A fermentação alcoólica é susceptível à presença de contaminantes e controlar este problema é um desafio para a indústria produtora de etanol, sejam os contaminantes bacterianos ou leveduras selvagens. As leveduras selvagens ocorrem naturalmente no ambiente e nos substratos utilizados na fermentação e são mais difíceis de controlar do que contaminações por bactérias; podem causar excesso de produção de espuma, levando a perda do teor alcoólico e perda de eficiência fermentativa. Características morfológicas particulares de leveduras Saccharomyces cerevisiae podem exacerbar estes traços indesejáveis para a fermentação. Métodos de isolamento e identificação de leveduras selvagens podem consistir de testes de resistência à temperatura, avaliação por microscopia e a utilização de meios diferenciais sintéticos, que podem ser utilizados no isolamento de leveduras selvagens dos mais diversos substratos e identificação de características morfofisiológicas. O emprego de técnicas moleculares como PCR (Polymerase Chain Reaction) e DNA-fingerprinting também são empregadas, sendo capazes de detectar contaminações em pequenas quantidades, além de permitir a diferenciação a nível intra-específico. Foram avaliados 14 isolados de levedura proveniente de ambiente industrial, utilizando as leveduras CAT-1 e PE-2 como linhagens de referência, sendo avaliadas as características morfofisiológicas através de plaqueamento em meio diferenciais como WLN, BiGGY e Nagai, em conjunto com a análise microscópica das células. Os isolados foram também avaliados através de um teste de resistência de temperatura, testes de capacidade fermentativa e crescimento em microplacas em diversos meios. Por fim, foi extraído o DNA das amostras e este foi avaliado através de reação de PCR e sequenciamento a nível intra-específico. Os resultados mostraram grande variação de padrões morfológicos, presença de células deficientes respiratórias petite e crescimento consistente em temperaturas elevadas, característica esta geralmente presente em leveduras selvagens. Quanto à capacidade fermentativa, 12 dos 14 isolados apresentaram esta característica nos meios utilizados. No crescimento em microplaca, os isolados apresentaram comportamentos distintos em diferentes meios, quando comparados com as linhagens referência. Por fim, a análise molecular das amostras apresentou diferentes padrões de banda entre si e em comparação com as linhagens referência, e o sequenciamento a nível intra-específico mostrou que todos os isolados pertencem a espécie Saccharomyces cerevisiae. / Alcoholic fermentation is susceptible to the presence of contaminants and controlling this problem is a challenge for the ethanol industry, whether it\'s bacterial contaminants or wild yeasts. Wild yeast naturally occur in the environment and on substrates used in fermentation and are more difficult to control than contamination by bacteria. They may cause excessive foaming, leading to loss of the alcoholic yield and decrease of fermentative efficiency. Particular morphological traits of Saccharomyces cerevisiae yeasts may exacerbate these undesirable traits for fermentation. Methods of isolation and identification of wild yeast may consist of temperature resistance tests, evaluation by microscopy and also the use of synthetic differential media, which can be used to isolate wild yeasts from the most diverse substrates and to identify their morphophysiological characteristics. The use of molecular techniques such as PCR (Polymerase Chain Reaction) and DNA-fingerprinting are also employed, being able to detect contaminations in small quantities, besides allowing intra-specific differentiation. A total of 14 yeast isolates from an industrial environment were evaluated, using yeasts CAT-1 and PE-2 as reference strains. Morphophysiological characteristics were evaluated by plating in differential media such as WLN, BiGGY and Nagai, alongside with microscopic analysis of the yeast cells. The isolates were also evaluated according a temperature resistance test, fermentation capacity tests and a microplate growth assay in several media. Finally, the DNA was extracted from the samples and was evaluated through PCR reaction and sequencing at intra-specific level. The results showed a great variation of morphological patterns, presence of petite respiratory deficient cells and consistent growth at high temperatures, a characteristic that is generally present in wild yeasts. Regarding the fermentative capacity, 12 of the 14 isolates showed this trait in the media used. In the microplate growth assay, the isolates presented different behaviors in different media when compared with the reference strains. Finally, the molecular analysis of the samples presented different band patterns among themselves and in comparison with the reference lines, and the intra-specific sequencing showed that all the isolates belong to the species Saccharomyces cerevisiae.

