Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-25T20:56:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 297274.pdf: 3857217 bytes, checksum: d3c0a53338594d74150f293aaf06de3b (MD5) / Neste trabalho foi sintetizada uma série de sistemas heterocíclicos da classe das xantonas e quinolinas empregando, principalmente, metodologia heterogênea (K-10, montmorrilonita). Foram obtidos os derivados xantônicos: 2-enamino xantonas e 2-imino xantonas. Os heterociclos quinolínicos da classe das 6-quinolinil chalconas e seus derivados N-óxido e sais N-metil foram eficientemente sintetizados. Esses compostos foram submetidos a reações de epoxidação e adição de Michael usando diferentes metodologias em meio heterogêneo e homogêneo (K-10, hidrotalcita). As epoxi chalconas foram obtidas com rendimentos excelentes e submetidas a estudos de aminólise frente ao dinucleófilo cloridrato de fenil hidrazina resultando em sistemas heterocíclicos polifuncionalizados da classe dos pirazóis. O emprego de metodologia heterogênea, suporte sólido montmorillonita, proporcionou condições brandas de reação, facilidade de isolamento e rendimentos significativos. Os compostos sintetizados foram submetidos a diferentes atividades biológicas in vitro e in vivo, tais como atividade inibidora da acetilcolinesterase, toxicidade frente à Artemia salina, atividade antimicrobiana, citotóxica e também avaliação do potencial hipoglicêmico. / In this work was synthesized a series of heterocyclic systems of xanthones and quinolines class using mainly heterogeneous methodology (K-10, montmorillonite). The xanthone derivatives 2- enamine and 2-imino xanthones were obtained. The quinolinic heterocycles of the class 6-quinolinyl chalcones and their derivatives Noxide and N-methyl salts were efficiently synthesized. These compounds were subjected to epoxidation reactions and Michael addition using different methodologies in heterogeneous and homogeneous medium (K-10, hydrotalcite). The epoxy-chalcones were obtained with excellent yield and subjected to aminolysis studies with the dinucleophile phenylhydrazine hydrochloride, resulting in the polyfunctionalized heterocyclic systems of pyrazoles class. The use of heterogeneous methodology, solid support montmorillonite, provided mild reaction conditions, easy isolation and significant yields. The synthesized compounds were subjected to different biological activities in vitro and in vivo, such as acetylcholinesterase inhibitory activity, toxicity against the Arthemia saline, antimicrobial and cytotoxic activity and also evaluation of the hypoglycemic potential.

COSTA. Luís Eduardo Castanheira. Fração polissacarídica extraída da alga vermelha Gracilaria intermedia: atividade anti-inflamatória e antinociceptiva. 2014. 78 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-01-23T21:25:02Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_leccosta.pdf: 1330705 bytes, checksum: ae09e8991cebe3eada65ac66e53c41a5 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-01-25T22:03:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_leccosta.pdf: 1330705 bytes, checksum: ae09e8991cebe3eada65ac66e53c41a5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-25T22:03:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_leccosta.pdf: 1330705 bytes, checksum: ae09e8991cebe3eada65ac66e53c41a5 (MD5) Previous issue date: 2014 / Seaweeds from the Gracilaria genus are an important source of agar and sulfated polysaccharides and are commonly used in food, pharmaceutical and biotechnology industries. The objective of this study was to extract, structurally characterize and evaluate the anti-inflammatory and antinociceptive effects of a sulfated plysaccharide extracted from the red alga Gracilaria intermedia. A sulfated polysaccharide fraction was extracted from the red alga Gracilaria intermedia by enzymatic digestion with papain. The