Orientador: Cristina Antoniali Silva / Coorientadora: Lusiane Maria Bendhack / Banca: Graziela Scalianti Ceravolo / Banca: Michele Mazzaron de Castro / Resumo: A enzima NAD(P)H oxidase (NOX) é a principal fonte de espécies reativas de oxigênio (ERO) no sistema cardiovascular e sua atividade e expressão podem ser regulada pela angiotensina (Ang) II. Demonstramos previamente que o tratamento crônico com apocinina, um inibidor de NOX, reduziu a pressão arterial e preveniu o desenvolvimento da disfunção endotelial em SHR. Estes efeitos da apocinina foram associados a redução de geração de ERO e ao aumento da biodisponibilidade de óxido nítrico em células endoteliais de SHR. Dados de nosso laboratório mostraram que o tratamento com apocinina, também reduziu o efeito pressor da Ang II em SHR. A associação entre Ang II, via receptores AT1, e o estresse oxidativo tem sido implicada na patogênese da hipertensão. Levantamos a hipótese que a apocinina, ao alterar a sinalização redox, reduz a expressão de receptores AT1 e a resposta vasoconstritora da Ang II em SHR. Neste estudo, avaliamos o efeito do tratamento crônico com apocinina sobre as respostas contráteis à Ang II em vasos sanguíneos de SHR e os mecanismos envolvidos nestes efeitos, utilizando ensaios bioquímicos, biomoleculares e funcionais. SHR foram tratados com apocinina (30 mg/Kg, v.o.) da 4ª a 10ª semana de vida e ratos Wistar foram utilizados como controle normotenso. Analisamos os efeitos da apocinina na capacidade antioxidante plasmática, expressão de NOX, geração de ERO, níveis de nitrato/ nitrito, expressão de receptores AT1 e AT2, e respostas vasoconstritor... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: NAD(P)H oxidase (NOX) is the major source of reactive oxygen species (ROS) in the cardiovascular system and its activity and expression could be regulated by angiotensin (Ang) II. We previously demonstrated that chronic treatment with apocynin, a NOX inhibitor, reduced blood pressure and prevented the development of endothelial dysfunction in SHR. These effects of apocynin have been associated with reduced generation of ROS and increased bioavailability of nitric oxide in endothelial cells of SHR. Data from our laboratory showed that treatment with apocynin also reduced the pressor effect of Ang II on SHR. The association between Ang II, via AT1 receptors, and oxidative stress has been implicated in the pathogenesis of hypertension. We hypothesized that apocynin, altering redox signaling, could reduce expression of AT1 receptors and Ang II vasoconstrictor response in SHR. In this study, we evaluated the effect of chronic treatment with apocynin on the contractile responses to Ang II in blood vessels of SHR and the mechanisms involved in the effects of these on biochemical, biomolecular and functional assays. SHR were treated with apocynin (30 mg/kg, p.o.) from the 4 th to the 10th week of life and Wistar rats were used as normotensive control. Analysis of the effects of apocynin on plasma antioxidant capacity, NOX expression, ROS generation, nitrate/ nitrite levels, expression of AT1 and AT2 receptors, and vasoconstrictor responses to Ang II on mesenteric and aortic arteries.... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-06-30T12:19:46Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Georgia Maria Ricardo Felix dos Santos_Mestrado.pdf: 1018948 bytes, checksum: eaff2e3a96759aec9a4685114c9635cb (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-30T12:19:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Georgia Maria Ricardo Felix dos Santos_Mestrado.pdf: 1018948 bytes, checksum: eaff2e3a96759aec9a4685114c9635cb (MD5) Previous issue date: 2013-08-15 / CAPEs / Elevados níveis de hiperglicemia durante a gestação pode ter consequências deletérias para prole que inclui doenças cardiovasculares (DCV) e renais. As complicações cardiovasculares do diabetes resultam de um conjunto de fatores que envolvem a hiperglicemia crônica, a formação excessiva dos produtos finais de glicação avançada (AGEs) e de oxidação proteica (AOPP) e a ativação do fator de transcrição nuclear kappaB (NF-κB), associada à liberação de citocinas pró-inflamatórias. Portanto, é de grande relevância a elucidação de