A proposta desse projeto de pesquisa foi analisar e caracterizar células-tronco encontradas na polpa dentária e papila apical de um mesmo doador tratadas sob as mesmas condições de cultivo utilizando abordagens que permitem analises de componentes intracelulares que nunca antes haviam sido analisados nessas células. Para tanto, populações enriquecidas pela expressão CD146, STRO-1 e CD90 foram isoladas de terceiros molares inclusos indicados para exodontia, totalizando 16 pacientes e 16 dentes. Como controles negativos, foram utilizadas as células negativas para esses marcadores. Células positivas e negativas para cada marcador foram comparadas entre si e com os resultados dos outros marcadores. Para cada um dos marcadores e respectivos controles foram realizadas analises de cinética celular, ensaios morfológicos e ensaios subcelulares utilizando microscopia de luz sincrotron. Os dados obtidos foram submetidos à teste ANOVA e teste de Tukey (a=0,05) quando pertinente e/ou a análises descritivas. As células isoladas da polpa dentária e papila apical se comportaram diferentemente uma das outras. Nos ensaios de cinética celular, as células enriquecidas (positivas) apresentaram crescimento mais lento quanto comparados com as células não enriquecidas (negativas), independente do marcador em questão. Nos ensaios morfológicos, células CD 90+ da polpa dentária exibiram a menor área e menor perímetro quando comparadas com as CD 146+ e STRO-1+. A presença de compostos iônicos vistos por luz sincrotron mostraram maior fração de massa nas células positivas da polpa dentária. Dentre os elementos traços estatisticamente mais prevalentes foram o fósforo, cobre, zinco, potássio, estrôncio, cálcio e cloro, sendo este último presente na polpa e papila nos 3 marcadores estudados. Concluímos que tanto da polpa dentária quanto na papila apical de dentes humanos, há presença de células tronco multipotentes expressados pelos três marcadores e que apesar de serem obtidos do mesmo dente e doador e cultivados de forma iguais ela tem comportamentos diferentes. As alterações bioquímicas celulares estudadas pelos elementos traços em células separadas por diferentes marcadores foi o primeiro passo para possibilitar os conhecimentos mecanicistas vitais celulares que não são observadas em microscopia padrão. Porém, novos estudos como permitir a visualização da localização espacial de biomarcadores espectrais caracterizados, pode ajudar a consolidar os resultados aqui encontrados. Assim, a análise e classificação desse método de estudo pode ser refinado em pesquisas futuras, incluindo no uso de outros tipos de tecidos dentais para caracterizar as células tronco dentais. / The purpose of this research project was to analyze and characterize stem cells found in dental pulp and apical papilla from the same donor treated under the same culture conditions using approaches that allow analysis of intracellular components that had never before been analyzed in these cells. Therefore, populations enriched for CD146 expression, STRO-1 and CD90 were isolated from third molars indicated for extraction, totaling 16 patients and 16 teeth. As negative controls, cells negative for these markers were used. Positive and negative cells for each marker were compared and the results of other markers. For each of the markers and their controls were carried out analysis of cell kinetics, morphological tests and subcellular assays using synchrotron light microscopy. The data were submitted to ANOVA and Tukey\'s test (a = 0.05) where relevant and / or descriptive analyzes. Cells isolated from the apical papilla and dental pulp behaved differently from each other. In cell kinetics assays, enriched cells (positive) showed slower growth as compared with non-enriched cells (negative), regardless of the marker in question. In morphological studies, CD 90+ cells in the dental pulp exhibited a smaller area and lower perimeter compared to CD 146+ and STRO-1 +. The presence of ionic compounds seen by synchrotron light showed higher mass fraction of positive cells in the dental pulp. Among the most prevalent statistical trace elements are phosphorous, copper, zinc, potassium, strontium, calcium and chlorine, the latter being present in the pulp, and the papilla 3 markers studied. We conclude that both the dental pulp as the apical papilla of human teeth, there is presence of multipotent stem cells expressed the three markers and that although they are obtained from the same tooth and donor and grown in the same way it has different behaviors. The biochemical cellular changes studied by trace elements in separate cells with different markers was the first step to allow mechanistic cellular vital knowledge that is not observed in standard microscopy. However, new studies as to visualize the spatial location characterized spectral biomarkers can help consolidate the present results. Thus, the analysis and classification of the study method can be refined in future research including the use of other types of dental tissues to characterize the dental stem cell.