sugar content and protein contamination were evaluated through colorimetric tests. The material presented high yield and purity, without any protein contamination. The sulfated polysaccharides extracted were subjected to structural characterization analysis by Fourier transform infrared spectroscopy and the average molecular weight of the polysaccharide fraction was determined by Gel Permeation Chromatography (GPC). The polysaccharide fraction was identified as an agaran with a molecular weight of 410 kDa. Anti-inflammatory activity tests were conducted in models of paw edema induced by carrageenan, dextran, compound 48/80, serotonin, and histamine. The anti-inflammatory effect of the polysaccharide on carrageenan-induced peritonitis was also evaluated, with subsequent counting of leukocytes and neutrophils, as well as measurement of TNF-α and interleukin-1β levels. The results of the anti-inflammatory activity tests indicate that the extracted polysaccharide exhibits high anti-inflammatory activity and this activity is related to inhibition of inflammatory mediators. The antinociceptive activity was evaluated using models of writhing induced by acetic acid, formalin test and hot plate. The antinociceptive tests showed that the extracted polysaccharide had analgesic activity in the writhing test induced by acetic acid and in the formalin test but showed no significant reduction in the hot plate test, suggesting an action mechanism in the peripheral system. The sulfated polysaccharides derived from seaweed Gracilaria intermedia show potential for future use as an anti-inflammatory compound. / As algas marinhas do gênero Gracilaria são importantes fontes de ágar e polissacarídeos sulfatados e são comumente utilizadas nas indústrias alimentícia, farmacêutica e biotecnológica. O objetivo deste trabalho foi extrair, caracterizar estruturalmente e avaliar o potencial anti-inflamatório e antinociceptivo de uma fração polissacarídica extraida da alga Gracilaria intermedia. Uma fração de polissacarídeos sulfatados foi obtida a partir da alga vermelha Gracilaria intermedia através de extração enzimática com papaína. O teor de açucar e contaminação por proteínas foram avaliados através de testes colorimétricos. O material apresentou alto rendimento após a extração e alta pureza, sem contaminação por proteínas. Os polissacarídeos foram submetidos a testes de caracterização estrutural através da análise por espectroscopia de infravermelho com transformada de Fourier e a massa molar média da fração polissacarídica foi determinada através de Cromatografia por Permeação em Gel (GPC). O polissacarídeo foi identificado como uma agarana, com um peso molecular de 410 kDa. Foram realizados testes de atividade anti-inflamatória em modelos de edema de pata induzido por carragenana, dextrana, composto 48/80, serotonina e histamina. Também foi avaliado o efeito anti-inflamatório do polissacarídeo em modelo de peritonite induzida por carragenana, com posterior contagem de leucócitos e neutrófilos, assim como medição dos níveis de TNF-α e interleucina-1β. Os resultados indicam que o polissacarídeo extraído apresenta alta atividade anti-inflamatória e esta atividade está relacionada à inibição de mediadores inflamatórios. A atividade antinociceptiva foi avaliada através de modelos de contorção abdominal induzida por acido acético, teste da formalina e placa quente. Os demonstraram que o polissacarídeo extraído apresentou atividade analgésica nos testes de contorção abdominal induzida por ácido acético e no teste da formalina mas não apresentou redução significativa no teste de placa quente, sugerindo um mecanismo de ação a nível de sistema periférico. Os polissacarídeos sulfatados obtidos a partir da alga marinha Gracilaria intermedia mostram potencial para serem utilizados futuramente como princípio ativo para um composto anti-inflamatório.