mecanismos envolvidos na gênese e/ou manutenção do processo oxidativo que pode ser perpetuada na prole exposta à hiperglicemia. O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos da exposição intra-uterina a hiperglicemia (> 200 mg/dL) sobre AGEs, AOPP, bem como a expressão proteica do NF-κB, a expressão gênica da interleucina-1 beta (IL-1ß) e Nox 4 (homólogo da subunidade da NADPH oxidase) na prole adulta. Para isto, o DG foi induzido no sétimo dia de gestação com dose única de estreptozotocina (STZ, 42mg/kg, i.p.) dissolvida em tampão citrato (veículo). Fêmeas controles receberam apenas veículo. A prole foi dividida em dois grupos de acordo com o tratamento da mãe: controle não diabético (ND) e diabetes gestacional (DG). Na idade adulta, foram realizadas as dosagens de glicose, triglicerídeos, colesterol total e HDL. A concentração plasmática de AGEs foi determinada por fluorescência e a de AOPP por espectrofotometria, os níveis de peroxidação lipídica pelas substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). A expressão proteica do NF-κB foi analisada em aortas através de Western Blot. Foi utilizada reação em cadeia de polimerase quantitativa em tempo real (RTq-PCR) para avaliar a expressão gênica da IL-1ß e Nox 4. Os níveis de glicose, triglicerídeos, colesterol total foram significativamente (p < 0,05) maiores na prole DG quando comparadas a prole ND. A prole DG apresentaram níveis elevados de AGEs (p < 0,01), AOPP (p < 0,05) e TBARS (p < 0,05). Em aorta, a expressão proteica do NF-κB foi mais elevada (p < 0,05) no grupo DG do que no ND. Adicionalmente, foi observado um aumento da expressão gênica da IL-1ß e da Nox4. O número de néfrons desses animais foi significativamente reduzido (p < 0,001). A associação de níveis elevados de estresse oxidativo e interleucina-1 beta podem ser responsáveis pela estimulação da expressão proteica do NF-κB. Juntas, essas alterações em um ambiente hiperglicêmico, com indícios de comprometimento renal, poderiam desencadear alterações vasculares. / Experimental evidences support the hypothesis that diseases can be programmed during the period intrauterine. This concept of programming fetal has been used as basis for knowledge of some chronic diseases, such the cardiovascular. Cardiovascular disease has been associated with hyperglycemia, increased level of advanced glycation end products (AGE) and of advanced oxidation products (AOPP) activate the transcription factor nuclear factor-kappaB (NF-κB) associated with inflammatory cytokine liberation. Therefore, the present study was designed to examine the alterations produced by maternal diabetes over the AGEs, AOPP, NF-κB protein expression, and mRNA expressions of IL-1β and Nox4 in adult offspring rats. Maternal diabetes was induced in female Wistar rats with a single dose of streptozotocin (STZ; 42 mg/kg, i.p.) on the 7th day of pregnancy. Control animals only received STZ vehicle. The offspring were divided into two groups: control non-diabetic (ND) and gestational diabetes (DG). Plasma levels of glucose, total cholesterol, HDL cholesterol and triglycerides were analyzed through biochemical measurements. Plasma levels of AGEs and AOPPs were detected using spectrofluorimetry and spectrophotometry, respectively. Lipid peroxidation was assessed in liver tissue by measuring thiobarbituric acid reactive substances (TBARS). The NF-κB protein expression was evaluated by Western blot. The mRNA levels of IL-1β and Nox4 were detected quantitatively by real time polymerase chain reaction (real-time PCR). In the DG offspring, it was observed that plasma levels of glucose, total cholesterol, HDL cholesterol and triglycerides were higher when compared to the control group. AGEs, AOPP and TBARS concentration were significantly higher in animals exposed to the DG compared with ND. The NF-κB protein expression was higher (p < 0,05) in aorta from DG than in ND. In addition, the expression of IL-1β and Nox4 mRNA was elevated. The number of nephron in DG was significantly reduced (p < 0,001). These results also support the involvement of oxidative stress species in IL-1β induced NF-κB expression. Together, these data suggest that hyperglycemia is a risk factor for vascular alterations.

