Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / Preñeces ovinas en condiciones de hipoxia hipobárica resultan en fetos de menor tamaño, además de una serie de modificaciones placentarias, tales como en su vascularización, número y tamaño de los placentomas, entre otras. La hipoxia hipobárica se manifiesta como un estado de estrés oxidativo en estos animales, lo cual es factible de atenuar con un tratamiento antioxidante. En este trabajo se determinó la expresión y actividad de la isoenzima endotelial de la óxido nítrico sintasa (eNOS), molécula involucrada en la angiogénesis y vasodilatación, eventos necesarios para que una gestación llegue a término. Se utilizaron ovejas criollas nativas de una condición de alta altitud, provenientes de Caquena, a 4.200 m.s.n.m. (HL) y ovejas criollas nativas de una condición cercana a nivel del mar (LL). Ambos grupos se mantienen en una condición de aproximadamente 500 m.s.n.m. donde cursan su gestación. La mitad de cada grupo fue suplementada, junto a la ración diaria de heno, con 500 mg de vitamina C y 350 UI de vitamina E por animal, hasta la recolección de muestras. Al término de los 100 días de gestación se determinó la expresión y actividad de eNOS en placentomas, separando la porción materna de la fetal, en todos los grupos. Se detectó la presencia de eNOS en todas las muestras analizadas mediante la técnica de Dot blot; esta característica no presentó cambios significativos ni por origen de las ovejas ni por compartimento analizado, materno o fetal. La actividad de eNOS tuvo un comportamiento similar, ya que no varió significativamente entre los grupos en estudio. El tratamiento con vitaminas C+E, no generó un cambio considerable en la presencia y actividad de eNOS en ovejas que gestan a una altura cercana a nivel del mar, ya sean nativas de alta altitud o de una condición cercana a nivel del mar. Esto no excluye un efecto beneficioso de las vitaminas antioxidantes en ovejas que cursan su gestación en alta altitud / Proyecto FONDECYT 1070405

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / La exposición de ovejas a la altura disminuye la fertilidad. Esto se asocia a la hipoxia hipobárica y al estrés oxidativo secundario a la hipoxia. Este fenómeno ha sido estudiado en ovejas gestantes situadas a 3.600 m.s.n.m, a las que se les ha suministrado antioxidantes, observándose un efecto beneficioso tanto en la madre como en las crías, cuyos resultados varían según el tiempo de residencia en altura. En este trabajo se evaluó la expresión inmunohistoquímica de la óxido nítrico sintasa endotelial (eNOS) y el factor de crecimiento fibroblástico tipo 2 (FGF-2) en folículos ováricos y cuerpos lúteos, en respuesta a la exposición por largo o corto tiempo a la altura, así como el efecto de la administración de vitaminas antioxidantes, en ciclos estrales sin concepción en ovejas. A nivel folicular la expresión de la eNOS fue mayor en los animales mantenidos a baja altura y solo se observó un efecto significativo de las vitaminas en este mismo grupo de animales, provocando una disminución de la expresión del péptido. El FGF-2 en folículos no varió significativamente. La expresión de eNOS en cuerpo lúteo, aumentó significativamente (p< 0,05) en ovejas expuestas recientemente a la altura, lo que no se observó en ovejas bajo estas mismas condiciones, con suministro de vitaminas. FGF-2 fue menor en ovejas recientemente expuestas a la hipoxia. La administración de vitaminas antioxidantes disminuyó su expresión en ovejas nativas de altura, pero lo incrementó en las recién expuestas. En conclusión, la expresión inmunohistoquímica de eNOS y FGF-2 en respuesta a la hipoxia/estrés oxidativo difiere entre las diferentes estructuras ováricas / Proyecto FONDECYT 1100189

Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias Animales y Veterinarias mención en Patología Animal / El presente estudio se fundamenta en la hipótesis que la prevención del estrés oxidativo en gestaciones ovinas que cursan en un ambiente de altura, también previene la sobreexpresión de HIF-1 que induce la angiogénesis placentaria. Cuarenta ovejas criollas de segundo parto fueron separadas en cuatro grupos: originarias de baja altura que gestaron en su ambiente (BB), originarias de baja altura que gestaron en la altura (BA), originarias de la altura que gestaron a nivel del mar (AB), originarias de la altura que gestaron en su ambiente (AA). La mitad de cada grupo fue suplementado diariamente vía oral con 500 mg de vitamina C y 350 UI de vitamina E. A los 100 días de gestación se midieron gases sanguíneos y se extrajeron placentomas a fin de determinar la expresión y localización inmunohistoquímica del factor inducido por hipoxia (HIF-1 ). Los resultados indicaron la presencia de inmunoreactividad a HIF-1 en los grupos de animales tratados y no tratados con terapia antioxidante, con menor intensidad de expresión en el grupo tratado, sin modificar la localización de éste. Los controles negativos de la técnica no mostraron inmunoreactividad al factor. Los gases sanguíneos evidenciaron la presencia de un estado hipoxémico en los grupos de gestación en altura. Cada variable analizada en forma individual (origen, altura de gestación y administración de vitaminas), mostró diferencias significativas entre los grupos tratados y no tratados, siendo la administración de antioxidantes la variable que mostró las diferencias más significativas (p 0,001). Los animales que presentaron la menor expresión del factor fueron los pertenecientes a los grupos con tratamiento antioxidante BAV y ABV, mientras que los grupos que presentaron la mayor expresión fueron animales sin tratamiento antioxidante BA y AB. En el grupo de corta exposición a la altura (BA) se observó el mayor efecto de la terapia antioxidante (BAV) en relación a la expresión de HIF-1 , mientras que el grupo originario de baja altura no mostró diferencias significativas entre los grupos tratados (BBV) y los no tratados (BB). En conclusión, la administración de vitaminas antioxidantes disminuye la expresión de HIF-1 , ayudando a contrarrestar los efectos del daño oxidativo producido por la exposición a hipoxia hipobárica de altura en gestaciones ovinas. / The present study evaluated the hypothesis that oxidative stress in ovine pregnancy at high altitudes can be prevented and also the overexpression of HIF-1 as inductor of placentary angiogenesis. Fourty creole ewes were divided in four groups according to the altitude in which gestation occured: low-native ewes maintained at low altitude (BB), low-native ewes maintained at high altitude (BA), high-native ewes maintained at low altitude (AB), high-native ewes maintained at high altitude (AA). Half of each group received daily oral supplements of vitamin C (500 mg) and E (350 UI). At 100 days of gestation blood gases were measured and plancentomes were recovered for immunohistochemical evaluation of hipoxia inducible factor HIF- 1 . Our results show positive immunoreactivity in all groups, with a lesser expression in the treated group and without changing the factor location. Controls were negative to the immunoreaction. Blood gases showed the presence of a hypoxemic state in the high altitude groups. The origin of the animals as well as the altitude in which gestation was carried out and the vitamin administration showed statistical differences in all groups, but the antioxidant therapy registered the most meaningful differences (p 0,001). The BAV and ABV groups exhibit the lesser expression of HIF-1 , whereas the respectively non treated groups (BA-AB) showed the mayor expression. In the new-coming altitude group (BA) we observed the mayor antioxidant therapy effect (BAV), whereas the low native group did not show any difference between the treated (BBV) and no treated animals (BB). In conclusion, antioxidant supplementation diminishes the HIF-1 expression helping to counteract the effects produced by oxidative damage in high altitude hypobaric hypoxia sheep pregnancy. / Financiamiento: Proyecto Fondecyt 1070405.

