Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Las vacunas basadas en células dendríticas (DCs) han surgido como una herramienta prometedora en la inmunoterapia contra el cáncer debido a su capacidad para estimular la respuesta inmune antitumoral. Recientemente, se ha mostrado que DCs estimuladas con un lisado celular derivado de tres líneas tumorales de melanoma alogénicas (TRIMEL) sometidas a heat shock, inducen una potente respuesta inmunológica en pacientes con melanoma. El lisado TRIMEL funciona tanto como una fuente de antígenos asociados a tumor (TAA), así como induciendo la maduración de las DCs mediante patrones moleculares asociados a daño, del inglés damage-associated molecular patterns molecules (DAMPs). Dada las características de este lisado, se identificó el perfil proteómico de TRIMEL con y sin heat shock (HS), dando como resultado 71 proteínas diferencialmente sobreexpresadas por efecto del HS. Luego de aplicar criterios adicionales, se seleccionaron las proteínas Haptoglobina (HP), EIF4e y Anexina IV (ANX4), como candidatas a DAMPs desconocidos que puedan explicar, al menos en parte, la capacidad del lisado TRIMEL en la activación de DCs. Por lo anterior, el objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de estas proteínas sobre distintos marcadores de maduración en DCs humanas. Se generaron DCs a partir de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) de ocho donantes sanos. HP, EIF4e y ANX4 se utilizaron como estímulo de maduración por si solas o en combinación con TRIMEL sin HS. Mediante citometría de flujo se evaluó la expresión de diversas moléculas de superficie asociadas a DCs maduras: MHC-I, MHC-II, CD80, CD83, CD86 y CCR-7. Los resultados obtenidos en esta tesis mostraron que al estimular DCs con EIF4e y HP se produce un incremento significativo en la expresión de los marcadores de superficie MHC-I, CD80, CD83, CD86 y CCR7, sugiriendo que estas proteínas podrían actuar como DAMPs de manera independiente. Sin embargo, es necesario evaluar otros parámetros de funcionalidad celular como el perfil de citoquinas secretado por las DCs estimuladas, capacidad migratoria y la interacción con linfocitos T (LT), los cuales podrían demostrar de forma más concluyente la actividad de estas proteínas como DAMPs. / Adscrito a Proyecto Fondecyt 11130607

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Las vacunas basadas en células dendríticas (DCs) han surgido como una herramienta prometedora en la inmunoterapia contra el cáncer debido a su capacidad para estimular la respuesta inmune antitumoral. Recientemente, se ha mostrado que DCs estimuladas con un lisado celular derivado de tres líneas tumorales de melanoma alogénicas (TRIMEL) sometidas a shock térmico, inducen una potente respuesta inmunológica en pacientes con melanoma. El lisado TRIMEL funciona tanto como una fuente de antígenos tumorales, así como induciendo la maduración de las DCs mediante patrones moleculares asociados a daño (DAMPs). Dada las características de este lisado, se identificó el perfil proteómico de TRIMEL, dando como resultado 71 proteínas diferencialmente sobre-expresadas. Así, se seleccionaron las proteínas Haptoglobina (HP), EIF4E y Anexina A4 (ANXA4), como candidatas a nuevos DAMPs. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de estas proteínas y sus combinaciones para inducir la maduración de DCs humanas y su consecuente migración. Mediante técnicas in vitro se generaron DCs para ser estimuladas con las proteínas de estudio y sus combinaciones. Los resultados obtenidos indican que las proteínas por si solas no son capaces de generar cambios en el fenotipo de las DCs; sin embargo, sus combinaciones si logran algunos resultados. Además, la migración se vió favorecida por HP, EIF4E y las combinaciones de HP+EIF4E, EIF4E+ANXA4 y HP+EIF4E+ANXA4. A pesar de los resultados, es necesario realizar más estudios que permitan validar o descartar que las proteínas estudiadas tengan funciones como DAMPs. / Adscrito a Proyecto Fondecyt 11130607