A proposta desse projeto de pesquisa foi analisar e caracterizar células-tronco encontradas na polpa dentária e papila apical de um mesmo doador tratadas sob as mesmas condições de cultivo utilizando abordagens que permitem analises de componentes intracelulares que nunca antes haviam sido analisados nessas células. Para tanto, populações enriquecidas pela expressão CD146, STRO-1 e CD90 foram isoladas de terceiros molares inclusos indicados para exodontia, totalizando 16 pacientes e 16 dentes. Como controles negativos, foram utilizadas as células negativas para esses marcadores. Células positivas e negativas para cada marcador foram comparadas entre si e com os resultados dos outros marcadores. Para cada um dos marcadores e respectivos controles foram realizadas analises de cinética celular, ensaios morfológicos e ensaios subcelulares utilizando microscopia de luz sincrotron. Os dados obtidos foram submetidos à teste ANOVA e teste de Tukey (a=0,05) quando pertinente e/ou a análises descritivas. As células isoladas da polpa dentária e papila apical se comportaram diferentemente uma das outras. Nos ensaios de cinética celular, as células enriquecidas (positivas) apresentaram crescimento mais lento quanto comparados com as células não enriquecidas (negativas), independente do marcador em questão. Nos ensaios morfológicos, células CD 90+ da polpa dentária exibiram a menor área e menor perímetro quando comparadas com as CD 146+ e STRO-1+. A presença de compostos iônicos vistos por luz sincrotron mostraram maior fração de massa nas células positivas da polpa dentária. Dentre os elementos traços estatisticamente mais prevalentes foram o fósforo, cobre, zinco, potássio, estrôncio, cálcio e cloro, sendo este último presente na polpa e papila nos 3 marcadores estudados. Concluímos que tanto da polpa dentária quanto na papila apical de dentes humanos, há presença de células tronco multipotentes expressados pelos três marcadores e que apesar de serem obtidos do mesmo dente e doador e cultivados de forma iguais ela tem comportamentos diferentes. As alterações bioquímicas celulares estudadas pelos elementos traços em células separadas por diferentes marcadores foi o primeiro passo para possibilitar os conhecimentos mecanicistas vitais celulares que não são observadas em microscopia padrão. Porém, novos estudos como permitir a visualização da localização espacial de biomarcadores espectrais caracterizados, pode ajudar a consolidar os resultados aqui encontrados. Assim, a análise e classificação desse método de estudo pode ser refinado em pesquisas futuras, incluindo no uso de outros tipos de tecidos dentais para caracterizar as células tronco dentais. / The purpose of this research project was to analyze and characterize stem cells found in dental pulp and apical papilla from the same donor treated under the same culture conditions using approaches that allow analysis of intracellular components that had never before been analyzed in these cells. Therefore, populations enriched for CD146 expression, STRO-1 and CD90 were isolated from third molars indicated for extraction, totaling 16 patients and 16 teeth. As negative controls, cells negative for these markers were used. Positive and negative cells for each marker were compared and the results of other markers. For each of the markers and their controls were carried out analysis of cell kinetics, morphological tests and subcellular assays using synchrotron light microscopy. The data were submitted to ANOVA and Tukey\'s test (a = 0.05) where relevant and / or descriptive analyzes. Cells isolated from the apical papilla and dental pulp behaved differently from each other. In cell kinetics assays, enriched cells (positive) showed slower growth as compared with non-enriched cells (negative), regardless of the marker in question. In morphological studies, CD 90+ cells in the dental pulp exhibited a smaller area and lower perimeter compared to CD 146+ and STRO-1 +. The presence of ionic compounds seen by synchrotron light showed higher mass fraction of positive cells in the dental pulp. Among the most prevalent statistical trace elements are phosphorous, copper, zinc, potassium, strontium, calcium and chlorine, the latter being present in the pulp, and the papilla 3 markers studied. We conclude that both the dental pulp as the apical papilla of human teeth, there is presence of multipotent stem cells expressed the three markers and that although they are obtained from the same tooth and donor and grown in the same way it has different behaviors. The biochemical cellular changes studied by trace elements in separate cells with different markers was the first step to allow mechanistic cellular vital knowledge that is not observed in standard microscopy. However, new studies as to visualize the spatial location characterized spectral biomarkers can help consolidate the present results. Thus, the analysis and classification of the study method can be refined in future research including the use of other types of dental tissues to characterize the dental stem cell.

