvius virusus infekuotų ląstelių kultūrose. Buvo nustatyta, kad antikūnai, sukurti prieš rekombinantinius mielėse susintetintus virusų baltymus, tinka virusų nustatymui infekuotose ląstelėse. Šie tyrimai patvirtino, kad rekombinantiniai mielėse susintetinti virusu N baltymai turi panašias antigenines savybes, kaip natyvūs virusų N baltymai, formuojantys nukleokapsides. Sukurtieji monokloniniai antikūnai taip pat buvo panaudoti išsamiems minėtų virusų N baltymų antigeninės struktūros tyrimams bei imunodominuojančių sekų nustatymui. Disertaciniame darbe gauti duomenys svarbūs, kuriant naujas imunodiagnostikos sistemas, skirtas virusų infekcijoms nustatyti. Disertacija sudaro įvadas, trys skyriai, naudotos literatūros sąrašas ir autorės publikacijų sąrašas. Įvadiniame skyriuje aptariama tiriamoji problema, darbo aktualumas, formuluojamas darbo tikslas bei uždaviniai, darbo mokslinis naujumas ir praktinė reikšmė, pristatomos paskelbtos publikacijos ir pranešimai konferencijose. Pirmasis disertacijos skyrius skirtas literatūros apžvalgai: jame apibūdinamos paragripo virusų, Menangle viruso... [toliau žr. visą tekstą]