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Estudo de feijões transgênicos e convencionais através da RMN HR-MAS / Study of beans by transgenic and conventional NMR HR-MASChoze, Rafael 15 April 2011 (has links)
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Previous issue date: 2011-04-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / In this work, a new methodology which allows differentiating conventional
and transgenic common beans, grown in greenhouse or under field
conditions, based on modifications in chemical composition using 1H HRMAS
NMR and infrared is proposed. Through NMR it was possible to identify
differences in chemical composition between the beans, according to
transgenic or conventional source, especially in aromatic hydrogen region.
The 1H, gHSQC and gHMBC experiments conducted to the flavonoids
quercetin and myricetin structures, present in higher contents in genetically
modified cultivars. Moreover, through 1H HR-MAS NMR was also possible to
identify, in mixture, the aminoacids threonine, valine, isoleucine, and lysine,
and the oligosaccharides stachyose, raffinose, and verbascose. The NMR
spectra of Pérola 5.1 and BRS Pontal 5.1, to which the transgene was
received from Olathe 5.1, using crosses and backcrosses, showed the same
signal pattern observed in Olathe 5.1 bean. This study also demonstrated
that the influence of typical variables from field planting conditions had no
significant influence on the ability of separation between cultivars transgenic
and conventional. This methodology was corroborated by multivariate data
analysis of the 1H NMR spectra. On the other hand, the infrared studies
showed less conclusive results. The study of the influence of exposure to air
indicated a decrease in the flavonoid myricetin content. For quercetin no
change was observed. This study also points out the simplicity of using the
HR-MAS NMR technique for food analyses. The measurement is highly
simplified because it does not require any pretreatment of the sample apart
from the addition of a small amount of D2O necessary to produce
homogeneous dough and a field frequency lock. Moreover, due to the high
concentration of the sample, measurement time in HR-MAS NMR is very
short. / Neste trabalho, propõe-se uma metodologia que permita diferenciar
feijões convencionais e transgênicos, cultivados em casa de vegetaçao sob
condições controladas ou em campo, baseados em modificações na
composição química, utilizando RMN 1H HR-MAS e infravermelho. Através
da RMN foi possível identificar diferenças na composição química entre os
feijões, segundo sua origem convencional ou transgênica, especialmente na
região de hidrogênios aromáticos. Os espectros de 1H HR-MAS, gHSQC e
gHMBC conduziram às estruturas dos flavonóides quercetina e miricetina,
presentes em maior concentração no feijão geneticamente modificado. Além
disso, através da técnica de HR-MAS, foi possível caracterizar os
aminoácidos treonina, alanina, valina, isoleucina e lisina e os
oligossacarídeos estaquiose, verbascose e rafinose, em mistura. As
linhagens BRS Pontal 5.1 e Pérola 5.1, derivadas de cultivares de grande
aceitação comercial, BRS Pontal e Pérola, e que receberam o transgene do
feijão Olathe 5.1, através de cruzamentos e retrocruzamentos, apresentaram
o mesmo perfil de variação química observado para as cultivares Olathe
Pinto e Olathe 5.1. Esse estudo demonstrou ainda, que as variáveis
edafoclimáticas, típicas de condições de plantio no campo, não tiveram
influência significativa sobre a capacidade de separação entre cultivares
transgênicos e convencionais. Esta metodologia foi corroborada pela análise
multivariada dos dados dos espectros de RMN de 1H. Por outro lado,
estudos realizados através da técnica de infravermelho demonstraram que
os resultados foram menos conclusivos, quando comparados àqueles
obtidos através de RMN. O estudo da influencia da exposição da cultivar ao
ar, indicou uma variação no teor do flavonóide miricetina, visualizado pelo
decréscimo da intensidade de seus sinais no espectro. Para o flavonóide
quercetina, nenhuma variação foi observada. Por fim, esse trabalho aponta
para a simplicidade do uso da técnica HR-MAS para análises de alimentos.
A medida é extremamente simplificada, pois não requer nenhum prétratamento
da amostra além da moagem e adição de gotas de D2O.
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