No description available.

Kaposi's sarcoma (KS), caused by the oncogenic Kaposi's sarcoma herpesvirus (KSHV), is an angiogenic tumor characterized by intense angiogenesis, inflammation and proliferation of KSHV-infected spindle cells. We describe the characterization of a mouse model of KS by transfection of a KSHV bacterial artificial chromosome (KSHVBac36) into mouse bone marrow endothelial-lineage cells which generated a cell (mECK36) that forms KS-like tumors in mice. Our results define mECK36 as a biologically sensitive animal model of KSHV-dependent KS with the following characteristics: (1) the pathological phenotype is a consequence of KSHV gene expression in normal progenitor cells subjected to in vivo growth conditions, (2) the histopathologic phenotype of the tumors resembles KS lesions, and (3) the model is suitable for analysis of vGPCR-driven tumorigenesis in the context of the whole KSHV genome. The mechanism by which vGPCR promotes tumorigenesis is not fully understood. The characterization of a Rac1 transgenic mouse model that produces KS-like lesions that highly resemble human KS has helped us to identify the potential role of Rac1, which is activated by vGPCR, in the pathogenesis of KS. The results from the RacCA transgenic mouse suggest that viral and host genes triggering Rac1 and ROS production may play an important role in KS tumorigenesis. We set out to determine how vGPCR physiologically activates Rac1 in KSHV-infected cells in the KS model mECK36. We found that KSHV oncogenesis in mECK36 is promoted by vGPCR activation of a paracrine oncogenic mechanism through PDGF-BB, which requires a Rac1- and ROS-mediated loop, leading to STAT3 transcriptional activation of c-Myc, VEGF and KSHV latent viral gene expression. We also found that the latency-associated nuclear antigen (LANA) upregulates the PDGFR in vivo, priming latently-infected cells to the PDGF signaling pathway. This oncogenic mechanism can be targeted with the antioxidant N-acetylcysteine (NAC) and FDA-approved PDGF receptor inhibitors to control KSHV-induced tumorigenesis. Our results highlight a ROS-dependent axis whereby Rac1 activating oncogenes and inflammatory signaling drive paracrine stimulation of neoplastic growth and angiogenesis in neighboring cells, defining this axis and its components as attractive anti-tumor targets in KS pathogenesis.

Orientador: Antonio Condino Neto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T23:42:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gomez_LinaAndrea_D.pdf: 4776023 bytes, checksum: a1c947f4c3db64220a2153a255069581 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A NADPH oxidase das células fagocíticas é um sistema enzimático encarregado da produção de espécies reativas do oxigênio, as quais são essenciais durante a resposta imune inata contra uma grande variedade de microorganismos como bactérias e fungos. Um dos principais componentes deste sistema é a proteína citosólica p67PHOX codificada pelo gene NCF2 localizado no braço longo do cromossomo 1. Mutações no gene NCF2 resultam em uma das formas autossômicas recessivas da doença granulomatosa crônica (DGC), uma imunodeficiência primária caracterizada por infecções graves e recorrentes. Recentemente descrevemos mudanças nucleotídicas em alguns pacientes deficientes de p67PHOX onde aparentemente essas alterações não foram responsáveis pelo fenótipo, mas que poderiam modificar de alguma forma a expressão do gene. Para determinar se essas alterações correspondem a polimorfismos gênicos, analisamos sua ocorrência na população normal. A primeira substituição é uma transição C ? T na posição -23 da região 5' reguladora do gene. Dos 100 sujeitos avaliados, 67% foram homozigotos para o alelo C, 32% foram heterozigotos e só 1% foram homozigotos para o alelo T. A segunda mudança nucleotídica corresponde à transição A->G na posição -21 da região 3' terminal do íntron 10 (IVS10-21A?G), essa substituição foi analisada em 114 indivíduos dos quais 41% foram homozigotos para A, 49% foram heterozigotos e 24% homozigotos para G. Esses dois polimorfismos estão localizados dentro de seqüências