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Nanobiotecnologia aplicada à transgênese animal. / Nanobiotecnologia aplicada à transgênese animal

Campos, Vinicius Farias 29 July 2011 (has links)
Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_vinicius_farias_campos.pdf: 556217 bytes, checksum: 4c9dc7811c567f171aaebfafce2d2254 (MD5) Previous issue date: 2011-07-29 / Nanobiotechnology has provided new scientific and technological knowledge in distinct areas making it a priority area of research in developed and developing countries. The sperm-mediated gene transfer (SMGT) technique may become more simple, efficient and cost-effective technique for the generation of transgenic animals. The development of nanocomposites able to carry foreign DNA into the nucleus of cells with greater efficiency allows techniques such as SMGT be improved. The NanoSMGT is a technique used to generate transgenic animals in which nanotechnology is used to enhance the ability of sperm to capture exogenous DNA. The objective of this study was to determine whether cationic nanopolymer or halloysite clay nanotubes are able to transfect the exogenous DNA to unsorted and sex-sorted bovine sperm then evaluate whether these sperm are able to transmit transgene to in vitro fertilized bovine embryos. Using real-time PCR, we found that the cationic nanopolymer is capable of introducing exogenous DNA into unsorted and sex-sorted bovine sperm without negative effects to sperm motility and viability. Was also demonstrated for the first time that cationic nanopolymer or halloysite clay nanotubes are able to increase both the sperm DNA transfection of as the transmission of the transgene to bovine embryos produced in vitro. These results demonstrate that NanoSMGT can be a viable technique for producing transgenic bovine embryos. / A nanobiotecnologia tem proporcionado novos avanços científicos e tecnológicos em diversas áreas do conhecimento tornando-se assim área de pesquisa prioritária em países desenvolvidos e em desenvolvimento. A transferência gênica mediada por espermatozóides (SMGT) poderá se tornar a técnica mais simples, eficiente e com melhor custo-benefício para a geração de animais transgênicos. O desenvolvimento de nanocompósitos capazes de carrear o DNA exógeno para o interior de células com maior eficiência permite que técnicas como a SMGT sejam aperfeiçoadas. A NanoSMGT é uma técnica utilizada para a geração de animais transgênicos onde a nanotecnologia é utilizada para incrementar a habilidade dos espermatozóides em capurar o DNA exógeno. O objetivo do presente trabalho foi de verificar se nanopolímero catiônico ou nanotubos de haloisita são capazes de transfectar o DNA exógeno para o interior de espermatozóides bovinos sexados e não sexados e em seguida verificar se estes espermatozóides transfectados são capazes de gerar embriões bovinos transgênicos. Utilizando PCR em tempo real, verificou-se que o nanopolímero catiônico é capaz de introduzir o DNA exógeno em espermatozóides bovinos sexados e não sexados sem danos para a motilidade e viabilidade espermática. Também foi demonstrado pela primeira vez que o nanopolímero catiônico ou os nanotubos de haloisita são capazes de incrementar tanto a transfecção de DNA em espermatozóides como a transmissão do transgene para embriões bovinos produzidos in vitro. Estes resultados demonstram que a NanoSMGT pode ser uma técnica viável para a produção de embriões bovinos transgênicos.

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