Submitted by AMANDA LEAL DE VASCONCELLOS null (amanda-vet@outlook.com) on 2016-09-26T19:39:40Z No. of bitstreams: 1 TESE final.pdf: 2420370 bytes, checksum: 11407f34dc5b53fad76dcfcdadeb15f5 (MD5) / Rejected by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido está sem a ficha catalográfica. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2016-09-27T18:59:29Z (GMT) / Submitted by AMANDA LEAL DE VASCONCELLOS null (amanda-vet@outlook.com) on 2016-12-18T18:24:39Z No. of bitstreams: 1 TESE final.pdf: 2420370 bytes, checksum: 11407f34dc5b53fad76dcfcdadeb15f5 (MD5) / Rejected by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido está sem a ficha catalográfica. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão com o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2016-12-20T17:23:22Z (GMT) / Submitted by AMANDA LEAL DE VASCONCELLOS null (amanda-vet@outlook.com) on 2017-01-31T19:44:28Z No. of bitstreams: 1 TESE final - ficha catalográfica.docx: 4750401 bytes, checksum: dbb6b101681f0831572701d476461d32 (MD5) / Rejected by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: A versão final da dissertação/tese deve ser submetida no formato PDF (Portable Document Format). O arquivo PDF não deve estar protegido e a dissertação/tese deve estar em um único arquivo, inclusive os apêndices e anexos, se houver. Por favor, corrija o formato do arquivo e realize uma nova submissão. Agradecemos a compreensão. on 2017-02-03T12:10:01Z (GMT) / Submitted by AMANDA LEAL DE VASCONCELLOS null (amanda-vet@outlook.com) on 2017-02-05T17:51:50Z No. of bitstreams: 1 TESE final - ficha catalográfica.pdf: 2492463 bytes, checksum: 31f8926ecfbe121c3aaf71eb9b3e0bf5 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-02-09T11:36:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 vasconcellos_al_dr_jabo.pdf: 2492463 bytes, checksum: 31f8926ecfbe121c3aaf71eb9b3e0bf5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-09T11:36:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vasconcellos_al_dr_jabo.pdf: 2492463 bytes, checksum: 31f8926ecfbe121c3aaf71eb9b3e0bf5 (MD5) Previous issue date: 2016-07-29 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O objetivo do presente estudo foi padronizar a metodologia de citologia de lavado vesical preparado pelo método de citocentrifugação, avaliar o padrão das células epiteliais de transição em cães e aplicabilidade clínica da citopatologia esfoliativa como método complementar de diagnóstico de doenças vesicais em cães. O estudo foi realizado em duas fases. A primeira incluiu 34 pacientes sem anormalidade ou doença vesical (cães adultos, machos e fêmeas), para padronização da metodologia e caracterização da celularidade normal. Na segunda fase foram avaliados 95 pacientes (cães adultos, machos e fêmeas), com ou sem sinais do trato urinário inferior. Em ambas as fases os cães foram avaliados por meio de exames de rotina, com destaque para sedimentoscopia de urina, urocultura e exame ultrassonográfico da bexiga, além da citologia de lavado vesical preparada pelo método de citocentrifugação (colorações de Papanicolaou, Giemsa, Rosenfeld modificado e Gram – somente na segunda fase). Os resultados obtidos indicaram que a técnica empregada no estudo para recuperação celular realizada com barbotagens de três ciclos utilizando 1mL/kg de solução salina, se mostrou eficaz para avaliação de células uroteliais de cães sadios. Com o segundo estudo, que incluiu pacientes com doença vesical, concluiu-se que o conjunto de avaliações para o diagnóstico de doença vesical empregado são complementares e as contribuições de cada exame variam de acordo com o tipo de enfermidade a ser diagnosticada. A citologia de lavado vesical se mostrou como exame tão relevante quanto a sedimentoscopia no que se refere às características de sensibilidade e especificidade para detectar sadios e doentes, mas com as vantagens de conferir refinamento aos diagnósticos ou viabilizar o diagnóstico não concluído pelos exames anteriores. / The objective of this study was to standardize the methodology for cytology bladder washing prepared by cytospin method to evaluate the pattern of epithelial transition cells in dogs and the clinical applicability of exfoliative cytology as a complementary method for of bladder diseases diagnosis in dogs. The study was conducted in two phases. The first one included 34 patients without bladder abnormality or disease (adult dogs, male and female), for standardization of the methodology and characterization of the typical cellularity. In the second phase it was evaluated a group of 95 patients (adult dogs, male and female), with or without lower urinary tract signs. In both phases the dogs were evaluated by routine tests, especially sediment of urine, urine culture and ultrasound bladder examination, as well as cytology of bladder washing prepared by cytospin (stains of Papanicolaou, Giemsa, Rosenfeld modified and Gram - only in the second phase). The results indicated that the technique used in the study for cell recovery, performed with three barbotage cycles using 1 mL/kg of saline, was effective for urothelial cells evaluation from healthy dogs. In the second study, which included patients with bladder disease, it is concluded that the employed set of evaluations for bladder disease diagnosis are complementary and the contributions of each test vary with the type of disease to be diagnosed. The cytology of bladder washing showed was as relevant as the sediment, considering the sensitivity and specificity to detect healthy and sick patients, but with the advantages of giving refinement to enable diagnosis or the diagnosis not completed by previous tests.