necessárias para o início da transcrição (C?T at -23) e para a formação do splicing (IVS10-21A?G) e por isto podem alterar a expressão do gene p67PHOX, e conseqüentemente diminuir a atividade do sistema NADPH oxidase. Na análise da seqüência com o polimorfismo no intron 10 (IVS10-21A->G), observamos espécies anormais de mRNA nos indivíduos sadios. Nos genótipos analisados algumas moléculas de RNAm não possuem o exon 11. O efeito funcional do polimorfismo -23C/T no gene p67PHOX foi analisado medindo a atividade da luciferase entre construtos, contendo toda a região promotora com o alelo T e com o alelo C, mas não se observaram diferenças / Abstract: The NADPH oxidase of phagocytic cells is an enzymatic system that through the production of reactive oxygen species is essential for the innate immune response against a variety of bacteria and fungi. One of its essential components is pfyf"0*, a 67-kDa cytosolic protein encoded by the NCF2 gene located in the long arm of chromosome 1. Varied mutations involving the NCF2 gene result in an autosomal recessive form of chronic granulomatous disease (CGD), a primary immunodeficiency characterized by severe and recurrent infections. We have recently described different nucleotide changes in some p67-^jAor-deficient patients that apparently were not responsible for the CGD phenotype, but they could modify to some extent gene expression. To determine if two of these changes corresponded to genetic polymorphisms, we analyzed their occurrence in healthy donors. The first substitution corresponded to C-"T transition at position -23 of the 5' regulatory region of the gene. Among 100 evaluated subjects, 67% were homozygous for the allele containing C, 32% were heterozygous, and 1% were homozygous for T. The second nucleotide change corresponded to A >G transition in position -21 of the 3' end of intron 10 (TVSlf>-21A-"G). This substitution was analyzed in 114 subjects: 41% were homozygous for A, 49% were heterozygous, and 24% were homozygous for G Both polymorphisms are located within sequences necessary for initiating gene transcription (C-"T at -23) and for RNA splicing (IVS10-21A->G). Therefore, they may alter 067¿°^ gene expression and consequently decrease the activity of NADPH oxidase system. The sequence analysis for the polymorphism located in the intron 10 (TVS 10-21 A -Kr) show generation of the abnormal mRNA species in normal individuals; some molecules of the mRNA do not contain the intron 11 in all subject genotypes. The functional effect of the -23 07 polymorphism in the p67-PHOX was evaluated measuring luciferase activity of the T allelic p67-PHOX promoter and C allelic promoter, but no differences were observed / Doutorado / Saude da Criança e do Adolescente / Doutor em Saude da Criança e do Adolescente

Thesis (Ph. D.)--Cornell University, January, 2009. / Vita. Includes bibliographical references (leaves 147-166).

Orientador: Valdecir Farias Ximenes / Coorientador: Luiz Marcos da Fonseca / Banca: Maria Luiza Zeraik / Banca: Iêda Maria Marinez Paino / Banca: Daniel Rinaldo / Banca: Iracilda Zeppone Carlos / Resumo: Inúmeras patologias têm a sua gênese e/ou progressão relacionadas à produção desregulada de intermediários oxidantes. O complexo multienzimático NADPH oxidase é um dos componentes de maior relevância neste contexto, pois é uma das principais fontes de ânion superóxido no organismo animal. Sendo expresso em inúmeros tecidos, incluindo leucócitos e células do tecido endotelial, o desenvolvimento de inibidores eficientes deste complexo enzimático poderá significar uma nova terapêutica para o tratamento de doenças inflamatórias crônicas. Com objetivo de explorar a relação entre a estrutura molecular, as propriedades químicas e atividades biológicas, utilizamos o éster fenetílico do ácido cafeico (CAPE) como inibidor do complexo enzimático NADPH oxidase e comparamos sua eficácia com o seu precursor ácido cafeico e os derivados, éster fenetílico do ácido cinâmico e o ácido clorogênico, correlacionando-os a respeito a sua hidrofobicidade, propriedades redox e inibição do complexo NADPH oxidase em leucócitos ativados. A hipótese seria de que um aumento da hidrofobicidade provocado pela esterificação do ácido cafeico poderia facilitar o seu acesso à membrana celular e assim alterar seu efeito como possível inibidor de NADPH Oxidase. Os resultados, em ensaios in vitro, mostraram que as alterações na hidrofobicidade não provocaram alterações significativas no potencial de oxidação e potencial antioxidantes dos compostos testados. Quando testados em leucócitos ativados (modelos ex vivo),... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Several diseases have their genesis and / or progression related to unregulated production of oxidants intermediates. The multienzymatic complex NADPH oxidase is one of the most important components in this context because it is a major source of superoxide anion in animal organisms. It is expressed in numerous tissues, including leukocytes and endothelial tissue cells. Developing effective inhibitors of this enzyme complex may indicate a new therapy for the treatment of chronic inflammatory diseases. Several studies have described numerous anti-inflammatory properties attributed to caffeic acid phenethyl ester (CAPE), an active component found in propolis. In order to explore the relationship between the molecular structure, chemical properties and biological activities, we used CAPE to inhibit the enzyme complex NADPH oxidase and compare its efficacy with the its precursor caffeic acid and derivatives, phenethyl ester of cinnamic acid and chlorogenic acid, correlating them with regard to hydrophobicity, redox properties and inhibition of NADPH oxidase complex on activated leukocytes. The hypothesis was that an increase of hydrophobicity caused by the esterification of caffeic acid could facilitate access to cell membranes and thereby alter its effect as a possible inhibitor of NADPH oxidase. The results (in vitro), showed that the changes in hydrophobicity did not provoke significant changes in the oxidation potential and antiradical potency of the tested compounds. But whe... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A Doença de Alzheimer (DA) tem sido relacionada com danos oxidativos. O objetivo desse trabalho foi investigar o envolvimento NADPH oxidase 2 (Nox2), uma enzima que produz espécies reativas de oxigênio, na memória, na expressão de proteínas relacionadas à DA, na inflamação e morte neuronal no hipocampo na patologia Alzheimer-símile induzida por estreptozotocina (STZ), comparando os efeitos dessa droga em camundongos nocautes para Nox2 e camundongos selvagens (WT). A expressão gênica de Nox2 foi aumentada em animais WT após a injeção de STZ, além disso, esses animais apresentaram déficit de memória, aumento na fosforilação de TAU, na expressão de beta-amilóide, neurofilamentos, caspase-3 e marcadores de astrócitos e microglia, além de aumento na liberação de citocinas inflamatórias, após o tratamento. Estes efeitos não foram observados após a deleção de Nox2. A deleção de Nox2 aumentou a produção basal de IL-10, sugerindo que este pode ser um mecanismo pelo qual os camundongos nocautes são protegidos contra a patologia Alzheimer-símile induzida por STZ. / Alzheimer\'s disease (AD) has been linked to oxidative stress. The goal of this study was to investigate the involvement of NADPH oxidase 2 (nox2), an enzyme that produces reactive oxygen species, in memory, in AD-related proteins expression, inflammation and neuronal death in the hippocampus in the streptozotocin (STZ)-induced AD-like pathology by comparing the effects of that drug on mice lacking Nox2 and wild type (Wt) mice. Nox2 gene expression was increased in Wt mice after STZ injection. Moreover, these animals presented impairment in memory, increased phosphorylation of Tau and increased amyloid-&#946; protein, neurofilaments, caspase-3 and astrocyte and microglial markers expression, in addition to increased inflammatory cytokines release after treatment. Nox2 depletion prevented these effects. The baseline IL-10 levels were found increased following Nox2 deletion, suggesting that this is one mechanism by which mice lacking Nox2 are protected against STZ-induced AD-like pathology.

