O uso de células tronco já é uma realidade em algumas áreas da Medicina, porém o mesmo não se aplica para a Odontologia, que segue utilizando materiais artificiais para substituir tecidos dentais perdidos. Desde 2000, quando Gronthos e colaboradores identificaram células-tronco na polpa de dentes permanentes, os estudos avançaram para que, num futuro breve, essas células possam ser de fato aplicadas para regenerar tecidos dentais, com destaque para a endodontia, onde o uso dessas células parece ser mais eminente. Dessa forma, esse trabalho procurou analisar a co-participação de células humanas transplantadas e células do hospedeiro em um modelo de engenharia pulpar. Para tanto, células de papila apical, enriquecidas ou não para o marcador CD146, foram transplantadas em câmaras pulpares despulpadas preenchidas com colágeno. Dois modelos animais foram utilizados, sendo um modelo transgênico para o gene GFP e outro imunocomprometido pela aplasia do timo (nude). Os resultados foram analisados nos dias 14 e 21 pós-transplante das amostras em cápsula renal. Nas amostras GFP realizou-se imunofluorescência para o marcador anti-GFP, com o objetivo de identificar as células do hospedeiro, enquanto nas amostras nude utilizou-se o marcador lâmina A para identificar as células humanas transplantadas. Nas análises morfológicas de todas as coroas transplantadas houve a formação de um tecido conjuntivo frouxo de celularidade variável, com a presença de vasos bem formados com eritrócitos em seu interior, inclusive nas coroas que receberam somente colágeno. Somente as amostras que receberam células houve a formação de matriz mineralizada no espaço pulpar, mas nos tempos experimentais analisados não foi possível visualizar as células humanas. Nas amostras nude, o marcador lâmina A foi negativo para todos os grupos que receberam transplante de células. Nas amostras GFPs, o marcador anti-GFP foi positivo na totalidade das células em todas as amostras estudadas. A partir disso concluiu-se que as células-tronco humanas de papila apical transplantadas apesar de terem desempenhado alguma função fisiológica, não foram identificadas após 14 e 21 dias e o tecido neoformado no interior da câmara pulpar era proveniente do hospedeiro. Adicionalmente, concluímos que não é necessário o transplante de células para a formação de um tecido conjuntivo frouxo no interior da câmara pulpar. / The use of stem cells is already a reality in some areas of Medicine, but the same does not apply for Dentistry, which keeps on using artificial materials to replace lost dental tissues. Since 2000, when Gronthos and coleagues identified stem cells in the pulp of permanent teeth, studies advanced so that, in the near future, these cells may actually be applied to regenerate dental tissues, especially in endodontics, in which the use of these cells seems to be more imminent. Thereby, this study sought to examine the co-participation of transplanted human cells and host cells in a model of dental pulp engineering. For this, apical papilla cells enriched or not with CD146 marker, were transplanted into decelluarized pulp chambers (empty crowns) filled with collagen. Two animal models were used, a transgenic model for the GFP gene and an immunocompromised by thymus aplasia (nude). The results were analyzed on days 14 and 21 after transplantation of samples into renal capsule. In the GFP samples immunofluorescence was performed for the anti-GFP marker in order to identify host cells, while in the nude samples the lamina A marker was used to identify the transplanted human cells. In the morphological analysis of all transplanted crowns there was formation of a loose connective tissue of variable cellularity, with the presence of well-formed vessels with erythrocytes inside, including in the crowns that received only collagen. Osteodentine was formed in the pulp chamber only in the samples that received cell, but after the wait time was not possible to visualize the human cells. In the nude samples the Lamina A marker was negative for all groups transplanted with cells. In the GFPs samples, the anti-GFP marker was positive for all cells in this group. We concluded that it was not necessary to use transplanted cells to form a connective tissue inside the pulp chamber and although transplanted human stem cells from apical papilla played some physiological function, after 14 and 21 days of transplantation, they were no longer present in the tissue newly formed by the host.

