Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Las vacunas basadas en células dendríticas (DCs) han surgido como una herramienta prometedora en la inmunoterapia contra el cáncer debido a su capacidad para estimular la respuesta inmune antitumoral. Recientemente, se ha mostrado que DCs estimuladas con un lisado celular derivado de tres líneas tumorales de melanoma alogénicas (TRIMEL) sometidas a heat shock, inducen una potente respuesta inmunológica en pacientes con melanoma. El lisado TRIMEL funciona tanto como una fuente de antígenos asociados a tumor (TAA), así como induciendo la maduración de las DCs mediante patrones moleculares asociados a daño, del inglés damage-associated molecular patterns molecules (DAMPs). Dada las características de este lisado, se identificó el perfil proteómico de TRIMEL con y sin heat shock (HS), dando como resultado 71 proteínas diferencialmente sobreexpresadas por efecto del HS. Luego de aplicar criterios adicionales, se seleccionaron las proteínas Haptoglobina (HP), EIF4e y Anexina IV (ANX4), como candidatas a DAMPs desconocidos que puedan explicar, al menos en parte, la capacidad del lisado TRIMEL en la activación de DCs. Por lo anterior, el objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de estas proteínas sobre distintos marcadores de maduración en DCs humanas. Se generaron DCs a partir de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) de ocho donantes sanos. HP, EIF4e y ANX4 se utilizaron como estímulo de maduración por si solas o en combinación con TRIMEL sin HS. Mediante citometría de flujo se evaluó la expresión de diversas moléculas de superficie asociadas a DCs maduras: MHC-I, MHC-II, CD80, CD83, CD86 y CCR-7. Los resultados obtenidos en esta tesis mostraron que al estimular DCs con EIF4e y HP se produce un incremento significativo en la expresión de los marcadores de superficie MHC-I, CD80, CD83, CD86 y CCR7, sugiriendo que estas proteínas podrían actuar como DAMPs de manera independiente. Sin embargo, es necesario evaluar otros parámetros de funcionalidad celular como el perfil de citoquinas secretado por las DCs estimuladas, capacidad migratoria y la interacción con linfocitos T (LT), los cuales podrían demostrar de forma más concluyente la actividad de estas proteínas como DAMPs. / Adscrito a Proyecto Fondecyt 11130607

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / ANTECEDENTES: El envejecimiento de un organismo trae consigo diversas repercusiones a nivel sistémico, entre ellas, la disminución de la capacidad reparativa de los tejidos. En el tejido conectivo sano, los fibroblastos se encuentran en estado de reposo y presentan una baja actividad mitótica y biosintética, sin embargo, al producirse una injuria son capaces de incrementar su tasa proliferativa para participar de la respuesta reparativa. En una herida aguda, los factores de crecimiento y quimioquinas liberadas por las plaquetas estimulan directamente a los fibroblastos residentes, un ejemplo de esto, es la acción mitogénica que tiene el factor de crecimiento derivado de las plaquetas sobre los fibroblastos. El suero sanguíneo contiene una gran variedad de estos factores de crecimiento capaces de inducir la proliferación, sin embargo, no se conoce el efecto del envejecimiento sobre este proceso. OBJETIVO: Cuantificar la proliferación de fibroblastos gingivales humanos jóvenes incubados con suero sanguíneo de 3 grupos: “jóvenes” (18-22 años), “mediana edad” (30-48 años) y “envejecidos” (50-65 años) mediante inmunofluorescencia para Ki-67 y citometría de flujo para síntesis de ADN. Evaluar las concentraciones de factor de crecimiento derivado de plaquetas presentes en los sueros de los distintos grupos mediante ensayo ELISA. RESULTADOS: En este trabajo logramos determinar un aumento de la proliferación de los fibroblastos gingivales al ser incubados con suero de voluntarios jóvenes, no así al ser incubados con suero de voluntarios de mediana edad o envejecidos. Esto se evaluó por medio de marcaje para Ki-67 en el núcleo y por síntesis de ADN evaluado por citometría de flujo. Además, los niveles del factor de crecimiento derivado de plaquetas fueron significativamente mayores en el suero proveniente de donante joven versus el suero proveniente de donante envejecido. CONCLUSIÓN: El suero de voluntarios de una mediana edad en adelante, produce una disminución en la proliferación de fibroblastos gingivales humanos. Tanto la proliferación en células incubadas con suero de voluntarios envejecidos como los niveles de factor de crecimiento derivado de plaquetas disminuyen con la edad. / Adscrito a Proyecto FONDECYT 111400064 "Crosstalk between gingival fibroblast and macrophages in wound healing during aging" (MC)