Linhagens secretoras de insulina, como a BRIN-BD11, são utilizadas para o estudo do mecanismo de secreção de insulina estimulado pela glicose (GSIS). Essas células expressam o GPR40, que quando ativado por ácidos graxos (AG), potencializam a GSIS. Considerando que as espécies reativas de oxigênio (EROs) podem estar relacionadas com a secreção de insulina mediada por AG, este estudo tem como foco avaliar se há envolvimento do GPR40 na GSIS e na produção de EROs, via NADPH oxidase (NADPHox), em células BRIN-DB11. A ativação do GPR40 foi feita com agonista GW9508 (GW). A secreção de insulina (SI), o conteúdo de superóxido (CS) e ativação da NADPHox foram analisados em resposta a glicose na presença ou ausência de GW (20mM). O envolvimento da NADPHox no CS induzido pelo GW foi analisado após inibição da NADPHox. O aumento da concentração de glicose paralela com aumento da SI, causa redução no CS. A presença do GW potencializa a SI em altas concentrações de glicose, aumenta o CS, e aumenta a translocação da subunidade p47phox do plasma para a membrana. Com a inibição da NADPHox o efeito do GW não ocorre. Os dados confirmam um efeito positivo do GPR40 na secreção de insulina estimulada pela glicose. O GW ativa a NADPHox resultando em um aumento do CS nas células BRIN-BD11. / BRIN-BD11, an Insulin secreting cell line, are used to study the mechanisms of glucose-stimulated insulin secretion (GSIS). These cells express GPR40, which is activated by fatty acids (FA) and potentiates GSIS. Considering that reactive oxygen species (ROS) is a signal that modulates insulin secretion (IS) induced by FA, this study aimed to investigate the involvement of GPR40 in ROS production, via NADPH oxidase (NADPHox), and in GSIS. To activate the GPR40 its agonist, GW9508 (GW), was used. IS and superoxide production (SP) were analyzed in response to increasing glucose concentrations (IGC), with or without GW (20mM). The activation of NADPHox was analyzed. The involvement of NADPHox on SP induced by GW was also evaluated using a small interference RNA or using the NADPHox inhibitor, VAS2870 (12mM). The presence of GW potentiated the IS at high glucose concentrations, together with an increased effect on SC. This increase was paralleled by an increase in the translocation of p47phox to the plasma membrane. Moreover, the inhibition of NADPHox abolished the GW9508 effect. These results show a positive effect of the GPR40 activation in GSIS. Additionally, GW9508 activates NADPHox resulting in an increase in the SC in BRIN-BD11 cells.

Os genes relógio são responsáveis pelo ritmo circadiano e homeostase de diversos sistemas biológicos, incluindo o pâncreas endócrino. Nas células &beta; são de grande importância para a regulação do metabolismo e da secreção de insulina (SI), e sua ausência pode levar ao desenvolvimento do diabetes. A NADPH oxidase (NOX) é um complexo enzimático responsável pela produção do ânion superóxido através da redução do oxigênio molecular. Em ilhotas pancreáticas, a NOX participa da regulação do metabolismo da glicose e da SI, através da modulação do estado redox intracelular. O objetivo do nosso estudo foi verificar se a desregulação dos genes relógio mediada pela ausência de Bmal1 seria capaz de modular a NOX e o estado redox nas células &beta; pancreáticas, influenciando assim a SI. Observamos que a ausência de Bmal1 alterou a atividade e expressão da NOX, desregulando o estado redox intracelular. Essas alterações levaram à redução da viabilidade celular e mudanças na resposta à estimulação com glicose, resultando em uma deficiência na principal função da célula &beta; a SI. / Clock genes are responsible for homeostasis and circadian rhythm in various biological systems, including endocrine pancreas. In &beta; -cells, they are important for the regulation of metabolism and insulin secretion (IS), and its absence can lead to development of diabetes. NADPH oxidase (NOX) is an enzymatic complex responsible for production of superoxide anion by reducing molecular oxygen. In pancreatic islets, NOX regulates glucose metabolism and IS through modulation of the intracellular redox state. The aim of our study was to investigate whether dysregulation of clock genes mediated by Bmal1 suppression would be able to modulate NOX activity and redox state in pancreatic &beta; cells, thus influencing the SI. In this work, the lack of Bmal1 altered the activity and expression of NOX, deregulating the intracellular redox state. These changes led to reduced cell viability and changes in cell response after stimulation with glucose, resulting in a deficiency in &beta; cell main function, GSIS.