ANDRADE, Francisco Regivânio Nascimento. Caracterização e atividade antibiofilme de polissacarídeos sulfatados extraídos da alga marinha verde Enteromorpha sp. cultivada em laboratório. 2017. 72 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia de Recursos Naturais)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Coordenação PPGBiotec (ppgbiotec@ufc.br) on 2017-11-21T18:16:19Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_frnandrade.pdf: 2150209 bytes, checksum: c1f0991392b2cb6567d8aa327466fdbc (MD5) / Approved for entry into archive by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-11-22T21:11:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_frnandrade.pdf: 2150209 bytes, checksum: c1f0991392b2cb6567d8aa327466fdbc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-22T21:11:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_frnandrade.pdf: 2150209 bytes, checksum: c1f0991392b2cb6567d8aa327466fdbc (MD5) Previous issue date: 2017 / Rampant harvesting of algae for extraction of its by products causes a huge environmental problem, one solution to lessening that impact would be to grow it. As green algae became an important source of bioactive compounds, among them the sulfated polysaccharides, the objective was to cultivate the green marine macroalgae Enteromorpha sp. in the laboratory, from the isolation of their spores obtained in nature, and extract, purify, characterize these macromolecules and evaluate their effect against bacterial biofilm formation. The algae were grown in Guillard f / 2 medium and the total sulfated polysaccharides (PST) were extracted by enzymatic digestion with papain and fractionated by ion exchange chromatography DEAE- Cellulose using a stepwise salt gradient with increasing concentrations NaCl (0.5 - 2.0 M). The most metachromatic major fraction was produced in a preparative column, isolated from the others, dialysed and lyophilized. For a better characterization of the extracted polysaccharides, a high efficiency chromatography (HPLC) analysis was performed on a DEAE-Cellulose ion exchange column, eluted by linear NaCl gradient (0 - 3.0M). The PST fractions isolated in the chromatograms were submitted to agarose and polyacrylamide gel electrophoresis. The determination of total sugars, uronic acids and sulfate were by phenol-sulfuric acid, carbazole-sulfuric acid and barium gelatine, respectively. The monosaccharide composition was obtained by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS). The activities of the sulfated polysaccharides on the planktonic growth of bacteria Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa, as well as their action under the formation of biofilms, were analyzed. The algae grew 4 cm high after 70 days of cultivation. The yield of its PST corresponded to 10.8% of its biomass. In the fractionation of PST in DEAE-Cellulose ion exchange chromatography, stepwise, five fractions were obtained (0.7,0.9, 1.2, 1.6, 1.8 M) and the highest metachromatic activity evidenced in the F1.2 M fraction. In the HPLC system, three fractions were isolated from the PST and a single peak from the F1.2 M fraction. The electrophoretic analysis showed a similar mobility, homogenous bands and high molecular weight of samples. The PST and the fractions presented significant amounts of total sugar, varied uronic acid content and high sulfation. The polysaccharide presented monomers of rhamnose (41.49%), xylose (17.35%), glucose (9.51%) and galactose (5.50%), 3-methyl hexauronic acid (6.91%) and 3-methyl hexose (2.81%). In the bacterial assay, a significant decrease in planktonic growth was observed and in relation to biofilm formation the results showed a statistically significant reduction for all concentrations of polysaccharides tested in both bacteria. It is possible to cultivate the green marine macroalgae Enteromorpha sp., in the laboratory from its spores and using colorimetric, turbidimetric, electrophoretic and chromatographic methods, together with mass spectrometry it is possible to fractionate, purify and chemically analyze its structure, in this work it was also concluded. That these molecules are efficient in decreasing the formation of bacterial biofilms. / A colheita desenfreada de algas para extração de seus derivados causa um enorme problema ambiental, uma solução para diminuição desse impacto seria cultivá-las. Visto que as algas verdes se tornaram uma importante fonte de compostos bioativos, dentre