Submitted by João Arthur Martins (joao.arthur@ufpe.br) on 2015-04-08T19:25:32Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO UFPE - THIAGO GOMES DE FIGUEIREDO GONDIM GONDIM.pdf: 1777887 bytes, checksum: 04a3dbfbbbc52b848fcc8cb7fed2ab4f (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-08T19:25:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO UFPE - THIAGO GOMES DE FIGUEIREDO GONDIM GONDIM.pdf: 1777887 bytes, checksum: 04a3dbfbbbc52b848fcc8cb7fed2ab4f (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-02-28 / CAPES E PROPESQ/UFPE / As células-tronco mesenquimais constituem uma rara população de células progenitoras com capacidade de diferenciação multipotencial e parecem constituir uma ferramenta atrativa no contexto da engenharia de tecidos e da terapia celular. O desenvolvimento de novos materiais pode ser citado como um setor de vanguarda para a engenharia de tecidos; e os biopolímeros despontam como biomateriais inovadores com vasta aplicação na biologia celular, especialmente em função de sua biocompatibilidade. Nesse contexto, temos como principal objetivo estudar a evolução das características morfológicas das células-tronco mesenquimais de cordão umbilical humano quando cultivadas sobre suportes de biopolímero de cana-de-açúcar (gel ou membranas), enfatizando-se a potencial capacidade dessas células diferenciarem-se em queratinócitos. Cordões umbilicais foram obtidos de parturientes do Setor de Obstetrícia do Hospital das Clínicas/UFPE (n=40, com 30 a 40 semanas de idade gestacional). Veias de cordões umbilicais foram preenchidas com colagenase tipo IV e mantidas a 37º C. As células coletadas foram centrifugadas por 10 minutos e ressuspendidas em meio DMEM suplementado com 20% de soro fetal bovino, mistura de antibióticos e plaqueadas em garrafas (105 células/mL). Os aspectos morfológicos das células fenotipicamente semelhantes às células-tronco mesenquimais foram avaliados com 3, 5, 10, 14, 28, 40 e 45 dias, através de microscópio invertido com contraste de fase e sistema de captura de imagem. Com 72h de cultivo sobre um suporte comercial, observamos que as células-tronco mesenquimais apresentaram-se com aspecto fibroblastóide difuso e a formação de monocamada ocorreu com cinco dias. Células cultivadas em placas contendo o gel de biopolímero de cana-de-açúcar também apresentaram morfologia semelhante a fibroblastos (72h), porém mais alongadas e dispostas radialmente; com formação de monocamada em torno de sete dias. Quando cultivadas sobre membranas desse biomaterial, notamos com o auxílio de microscópio invertido, células com formato variando de arredondadas a fibroblastóides, e através da microscopia eletrônica de varredura foi possível detalhar essa variação no formato das células e perceber a emissão de finos prolongamentos (nanofibras). Nos ensaios de diferenciação das células-tronco mesenquimais em queratinócitos usando-se o gel de biopolímero de cana-de-açúcar como suporte, observamos que inicialmente grande parte das células conservou a morfologia arredondada e apresentaram-se de forma enfileirada, especialmente em algumas áreas do referido gel, e em torno de 14 dias a típica forma cubóide-arredondada das colônias de queratinócitos pode ser observada. Os resultados do nosso estudo sugerem que os suportes (gel ou membranas) de biopolímeros de cana-de-açúcar foram capazes de favorecer o crescimento e a diferenciação das células-tronco mesenquimais e mais experimentos deverão ser realizados para que o cultivo dessas células nessas condições, possivelmente, possa fornecer uma fonte eticamente não controversa e facilmente acessível de queratinócitos para futuras aplicações experimentais e clínicas.

