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Ocorrência e diversidade genética associada à infecção por micoplasmas hemotrópicos em suínos domésticos no Brasil /Sonálio, Karina January 2020 (has links)
Orientador: Luis Guilherme de Oliveira / Resumo: Mycoplasma suis e Mycoplasma parvum se ligam fortemente aos eritrócitos e causam hemoplasmose em suínos. Os animais infectados podem ser portadores assintomáticos ou apresentar sinais inespecíficos, acometendo todas as faixas etárias. No Brasil, os estudos sobre a ocorrência e a diversidade genética associada aos hemoplasmas suínos (HS) são escassos. Portanto, este trabalho teve como objetivo detectar, quantificar e caracterizar a diversidade genética da HS em animais terminados de granjas tecnificadas no estado de Goiás, Brasil. Amostras de sangue total de 450 de 30 granjas diferentes localizadas no estado de Goiás, foram coletadas em tubos contendo ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) e armazenadas a -80 °C. A extração de DNA seguiu o método “in house” descrito previamente. A PCR convencional (cPCR) direcionada ao gene endógeno gapdh foi realizada para evitar resultados falso-negativos nos testes seguintes. Os ensaios de PCR em tempo real quantitativa (qPCR) foram realizados a fim de detectar e quantificar DNA de Mycoplasma baseado no gene 16S rRNA para HS. Para avaliar a diversidade genética da HS, realizou-se a clonagem e sequenciamento dos genes 16S rRNA e 23S rRNA para hemoplasmas. Os resultados da qPCR mostraram uma ocorrência de HS de 68,89%, onde todas as fazendas tinham pelo menos dois animais positivos. A quantificação na qPCR variou de 8.43x10-1 a 4.69x106 µL, e 52.71% das amostras apresentaram 1x103 copies/µL. Além disso, o teste do coeficiente de Spearman reve... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Mycoplasma suis and Mycoplasma parvum are strongly bound to erythrocytes and cause hemoplasmosis in pigs. Infected animals can be asymptomatic carriers or have nonspecific signs, affecting all age groups. In Brazil, studies on the occurrence and genetic diversity associated with porcine hemoplasmas (PH) are scarce. Therefore, this work aimed to detect, quantify and characterize the genetic diversity of PH in finished animals from technified farms in the state of Goiás, Brazil. Whole blood samples from 450 animals from 30 different farms located in the state of Goiás, were collected in tubes containing ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) and stored at -80°C. DNA extraction followed the "in house" method previously described. Conventional PCR (cPCR) targeting the gapdh endogenous gene was performed to avoid false negative results in the following tests. Quantitative real-time PCR (qPCR) assays were performed in order to detect and quantify Mycoplasma DNA based on the 16S rRNA gene for PH. To assess the genetic diversity of PH, cloning and sequencing of the 16S rRNA and 23S rRNA genes for hemoplasmas was performed. The results of the qPCR showed a PH occurrence of 68.89%, where all farms had at least two positive animals. The quantification in the qPCR varied from 8.43x10-1 to 4.69x106 µL, and 52.71% of the samples presented 1x103 copies / µL. Furthermore, the Spearman coefficient test revealed that the occurrence of PH is inversely associated with the number of births per we... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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