eles os polissacarídeos sulfatados, objetivou-se cultivar a macroalga marinha verde Enteromorpha sp. em laboratório, a partir do isolamento de seus esporos obtidos na natureza, e dela extrair, purificar, caracterizar essas macromoléculas e avaliar seu efeito frente a formação de biofilme bacteriano. A alga foi cultivada em meio Guillard f/2 e os polissacarídeos sulfatados totais (PST) foram extraídos por digestão enzimática com papaína e fracionados em cromatografia de troca iônica DEAE-Celulose usando um gradiente salino do tipo “stepwise” com concentrações crescentes de NaCl (0,5 - 2,0 M). A fração majoritária mais metacromática foi produzida em coluna preparativa, isolada das demais, dialisada e liofilizada. Para melhor caracterização dos polissacarídeos extraídos, realizou-se uma análise por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) em uma coluna de troca iônica DEAE-Celulose, eluída por gradiente linear de NaCl (0 - 3,0 M). As frações de PST isoladas nas cromatografias, foram submetidos à eletroforese em gel de agarose e poliacrilamida. A determinação de açúcares totais, ácidos urônicos e sulfato foram pelos métodos fenol-ácido sulfúrico, carbazol-ácido sulfúrico e gelatina bário, respectivamente. A composição monossacarídica foi obtida por cromatografia em fase gasosa acoplada a espectrometria de massa (CG-EM). Foram analisadas as atividades dos polissacarídeos sulfatados sobre o crescimento planctônico das bactérias Staphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa, bem como a sua ação sob a formação de biofilmes. A alga cresceu 4 cm de altura após 70 dias de cultivo. O rendimento de seu PST correspondeu a 10,8% de sua biomassa. No fracionamento do PST em cromatografia de troca iônica DEAE-Celulose, do tipo “stepwise”, foram obtidas cinco frações (0,7; 0,9; 1,2; 1,6 e 1,8 M) e a maior atividade metacromática evidenciada na fração F1,2M. Em sistema CLAE foram isoladas três frações a partir dos PST e um único pico a partir da fração F1,2M. A análise eletroforética revelou uma mobilidade bastante semelhante, bandas homogenias e alto peso molecular das amostras. O PST e as frações apresentaram quantidades significativas de açúcar total, variado teor de ácidos urônicos e alta sulfatação. O polissacarídeo apresentou em sua composição monômeros de ramnose (41,49%), xilose (17,35%), glicose (9,51%) e galactose (5,50%), 3-metil-ácido hexaurônico (6,91%) e 3-metil-hexose (2,81%). No ensaio bacteriano, observou-se uma diminuição significativa do crescimento planctônico e em relação a formação do biofilme os resultados mostraram redução estatisticamente significativa para todas as concentrações de polissacarídeos testadas, em ambas as bactérias. É possível cultivar a macroalga marinha verde Enteromorpha sp., em laboratório a partir de seus esporos e utilizando métodos colorimétricos, turbidimétricos, eletroforéticos e cromatográficos, aliado a espectrometria de massa é possível fracionar, purificar e analisar quimicamente sua estrutura, nesse trabalho concluiu-se também que essas moléculas são eficientes em diminuir a formação de biofilmes bacterianos.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-16Bitstream added on 2014-06-13T20:59:09Z : No. of bitstreams: 1 altei_wf_me_araiq.pdf: 2709534 bytes, checksum: f938c1fad72974e7f636d0ca3476f37e (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Este projeto é parte do projeto temático Conservation and Sustainable Use of the Plant Diversity from Cerrado and Atlantic Forest: Chemical Diversity and Prospecting for Potencial Drugs – Biota/FAPESP e descreve o isolamento, purificação e caracterização de peptídeos cíclicos presentes em Jatropha curcas L. Este tema foi proposto para o projeto temático por tratar-se de um assunto atual e inédito no Brasil, sendo importante no que diz respeito da descoberta de novas classes de produtos naturais. A obtenção dos peptídeos foi realizada através da partição do látex com acetato de etila e da aplicação de técnicas cromatográficas para sua purificação. Este procedimento permitiu a obtenção de dois peptídeos cíclicos, posteriormente caracterizados por análise de aminoácidos e espectrometria de massas. O seqüenciamento dessas substâncias foi realizado por Ressonância Magnética Nuclear, e permitiu identificar o peptídeo cíclico Polianina A [c(Pro-Leu- Gly-Val-Leu-Leu-Tyr)], já descrito na literatura, e um peptídeo de estrutura inédita, denominado Jatrofidina I [c(Leu-Leu-Asn-Leu-Trp-Cly-Pro-Gly)]. Análogos lineares e cíclicos desses peptídeos foram obtidos pela metodologia da síntese peptídica em fase sólida, empregando a estratégia Fmoc/tBu. Os análogos obtidos bem como os peptídeos naturais foram submetidos a diversos ensaios biológicos. Por fim, foi feita uma avaliação mensal qualitativa e/ou quantitativa do perfil ciclopeptídico de espécimes cultivadas de Jatropha curcas L.