O uso de células tronco já é uma realidade em algumas áreas da Medicina, porém o mesmo não se aplica para a Odontologia, que segue utilizando materiais artificiais para substituir tecidos dentais perdidos. Desde 2000, quando Gronthos e colaboradores identificaram células-tronco na polpa de dentes permanentes, os estudos avançaram para que, num futuro breve, essas células possam ser de fato aplicadas para regenerar tecidos dentais, com destaque para a endodontia, onde o uso dessas células parece ser mais eminente. Dessa forma, esse trabalho procurou analisar a co-participação de células humanas transplantadas e células do hospedeiro em um modelo de engenharia pulpar. Para tanto, células de papila apical, enriquecidas ou não para o marcador CD146, foram transplantadas em câmaras pulpares despulpadas preenchidas com colágeno. Dois modelos animais foram utilizados, sendo um modelo transgênico para o gene GFP e outro imunocomprometido pela aplasia do timo (nude). Os resultados foram analisados nos dias 14 e 21 pós-transplante das amostras em cápsula renal. Nas amostras GFP realizou-se imunofluorescência para o marcador anti-GFP, com o objetivo de identificar as células do hospedeiro, enquanto nas amostras nude utilizou-se o marcador lâmina A para identificar as células humanas transplantadas. Nas análises morfológicas de todas as coroas transplantadas houve a formação de um tecido conjuntivo frouxo de celularidade variável, com a presença de vasos bem formados com eritrócitos em seu interior, inclusive nas coroas que receberam somente colágeno. Somente as amostras que receberam células houve a formação de matriz mineralizada no espaço pulpar, mas nos tempos experimentais analisados não foi possível visualizar as células humanas. Nas amostras nude, o marcador lâmina A foi negativo para todos os grupos que receberam transplante de células. Nas amostras GFPs, o marcador anti-GFP foi positivo na totalidade das células em todas as amostras estudadas. A partir disso concluiu-se que as células-tronco humanas de papila apical transplantadas apesar de terem desempenhado alguma função fisiológica, não foram identificadas após 14 e 21 dias e o tecido neoformado no interior da câmara pulpar era proveniente do hospedeiro. Adicionalmente, concluímos que não é necessário o transplante de células para a formação de um tecido conjuntivo frouxo no interior da câmara pulpar. / The use of stem cells is already a reality in some areas of Medicine, but the same does not apply for Dentistry, which keeps on using artificial materials to replace lost dental tissues. Since 2000, when Gronthos and coleagues identified stem cells in the pulp of permanent teeth, studies advanced so that, in the near future, these cells may actually be applied to regenerate dental tissues, especially in endodontics, in which the use of these cells seems to be more imminent. Thereby, this study sought to examine the co-participation of transplanted human cells and host cells in a model of dental pulp engineering. For this, apical papilla cells enriched or not with CD146 marker, were transplanted into decelluarized pulp chambers (empty crowns) filled with collagen. Two animal models were used, a transgenic model for the GFP gene and an immunocompromised by thymus aplasia (nude). The results were analyzed on days 14 and 21 after transplantation of samples into renal capsule. In the GFP samples immunofluorescence was performed for the anti-GFP marker in order to identify host cells, while in the nude samples the lamina A marker was used to identify the transplanted human cells. In the morphological analysis of all transplanted crowns there was formation of a loose connective tissue of variable cellularity, with the presence of well-formed vessels with erythrocytes inside, including in the crowns that received only collagen. Osteodentine was formed in the pulp chamber only in the samples that received cell, but after the wait time was not possible to visualize the human cells. In the nude samples the Lamina A marker was negative for all groups transplanted with cells. In the GFPs samples, the anti-GFP marker was positive for all cells in this group. We concluded that it was not necessary to use transplanted cells to form a connective tissue inside the pulp chamber and although transplanted human stem cells from apical papilla played some physiological function, after 14 and 21 days of transplantation, they were no longer present in the tissue newly formed by the host.

