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Sazonalidade reprodutiva em machos de tartaruga (Kinosternon scorpioides) de vida livre no Nordeste brasileiro evidenciado por imunolocalização de enzimas esteroidogênicas no testículo e epidídimo / Reproductive seasonality in male turtles (Kinosternon scorpioides) of free life in Northeast Brazil evidenced by immunolocalization of steroidogenic enzymes in the testis and epididymis

Viana, Diego Carvalho 09 March 2016 (has links)
No Estado do Maranhão, na região da Baixada Maranhense, presenta na fauna silvestre o réptil Kinosternon scorpioides, um quelônio de água doce popularmente conhecido como jurará e que possui valor social, econômico e ambiental para os ribeirinhos da cidade de São Bento. Este estudo contempla suas características biológicas reprodutivas baseadas em seu ambiente natural, com o intuito de permitir a preservação e o estabelecimento de planos de manejo reprodutivo e de uso sustentável da espécie. Recentemente poucos estudos em todo o mundo tratam sobre os aspectos do ciclo reprodutivo de tartarugas em face das características endócrinas, na América do Sul estudos desse tipo são recentes e escassos, sendo assim este é o primeiro estudo, que se tem conhecimento, que elucida um padrão sazonal reprodutivo da espécie K. scorpioides, associando hormônios gonadais com aspectos comportamentais. Trinta e oito animais adultos tiveram seus órgãos reprodutivos caracterizados para as enzimas esteroidogênicas P450 aromatase, P450c17 e PNADPH redutase através de imunomarcação e blotting, além de índice gonadossomático, morfometria e concentração de testosterona, corticosterona e estradiol pela técnica de radioimunoensaio. As mudanças biométricas, morfometria celular e a esteroidogênese testicular entre os períodos chuvoso e seco sugerem que o estrógeno produzido pelas células de leydig podem afetar a produção e a apoptose de células germinais durante o processo de espermatogênese, e a presença das enzimas P450aromatase e P450c17 em células de leydig acompanhados com a recrudescência testicular também reforça a ideia, de que elas podem desempenhar um papel na quiescência testicular. Esse trabalho evidenciou que as enzimas citocromo P450, citocromo P450c17 e NADPH-citocromo P450-redutase estão presentes no testículo e epidídimo nos diferentes períodos climáticos e podem estar relacionados à síntese de testosterona em tartarugas concordando com os diferentes achados para biometria e espermiogênese nos períodos chuvoso e seco, o que, nos leva a sugerir um estado de quiescência durante o período seco e atividade espermatogênica no período chuvoso, semelhante ao que ocorre com as espécies que apresentam comportamento reprodutivo sazonal / In the state of Maranhão, in the lowland region, the reptile Kinosternon scorpioides, a freshwater chelonian, popularly known as swear has social, economic and environmental value to the riparian of the city of São Bento. This study includes reproductive biological characteristics based on their natural environment in order to enable the preservation and the establishment of reproductive management plans and sustainable use of the species. To date, few studies around the world address the aspects of the reproductive cycle of the turtles in the face of the endocrine features. In South America, these studies are recent and scarce. So this is the first study that elucidates a reproductive seasonal pattern of the species K. scorpioides, by associating gonadal hormones with behavioral aspects. Thirty-eight adult animals had their reproductive organs characterized for P450 steroidogenic enzyme aromatase, P450c17 and NADPH reductase by immunostaining and immunoblotting, and gonadossomatic index, morphology and concentration of testosterone, corticosterone and estradiol by radioimmunoassay. Biometric changes, cell morphology and testicular steroidogenesis between the rainy and dry seasons suggests that the estrogen produced by the leydig cells can affect the production and apoptosis of germ cells during spermatogenesis process; and the presence of P450aromatase and P450c17 enzymes in the leydig cells accompanied with testicular recrudescence also reinforces the idea that they may play a role in testicular quiescence. This work showed that the cytochrome P450 enzymes, P450c17 and NADPH-cytochrome P450 reductase are present in the testis and epididymis at different climatic periods and may be related to testosterone synthesis in turtles agreeing to the different findings for biometrics and spermiogenesis in and dry rainy periods. These findings suggest a state of quiescence during the dry season and spermatogenic activity during the rainy season, similar to those found in species with seasonal reproductive behavior
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Sazonalidade reprodutiva em machos de tartaruga (Kinosternon scorpioides) de vida livre no Nordeste brasileiro evidenciado por imunolocalização de enzimas esteroidogênicas no testículo e epidídimo / Reproductive seasonality in male turtles (Kinosternon scorpioides) of free life in Northeast Brazil evidenced by immunolocalization of steroidogenic enzymes in the testis and epididymis