(Euphorbiaceae), gossypifolia, para verificar se ocorrem alterações na produção destas moléculas em função da época do ano. Os resultados mostraram que as 2 espécies produzem os peptídeos cíclicos durante o ano todo. É interessante notar que as descrições de peptídeos cíclicos na literatura foram obtidas de espécies de Jatropha... / This project is part of the thematic project Conservation and Sustainable Use of the Plant Diversity from Cerrado and Atlantic Forest: Chemical Diversity and Prospecting for Potencial Drugs – Biota/FAPESP, and deals with the isolation, purification and characterization of cyclic peptides from Jatropha curcas L. This is a quite new natural product subject in Brazil, which is also important for discovery from our biodiversity. These compounds were obtained through partition of the latex with ethyl acetate, followed of HPLC chromatography for separation and purification. This procedure resulted in two cyclic peptides, which were characterized by amino acid analysis and mass spectrometry. The structures of these compounds were elucidated by 2D Nuclear Magnetic Resonance. One compound was identified as Pohlianin A [c(Pro-Leu-Gly-Val-Leu-Leu-Tyr)], a known cyclic peptide already isolated from XXX, and one novel which was named jatrophidin I [c(Leu-Leu-Asn- Leu-Trp-Cly-Pro-Gly)]. Linear and cyclic analogues of these peptides were obtained through solid phase synthesis methodology by using of Fmoc/tBu reagents. The linear peptides as well as synthetic cyclic peptides were submitted to several biological assays. Finally, the cyclopeptidic profile of Jatropha curcas and gossypifolia was evaluated. The results showed a continuing production of these compounds in both species all over the year. These results can be relevant for further chemotaxonomy and phylogeny studies of Jatropha species that occur in Latin America, and in special Brazil. Previously, all cyclic peptide in the literature search were isolated from African and Asian Jatropha species, and our results can be useful to map the chemical composition of other Brazilian Jatropha species.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:49:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4399_1.pdf: 159604 bytes, checksum: a5d8cf021bed80f81cbaf06b69b9ff82 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2003 / Substâncias bioativas provenientes de plantas demonstram um excelente aproveitamento na produção de medicamentos. Estas substâncias estão presentes em todas as espécies vegetais encontradas em diversos biomas brasileiros, dentre eles os manguezais, que vem sofrendo constante processo de devastação nos últimos anos. De acordo com a etnofarmacologia a família Combretaceae possui espécies utilizadas na medicina popular no tratamento de várias doenças. Dois gêneros desta família possuem espécies que ocorrem nos manguezais brasileiros que são Laguncularia racemosa e Conocarpus erectus L., sendo está encontrada em menor quantidade. A espécie Conocarpus erectus L. também conhecida como mangue botão, fornece madeira pesada de cor avermelhada, que se tornam amarelo-clara quando secas, servindo para caibros, lenha e carvão. São utilizadas no tratamento de infecções catarrais, conjuntivites, diabetes e sífilis. Suas folhas são de forma espiraladas, com um pecíolo curto e glândulas características apresentando flores masculinas e femininas numa mesma árvore. Nosso estudo foi realizado no manguezal de Vila Velha, localizado em Itamaracá (PE), que apesar de apresentar diversos estudos científicos, não existe registro de estudo fitoquímico de nenhuma das espécies vegetais lá encontrada. Neste trabalho, realizamos a avaliação preliminar dos constituintes químicos das folhas de Conocarpus erectus L. de acordo com a metodologia descrita por (Matos, 1997). Avaliamos a atividade antimicrobiana dos extratos pelo método de difusão em discos de papel e a atividade citotóxica em células da Linhagem NCI-H292. O extrato n-hexânico foi submetido a fracionamento cromatográfico e as frações obtidas foram purificadas e analisadas por espectroscopia de RMN1H, RMN13C e IV. Das cinco substâncias obtidas o CEF4 é o estigmasterol, o CEF3 uma mistura e CEF1, CEF2 e CEF5 triterpenos pentacíclicos da série oleonena