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:32:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6447_1.pdf: 6584452 bytes, checksum: c8a5793291a13a26d4d865eaa587582f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / Ricinus communis L. é popularmente conhecida como carrapateira, mamona e pertence à família das Euforbiáceas. Possui três sementes em cada fruto, das quais é extraído o óleo de rícino. A fração não-oleosa, que é resultante da expressão do óleo, contém proteína tóxica (ricina) que é utilizada como adubo orgânico. Neste estudo foi avaliada a influência do Ricinus communis na atividade antitumoral, fragilidade osmótica, marcação (in vitro) de elementos sanguíneos com pertecnetato de sódio (Na99mTcO4) e morfologia celular; na biodistribuição com Tc-99m em animais sadios e com indução tumoral e análise de proteínas totais; como também a marcação e controle radioquímico do extrato com Tc-99m. Após 48 horas do implante do Sarcoma 180, os camundongos machos foram tratados com o extrato durante sete dias, sendo sacrificados após este período e os tumores dissecados e pesados. Na fragilidade osmótica, amostras de sangue de ratos Wistar foram incubadas com o extrato de R. communis e com soluções de NaCl (0,4; 0,7; 0,9%). Na marcação das células vermelhas do sangue (in vitro), amostras de sangue foram obtidas de ratos Wistar e incubadas com diferentes concentrações de R. communis, para o controle foi utilizado NaCl 0,9% e adicionados o cloreto estanoso (SnCl2) e o Tc-99m. As frações de plasma (P) e de hemácias (H) foram separadas e, também, precipitadas com ácido tricloroacético a 5% obtendo as frações solúvel (FS) e insolúvel (FI), sendo analisado também a morfologia das células. A percentagem de radioatividade (%ATI) de cada uma das frações foi calculada. Na biodistribuição foi realizado o implante tumoral nos dois grupos tratados com R. communis e o controle com solução salina 0,9%, injetados por via IP, em dose única por 7 dias, os animais foram sacrificados no 8° dia, 20 minutos após a administração do Tc-99m. Os órgãos foram isolados e a percentagem de radioatividade (%ATI) de cada órgão foi calculada; do sangue foi retirado o soro dos animais e feito a avaliação das proteínas totais. O extrato foi marcado com pertecnetato de sódio e cloreto estanoso, avaliando o controle radioquímico. O extrato protéico de R. communis apresentou resultados satisfatórios na inibição tumoral com 67% e 72% de resposta quando comparado com o controle. Os resultados de fragilidade osmótica indicam que houve aumento na taxa de hemólise na concentração de 0,125 mg/mL e que não houve ocorrência de alterações na marcação de células vermelhas do sangue nas concentrações de 6,25% para 25% do extrato quando comparado com o % do controle, entretanto, foi observado um decaimento de 49,69% na concentração de 100%, verificando que nestas concentrações ocorrem alterações morfológicas nas células do sangue e que a radiação nas frações insolúveis promoveu a redução da radioatividade. Na biodistribuição houve redução na captação do Tc-99m na maioria dos órgãos analisados, sendo significativo nos rins grupo 1, músculo e cérebro; e aumento no estômago (G2) e nos rins (G3); em animais tumorais, essa redução foi significativa, principalmente no coração, pulmão, rins e tumor, apresentando uma concentração de proteínas totais nos animais tumorais de 34,62 e 34% com relação ao % controle. Quanto ao controle radioquímico através da cromatografia de filtração observouse que o extrato marcado com Tc-99m apresentou duas frações com 130.007 e 494.592 cpm, e que estas frações foram analisadas pela marcação das células sanguíneas, com % de ATI de 61,88 e 41,32 % nas frações 1 e 2, respectivamente. Portanto conclui-se que o extrato de R. communis possui grande potencial antitumoral, alterando a captação do Tc- 99m nos testes in vitro e in vivo, competindo com o Tc-99m no sítios de ligação das hemácias devido à capacidade de oxidação do íon estanoso, pela competição nos sítios de ligação do íon pertecnetato, modificando assim as estruturas celulares