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Stem cells isolated from apical papilla cells were donated by the cell bank from Pharmaceutical Nanotechnology Laboratory and Drug Delivery Systems, Federal University of Goiás (UFG). Cells were cultured in 75cm^2 bottles and kept in a humidified stove at 37 °C in a saturated atmosphere at 5% CO2. Standard culture medium used was composed of Dulbecco's modified Eagle's medium nutrient mixture F-12 (DMEM / F12), 10%, fetal bovine serum ,100 ug / ml streptomycin and 100 U / ml penicillin. For irradiation, the semiconductor laser diode(InGaAlP) was used at a wavelength of 660 nm, 100mW power, 6J energy, 60 seconds for irradiation time and 200 J / cm². Dose. Initially, the intensity of mitochondrial metabolism was evaluated by immunofluorescence. For this, we used Mitotraker Red in a concentration of 100mM. Intensities of mitochondrial activity was compared in non-irradiated cells, and after two irradiation times: immediately to the application of LILT and 24h after application. In order to assess the immunoreactivity of proteins involved in cell proliferation, it performed immunocytochemistry using Ki-67, p53, Bcl-2, Cyclin B1, TGF-β2 and TGF-β3 .The incubation time for the primary antibody exposure was standardized at 2hours. For each antibody, two different groups were analyzed: non-irradiated (CNT) and irradiated (G6J). The progression of the cell cycle analysis was performed, by flow cytometry. The results obtained in the groups irradiated and non-irradiated were compared. The normality of the data distribution was tested using the Kolmogov- Sminorv test. To check the diferences in the immunoreactivity between the groups, were used the Mann-Whitney test and to check whether there was a statistical difference between the groups regarding the progression of the cell cycle, we used the nonparametric T test. In both cases, it was adopted significance of 5%. Increased mitochondrial activity was evident immediately from the time of irradiation, and this metabolic activity increase even more after 24 hours of exposure to LILT The irradiated group showed greater median percentage of immunopositive Ki-67 and Cyclin B1. However, in both cases, there was no statistical significance when compared to control groups. There was no difference in TGF-β expression. Likewise, it was also no difference obtained as the p53 and Bcl-2, which indicates that the LILT does not deregulating the maintenance of cell cycle progression and control of apoptosis. There was no disagreement on the chronology of cell cycle progression between the groups irradiated and non-irradiated. Thus, it is possible to conclude that the LILT increases mitochondrial metabolism of isolated stem cells of the apical papila and it can influence the imunoexpression of proliferation marker. Furthermore, the irradiation of SCAPs does not result in any damage to regulation of cell proliferation and apoptosis functions. / O objetivo deste trabalho consistiu na análise dos efeitos da laserterapia de baixa intensidade (LBI) na atividade biológica de células-tronco isoladas da papila apical (SCAPs). Foram utilizadas células-tronco isoladas da papila apical doadas pelo banco de células do Laboratório de Nanotecnologia Farmacêutica e Sistemas de Liberação de Fármacos da Universidade Federal de Goiás (UFG). As células foram cultivadas em garrafas de 75cm^2 e mantidas em estufa umidificada a 37°C em atmosfera saturada em 5% de CO2. Foi utilizado meio de cultura padrão composto por Dulbecco's modified Eagle's medium nutrient mixture F-12 (DMEM/F12), soro fetal bovino a 10%, 100 µg/mL de estreptomicina e 100 U/mL de penicilina. Para irradiação, foi utilizado o laser semicondutor diodo (InGaAlP), no comprimento de onda de 660 nm, potência de 100mW, energia de 6J, tempo de irradiação de 60 segundos. Inicialmente, foi avaliada a intensidade do metabolismo mitocondrial por meio de imunofluorescência com o uso do Mitotraker Red. Foram comparadas as intensidades de atividade mitocondrial em células não irradiadas, e após dois tempos de irradiação: imediato à aplicação do LBI e 24h após a aplicação. Com o intuito de avaliar a imunoexpressão de proteínas reguladoras, foi realizada imunocitoquímica, empregado os marcadores Ki-67, Ciclina B1, TGF-β2 e TGF-β, p53, Bcl-2. Para cada anticorpo, foram analisados dois grupos distintos de células: um não irradiado (CNT) e outro irradiado (G6J). A análise da progressão do ciclo celular foi realizada no tempo de 8h por meio da marcação com Iodeto de Propídeo, as células foram quantificadas de acordo com a fase do ciclo em que se encontravam, por meio de citometria de fluxo. Foram comparados os resultados obtidos nos grupos irradiados e não irradiados. A normalidade de distribuição dos dados foi testada utilizando o teste de Kolmogov-Sminorv. . Para verificar as diferenças nos percentuais de imunoreatividade, foi utilizado o teste de Mann- Whitney e para verificar se houve diferença estatística entre os grupos quanto a progressão do ciclo celular, foi utilizado o teste T não paramétrico. Em ambos os casos, foi adotada significância de 5%. O aumento da atividade mitocondrial foi evidente desde o momento imediato da irradiação, sendo este aumento metabólico ainda maior após 24h de exposição ao LBI. As células irradiadas com LBI vermelho apresentaram maiores medianas de percentuais de imunopositividade ao Ki-67 e a Ciclina B1. Não houve diferença quanto à expressão de TGF-β. Da mesma forma, também não foi obtida diferença quanto à imunoexpressão do p53 e Bcl-2, o que indica que o LBI não desregula genes importantes na manutenção da progressão do ciclo celular e controle da apoptose. Também não houve divergências quanto à cronologia da progressão do ciclo celular entre os grupos irradiados e não irradiados. Desta forma, é possível concluir que a absorção da luz pelas SCAPs resulta em aumento imediato do metabolismo mitocondrial que pode influenciar a maior expressão do marcador de proliferação nestas células. Também foi demonstrado que a irradiação destas células não resulta em nenhum dano à regulação das funções vitais de proliferação celular e apoptose.