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:13:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2834_1.pdf: 11506408 bytes, checksum: f1fcafc23f6ca752f2739ac3131abd28 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Anadenanthera colubrina (Vell.) Brenan var. Cebil (Griseb.) Von Reis Alt., conhecida popularmente como angico, angico-de-caroço, angico-vermelho, angico-do-campo, angico-preto, arapiraca, curupaí e angico-de-casca, é uma árvore pertencente a família Fabaceae. A madeira de A. colubrina é usada em móveis, construção e indústria naval devido à sua elevada resistência a fungos responsáveis pela podridão branca e cupins. Da partição do extrato etanólico da madeira de A. colubrina foram obtidos quatro fases: cicloexano, diclorometano, acetato de etila e n-butanol. Da fase em cicloexano foram identificados por GCMS dezenove ésteres graxos saturados e insaturados, nove ácidos graxos saturados e insaturados, dois triterpenos (lupeol e lupenona), seis esteróides (diidrobrassicasterol, estigmasterol, b-sitosterol, estigmast-4-en-3-ona, ergost-4- en-3-ona e estigmasta-3,5-dien-7-ona) e três norisoprenóides (a-ionona, 5,6- epoxi-b-ionona e diidroactinidiolida). Apenas o b-sitosterol e lupeol foram isolados e tiveram suas estruturas caracterizadas utilizando-se as técnicas de RMN de 1H e 13C juntamente com a espectrometria de massas. O estudo químico da fase em diclorometano resultou no isolamento e identificação de cinco flavonoides, compreendendo uma flavona (luteolina), um flavonol (quercetina), um flavanonol (taxifolina) e duas chalconas (ocanina e isoliquiritigenina). Estes flavonóides foram identificados com base em dados espectroscópicos de RMN de 1H e de 13C (unie bidimensionais), de espectrometria de massas, nos valores de ponto de fusão e pela comparação com dados espectrais disponíveis na literatura. No estudo químico das fases em acetato de etila e n-butanol utilizando-se a técnica APCIMS2 foi identificado como componente majoritário uma proantocianidina dimérica. Também foi observada em menor proporção, a presença dos flavonoides naringenina, catequina além de taxifolina, ocanina e luteolina que foram isolados do extrato em diclorometano. Entre todos os 47 metabólitos encontrados apenas os esteróides b-sitosterol e estigmasterol e os triterpenos lupeol e lupenona já haviam sido identificados anteriormente no cerne e partes aéreas de A. colubrina, sendo assim as demais substâncias inéditas no gênero Anadenanthera. A madeira de A. colubrina apresentou alto teor de extrativos, especialmente de compostos fenólicos, o que explica em boa parte a atividade antioxidante e atividade antifúngica frente à Phanerochaete chrysosporium. As quatro fases obtidas da madeira de A. colubrina apresentam propriedades tóxicas e deterrentes frente à espécie de cupins Nasutitermes corniger quando comparados com o controle correspondente. A melhor fase termiticida de A. colubrina foi a acetato de etila (LC50 = 17,3 mg.mL-1 após 4 dias) provavelmente devido ao conteúdo de proantocianidinas. O extrato em cicloexano que é constituído principalmente por ésteres e ácidos graxos, triterpenos e esteróides foi o segundo mais ativo de A. colubrina (LC50 = 67,4 mg.mL-1 após 4 dias)

A síndrome hemorrágica induzida por contato com as cerdas da lagarta do gênero Lonomia pode causar distúrbios hemostáticos, com consumo de alguns fatores de coagulação. Os primeiros acidentes com Lonomia foram descritos na Venezuela, em 1967; no Norte do Brasil, foram relatados alguns casos no início da década de 1980. A partir de 1989, na região Sul do Brasil, principalmente na zona rural de Passo Fundo (RS) e Chapecó (SC), surgiram vários casos de acidentes por contato com essas lagartas. Atualmente estes acidentes continuam ocorrendo com maior freqüência nesta região, com algumas notificações esporádicas em outras partes do Brasil, principalmente na região Central. Inicialmente os casos graves de acidentes com lagartas Lonomia foram tratados com antifibrinolíticos e infusão de glóbulos vermelhos, principalmente na Venezuela e no Brasil. Em 1994, um antiveneno específico que neutraliza os efeitos biológicos dos extratos das cerdas foi produzido no Instituto Butantan. Desde então, o tratamento para estes envenenamentos tem sido a soroterapia