A fermentação alcoólica é susceptível à presença de contaminantes e controlar este problema é um desafio para a indústria produtora de etanol, sejam os contaminantes bacterianos ou leveduras selvagens. As leveduras selvagens ocorrem naturalmente no ambiente e nos substratos utilizados na fermentação e são mais difíceis de controlar do que contaminações por bactérias; podem causar excesso de produção de espuma, levando a perda do teor alcoólico e perda de eficiência fermentativa. Características morfológicas particulares de leveduras Saccharomyces cerevisiae podem exacerbar estes traços indesejáveis para a fermentação. Métodos de isolamento e identificação de leveduras selvagens podem consistir de testes de resistência à temperatura, avaliação por microscopia e a utilização de meios diferenciais sintéticos, que podem ser utilizados no isolamento de leveduras selvagens dos mais diversos substratos e identificação de características morfofisiológicas. O emprego de técnicas moleculares como PCR (Polymerase Chain Reaction) e DNA-fingerprinting também são empregadas, sendo capazes de detectar contaminações em pequenas quantidades, além de permitir a diferenciação a nível intra-específico. Foram avaliados 14 isolados de levedura proveniente de ambiente industrial, utilizando as leveduras CAT-1 e PE-2 como linhagens de referência, sendo avaliadas as características morfofisiológicas através de plaqueamento em meio diferenciais como WLN, BiGGY e Nagai, em conjunto com a análise microscópica das células. Os isolados foram também avaliados através de um teste de resistência de temperatura, testes de capacidade fermentativa e crescimento em microplacas em diversos meios. Por fim, foi extraído o DNA das amostras e este foi avaliado através de reação de PCR e sequenciamento a nível intra-específico. Os resultados mostraram grande variação de padrões morfológicos, presença de células deficientes respiratórias petite e crescimento consistente em temperaturas elevadas, característica esta geralmente presente em leveduras selvagens. Quanto à capacidade fermentativa, 12 dos 14 isolados apresentaram esta característica nos meios utilizados. No crescimento em microplaca, os isolados apresentaram comportamentos distintos em diferentes meios, quando comparados com as linhagens referência. Por fim, a análise molecular das amostras apresentou diferentes padrões de banda entre si e em comparação com as linhagens referência, e o sequenciamento a nível intra-específico mostrou que todos os isolados pertencem a espécie Saccharomyces cerevisiae. / Alcoholic fermentation is susceptible to the presence of contaminants and controlling this problem is a challenge for the ethanol industry, whether it\'s bacterial contaminants or wild yeasts. Wild yeast naturally occur in the environment and on substrates used in fermentation and are more difficult to control than contamination by bacteria. They may cause excessive foaming, leading to loss of the alcoholic yield and decrease of fermentative efficiency. Particular morphological traits of Saccharomyces cerevisiae yeasts may exacerbate these undesirable traits for fermentation. Methods of isolation and identification of wild yeast may consist of temperature resistance tests, evaluation by microscopy and also the use of synthetic differential media, which can be used to isolate wild yeasts from the most diverse substrates and to identify their morphophysiological characteristics. The use of molecular techniques such as PCR (Polymerase Chain Reaction) and DNA-fingerprinting are also employed, being able to detect contaminations in small quantities, besides allowing intra-specific differentiation. A total of 14 yeast isolates from an industrial environment were evaluated, using yeasts CAT-1 and PE-2 as reference strains. Morphophysiological characteristics were evaluated by plating in differential media such as WLN, BiGGY and Nagai, alongside with microscopic analysis of the yeast cells. The isolates were also evaluated according a temperature resistance test, fermentation capacity tests and a microplate growth assay in several media. Finally, the DNA was extracted from the samples and was evaluated through PCR reaction and sequencing at intra-specific level. The results showed a great variation of morphological patterns, presence of petite respiratory deficient cells and consistent growth at high temperatures, a characteristic that is generally present in wild yeasts. Regarding the fermentative capacity, 12 of the 14 isolates showed this trait in the media used. In the microplate growth assay, the isolates presented different behaviors in different media when compared with the reference strains. Finally, the molecular analysis of the samples presented different band patterns among themselves and in comparison with the reference lines, and the intra-specific sequencing showed that all the isolates belong to the species Saccharomyces cerevisiae.

Orientador: Daniel Carneiro Carrettiero. / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC. Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, 2013