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / El presente estudio evaluó los efectos de la hipoxia hipobárica y de la suplementación con vitaminas antioxidantes sobre la expresión de HIF-1α y VEGF, en folículos ovulatorios y cuerpo lúteo durante el ciclo reproductivo no concepcional en ovejas. Para ello se utilizaron 36 ovejas, divididas equitativamente en 6 grupos: grupo originario de altura y mantenidas en altura (HH); grupo originario de altura, mantenidas en altura, con suplementación antioxidante (HHV); grupo originario de nivel del mar y llevados a la altura (LH); grupo originario de nivel del mar, llevados a la altura, con suplementación antioxidante (LHV); grupo originario de nivel del mar y mantenidas a nivel del mar (LL); grupo originario de nivel del mar, mantenidas a nivel del mar, con suplementación antioxidante (LLV). Cada oveja del grupo suplementado con vitaminas antioxidantes recibió una dosis diaria de vitamina C (500 mg) y vitamina E (350 UI). Se extrajeron ovarios con folículo preovulatorio y ovarios con cuerpo lúteo al primer día y quinto día luego de detectarse el tercer celo postsincronización respectivamente. Se realizó la técnica de inmunohistoquímica para detectar la expresión de los factores HIF-1α y VEGF en cortes de tejido ovárico. Los resultados indicaron que la expresión de HIF-1α en folículos preovulatorios fue mayor en las ovejas del nivel del mar llevadas a la altura (P<0,001), sin observarse efecto de la suplementación con vitaminas antioxidantes. En cuerpo lúteo, HIF-1α fue mayor en las ovejas mantenidas en altura (P<0,001) y menor en las ovejas suplementadas con vitaminas antioxidantes (P<0,001). La expresión de VEGF en los folículos preovulatorios fue mayor en las ovejas originarias de altura y originarias del nivel del mar expuestas a la altura (P<0,05). En estos grupos la suplementación con vitaminas antioxidantes disminuyó la expresión de la proteína (P<0,05). La expresión de VEGF en cuerpo lúteo mostró la misma tendencia que en los folículos. Se puede concluir que la hipoxia de altura induce una sobreexpresión de HIF-1α y VEGF tanto en el folículo preovulatorio como en el cuerpo lúteo. Esto puede ser parte de un mecanismo adaptativo para incrementar la vascularización de estos tejidos y con ello el aporte de oxígeno. Además, las vitaminas antioxidantes reducen el efecto de la altura sobre la expresión de ambas proteínas, lo que confirma la presencia de estrés oxidativo asociado a la hipoxia hipobárica / Proyecto FONDECYT 1100189

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En ambientes de altura, la fertilidad de las ovejas se ve afectada negativamente por efecto de la hipoxia, el estrés oxidativo o ambos. Este efecto ha logrado ser revertido en algunos casos con la suplementación de vitaminas antioxidantes. Los efectos de la altura podrían verse reflejados en la estructura y función ovárica, por lo que es este trabajo se estudiaron las poblaciones foliculares en ovarios de ovejas nativas de altura, recientemente expuestas a la altura y ovejas del nivel del mar, tratadas y no tratadas con vitamina C y E. Las poblaciones foliculares fueron estudiadas mediante observación microscópica de cortes histológicos provenientes de ovarios extraídos quirúrgicamente al día 5 del ciclo estral. La población folicular fue clasificada según estadio de desarrollo en folículos primordiales, folículos en crecimiento, folículos preovulatorios, folículos atrésicos y cuerpos lúteos. Los resultados mostraron que la hipoxia hipobárica causa una disminución del número de folículos primordiales, folículos en crecimiento y folículos atrésicos. En el caso del recuento de cuerpos lúteos, se encontró que las ovejas que ciclaban en altura tendían a aumentar el número de estos. Los folículos preovulatorios no mostraron diferencias. Además, se pudo demostrar que el efecto negativo de la hipoxia hipobárica sobre los folículos primordiales y en crecimiento pudo ser parcialmente revertido al suplementar a las ovejas con vitaminas antioxidantes C y E lo que nos indica que el daño provocado en estas poblaciones foliculares se debe, en parte, al estrés oxidativo producto de la hipoxia. Con los resultados de este estudio se puede concluir que la exposición a hipoxia hipobárica no afecta a todos los componentes de la dotación folicular ovárica y que, el daño oxidativo está presente solo en el caso de los folículos primordiales y en crecimiento. Aun cuando se pudieron demostrar efectos negativos de la hipoxia y el estrés oxidativo sobre la dinámica folicular, no se pudo respaldar que la hipoxia o el estrés oxidativo logren afectar el resultado final de esta. / Proyecto Fondecyt 1100189