Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-03-04T15:47:31Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Laís Carneiro Naziasene Lima - 2014.pdf: 3242345 bytes, checksum: d0ace95b026350f2bf41251459258252 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-03-05T10:40:24Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Laís Carneiro Naziasene Lima - 2014.pdf: 3242345 bytes, checksum: d0ace95b026350f2bf41251459258252 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-05T10:40:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Laís Carneiro Naziasene Lima - 2014.pdf: 3242345 bytes, checksum: d0ace95b026350f2bf41251459258252 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-05-08 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / The increase in the number of fungal infections by Candida species, as a result of the significant increase of immunocompromised patients emphasizes the importance of studies associated to this genre. The resistance of these strains to antifungal drugs is observe in specific isolates, as well as infections associated with biofilm formation (BF). The aim of this study was to compare the susceptibility profile of sessile and planktonic cells of different Candida isolates, differentiating species by multiplex qPCR and scanning electron microscopy. The sample consisted of 10 C. albicans, 10 C. parapsilosis and 1 C. tropicalis. The genetic material was extracted by phenolchloroform extraction of the sample C. tropicalis, ATCC 28367 (C. albicans) and ATCC 22019 (C. parapsilosis) for use in a species-specific multiplex qPCR assay with analysis of differences in the curve fusion. Microdilution plate test and reduction of the tetrazolium salt for 21 isolates were performed for the susceptibility of sessile and free cells, respectively. The evaluation of the ultrastructure of the biofilm was performed on strips of polyurethane with visualization by scanning electron microscopy. The amplified products from C. albicans obtained three melting peaks with values of 75,2 °C, 76,8 °C and 79,8 °C, while C. tropicalis and C. parapsilosis showed one peak with values 73,5 °C and 78,5 °C, respectively. The identification test showed to be reliable for the identification of the most common species in the study. All of Candida yeasts were able to form biofilm with own organization of each specie. The in vitro susceptibility test of planktonic cells demonstrated that amphotericin B and caspofungin showed better activity compared to fluconazole and voriconazole who obtained 19% of resistant strains, all C. albicans. In assessing of the CIMs50% and CIMs80% of sessile cells, we observed an increase of at least 60 times the values of planktonic cells. It was observed a high percentage of BF that demonstrates the need for diagnosis and combat against this biomass formed by Candida species. The BF is a virulence factor determinant for decrease of susceptibility to antifungal agents thus compromising antifungal therapy. / O aumento no número de infecções fúngicas por espécies de Candida, como resultado do expressivo aumento de pacientes imunocomprometidos destaca a importância de estudos relacionados a esse gênero. A resistência destas leveduras aos fármacos antifúngicos é observada em isolados específicos, assim como em infecções associadas com a formação de biofilme (FB). O objetivo deste estudo foi comparar o perfil de suscetibilidade in vitro de células sésseis e planctônicas de diferentes isolados de Candida, diferenciando as espécies por qPCR multiplex e microscopia eletrônica de varredura. A amostra foi composta de 10 C. albicans, 10 C. parapsilosis e 1 C. tropicalis. O material genético foi extraído pelo método de extração fenol-clorofórmio da amostra de C. tropicalis, ATCC 28367 (C. albicans) e ATCC 22019 (C. parapsilosis) para utilização no ensaio espécie-específico qPCR multiplex com avaliação das diferenças na curva de fusão. Foram realizados teste de microdiluição em placa e redução do sal tetrazólio para 21 isolados a fim de determinar a suscetibilidade de células livres e sésseis, respectivamente. A avaliação da ultraestrutura do biofilme foi realizada em tiras de poliuretano com visualização por microscopia eletrônica de varredura. Os produtos amplificados de C. albicans, obtiveram três picos de fusão com valores de 75,2°C, 76,8°C e 79,8°C, enquanto C. parapsilosis e C. tropicalis mostraram um pico de valores 73,5°C e 78,5°C, respectivamente. O teste de identificação apresentou-se confiável para a identificação das espécies mais comuns no estudo. Todas as leveduras de Candida foram capazes de formar biofilme com organização própria de cada espécie. O teste de suscetibilidade in vitro das células planctônicas demonstrou que anfotericina B e caspofungina apresentaram melhor atividade em comparação com o fluconazol e voriconazol que obtiveram 19% das amostras resistentes, sendo todas C. albicans. Na avaliação da CIMs50% e CIMs80% das células sésseis, observou-se um aumento de pelo menos 60 vezes dos valores das células planctônicas. Foi observada porcentagem elevada de FB que demonstra a necessidade do diagnóstico e combate à essa biomassa formada pelas espécies de Candida, pois é um fator de virulência determinante para a diminuição da suscetibilidade aos antifúngicos comprometendo assim a terapêutica antifúngica.