Diego Carvalho Viana 09 March 2016 (has links)
No Estado do Maranhão, na região da Baixada Maranhense, presenta na fauna silvestre o réptil Kinosternon scorpioides, um quelônio de água doce popularmente conhecido como jurará e que possui valor social, econômico e ambiental para os ribeirinhos da cidade de São Bento. Este estudo contempla suas características biológicas reprodutivas baseadas em seu ambiente natural, com o intuito de permitir a preservação e o estabelecimento de planos de manejo reprodutivo e de uso sustentável da espécie. Recentemente poucos estudos em todo o mundo tratam sobre os aspectos do ciclo reprodutivo de tartarugas em face das características endócrinas, na América do Sul estudos desse tipo são recentes e escassos, sendo assim este é o primeiro estudo, que se tem conhecimento, que elucida um padrão sazonal reprodutivo da espécie K. scorpioides, associando hormônios gonadais com aspectos comportamentais. Trinta e oito animais adultos tiveram seus órgãos reprodutivos caracterizados para as enzimas esteroidogênicas P450 aromatase, P450c17 e PNADPH redutase através de imunomarcação e blotting, além de índice gonadossomático, morfometria e concentração de testosterona, corticosterona e estradiol pela técnica de radioimunoensaio. As mudanças biométricas, morfometria celular e a esteroidogênese testicular entre os períodos chuvoso e seco sugerem que o estrógeno produzido pelas células de leydig podem afetar a produção e a apoptose de células germinais durante o processo de espermatogênese, e a presença das enzimas P450aromatase e P450c17 em células de leydig acompanhados com a recrudescência testicular também reforça a ideia, de que elas podem desempenhar um papel na quiescência testicular. Esse trabalho evidenciou que as enzimas citocromo P450, citocromo P450c17 e NADPH-citocromo P450-redutase estão presentes no testículo e epidídimo nos diferentes períodos climáticos e podem estar relacionados à síntese de testosterona em tartarugas concordando com os diferentes achados para biometria e espermiogênese nos períodos chuvoso e seco, o que, nos leva a sugerir um estado de quiescência durante o período seco e atividade espermatogênica no período chuvoso, semelhante ao que ocorre com as espécies que apresentam comportamento reprodutivo sazonal / In the state of Maranhão, in the lowland region, the reptile Kinosternon scorpioides, a freshwater chelonian, popularly known as swear has social, economic and environmental value to the riparian of the city of São Bento. This study includes reproductive biological characteristics based on their natural environment in order to enable the preservation and the establishment of reproductive management plans and sustainable use of the species. To date, few studies around the world address the aspects of the reproductive cycle of the turtles in the face of the endocrine features. In South America, these studies are recent and scarce. So this is the first study that elucidates a reproductive seasonal pattern of the species K. scorpioides, by associating gonadal hormones with behavioral aspects. Thirty-eight adult animals had their reproductive organs characterized for P450 steroidogenic enzyme aromatase, P450c17 and NADPH reductase by immunostaining and immunoblotting, and gonadossomatic index, morphology and concentration of testosterone, corticosterone and estradiol by radioimmunoassay. Biometric changes, cell morphology and testicular steroidogenesis between the rainy and dry seasons suggests that the estrogen produced by the leydig cells can affect the production and apoptosis of germ cells during spermatogenesis process; and the presence of P450aromatase and P450c17 enzymes in the leydig cells accompanied with testicular recrudescence also reinforces the idea that they may play a role in testicular quiescence. This work showed that the cytochrome P450 enzymes, P450c17 and NADPH-cytochrome P450 reductase are present in the testis and epididymis at different climatic periods and may be related to testosterone synthesis in turtles agreeing to the different findings for biometrics and spermiogenesis in and dry rainy periods. These findings suggest a state of quiescence during the dry season and spermatogenic activity during the rainy season, similar to those found in species with seasonal reproductive behavior
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Impacts moléculaires d’un excès d’acides gras sur l’androgenèse des cellules surrénaliennes

Béland, Fanny January 2016 (has links)
Le syndrome des ovaires polykystiques (SOPK) touche entre 5 à 10 % des femmes en âge de procréer et est associé à de nombreuses complications. Ce désordre endocrinien est caractérisé par des niveaux circulants élevés d’androgènes, dont la production est principalement modulée par la P450c17 et son cofacteur, soit la P450oxydoréductase (POR). Plusieurs études démontrent que l’hyperandrogénie présente chez les femmes SOPK pourrait être causée par la formation de phénomènes toxiques survenant à la suite de l’exposition des tissus non adipeux à un excès d’acides gras non estérifiés (AGNE), appelé lipotoxicité. Ainsi, l’objectif de cette étude est de déterminer les mécanismes cellulaires sous-jacents à l’hyperandrogénie induite par la surexposition des cellules productrices d’androgènes aux AGNE. Pour y arriver, les cellules surrénaliennes bovines (CSB) ont été exposées en présence de forskoline (Fsk; 1X/2 jours; 10 µM; activateur des adénylates cyclases) et d’oléate (acide gras monoinsaturé, 2X/jour; 200 µM) durant 48 heures. Par la suite, le milieu de culture a été prélevé afin de doser le DHEA (principal androgène surrénalien) par ELISA. De plus, les protéines ont été récoltées afin de déterminer l’expression protéique de la P450c17 et de POR par Western blot. Finalement, pour déterminer les activités 17αhydroxylase et 17,20-lyase de la P450c17, la concentration de plusieurs stéroïdes a été déterminé par LC-MS/MS et le ratio produit/substrat a été effectué. Les résultats sont présentés en moyenne ± SEM. Ainsi, sous stimulation à la Fsk, la présence de 200 µM d’oléate (vs absence d’oléate) augmente la production de DHEA de 114% par les CSB (n=17; 214 ± 20% vs 100 ± 0%; p<0,0001). De plus, l’ajout d’oléate n’affecte pas l’expression de la P450c17 (n=8; 98 ± 6% vs 100 ± 0%; p=0,74) et de POR (n=7; 119 ± 13% vs 100 ± 0%; p= 0,22). Finalement, la présence d’oléate augmente l’activité 17αhydroxylase de la P450c17 de 124% (n=7; 224 ± 19% vs 100 ± 0%; p= 0,02) et tends à augmenter l’activité 17,20-lyase de la P450c17 de 81% (n=7; 181 ± 28% vs 100 ± 0%; p= 0,08). Ainsi, l’augmentation de la production des androgènes induite par les AGNE pourrait être due principalement à leurs effets sur l’augmentation des deux activités enzymatiques de la P450c17, sans effet significatifs sur l’expression de la P450c17 ni de son cofacteur POR. Les mécanismes sous-jacents à l’augmentation des activités de la P450c17 demeurent à élucider.

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