com antiveneno produzido com extrato das cerdas das lagartas originárias da região de maior ocorrência de acidentes. O objetivo deste estudo foi avaliar a estabilidade de algumas atividades do extrato preparado com as cerdas frescas, sem congelar (0) e com as cerdas congeladas e armazenadas por 2, 4 e 6 meses a -20ºC. Todas as cerdas utilizadas foram de lagartas no 5º e 6º instar. Assim, para esta finalidade, foram preparados três lotes (A, B e C) de extrato de cerdas de taturanas provenientes da região de Passo Fundo (RS). Para cada lote foram separadas 4 amostras de cerdas que foram processadas sem congelar (0), e congeladas por 2, 4 e 6 meses. Observamos que a atividade coagulante dos extratos dos lotes A e C foram reduzidas nas cerdas congeladas por 2 meses ou mais (p<0,05), mas a atividade do lote B reduziu apenas após 4 meses. Resultados semelhantes foram observados com a atividade fosfolipásica que reduziu nos extratos preparados com cerdas congeladas por 2 meses ou mais nos lotes A e C e após 4 meses ou mais no lote B (p<0,05). Entretanto, o armazenamento não afetou a atividade hemolítica indireta ou a imunogenicidade em nenhum dos lotes. Por outro lado, a atividade hemolítica direta e atividade fibrinolítica não foram observadas em nenhum dos três lotes preparados. O perfil eletroforético dos extratos em SDS-PAGE, após diferentes períodos de congelamento, não mostraram alterações evidentes, mas a análise densitométrica das amostras indicaram degradação proteica além da desnaturação associadas com a redução da atividade biológica. Os nossos resultados indicam que o congelamento das cerdas por 2 meses ou mais reduzem a atividade pro-coagulante e fosfolipásica do extrato. Entretanto, os extratos preparados com as cerdas congeladas podem ser usados para produção de antiveneno visto que o congelamento das cerdas não afeta a qualidade do anticorpo produzido. Futuramente serão realizados testes de soro neutralização para verificar a eficácia desses anticorpos in vivo. / Contact with Lonomia obliqua caterpillar bristles may cause a consumptive hemostatic disturbance. The first human accident caused by Lonomia was described in Venezuela, in 1967. Thirty six cases were reported in Northern Region of Brazil by a retrospective study between 1978 and 1982, but since 1989 a high incidence of hemorrhagic syndrome, caused by contact with L. obliqua caterpillars has also been reported in Southern Brazil, mainly in rural areas around Passo Fundo (RS) and Chapecó (SC). The occurrence of such accidents has spread to central regions of Brazil and some sporadic notifications have been reported in other regions of South America. Initially, severe human accidental contact with L. obliqua caterpillars was treated with antifibrinolytics drugs and infusion of packed red cells in Venezuela and Brazil. Since 1994, nonetheless, a specific antivenom that neutralizes the biological effects of the bristle extract has been produced by Butantan Institute, using bristles obtained from caterpillars collected in areas of large prevalence. Thereafter, antivenom therapy has been used successfully in Brazil. Taking into account that biological activities of extracts used for antivenom production may decrease during the storage period of bristles, the aim of this study was to compare their stability, using extracts prepared from fresh (without freezing) and frozen bristles stored for 2, 4 and 6 months at -20ºC. Bristles were from caterpillars in instars 5 and 6. Three batches of bristle extract (A, B and C) were prepared from caterpillars collected in Passo Fundo area (RS); each batch of bristles were pooled, and used immediately or stored for 2, 4 and 6 months at -20º C, before being used for extract production. Our results showed that the clotting activity of extracts of batches A and C were decreased in bristles frozen for 2 months or longer (p <0.05), while it was reduced in samples frozen for 4 months or longer in batch B. Similarly, phospholipase A2 activity was reduced in extracts prepared with bristles frozen for 2 months or longer in batches A and C, and for 4 months or longer in batch B (p <0.05). On the other hand, storage affected neither the hemolytic activity evaluated indirectly, nor immunogenicity in samples of different batches. Additionally, direct hemolytic activity and fibrinolytic activity were not detected in any sample of the three batches. Electrophoretic protein profile of extract batches on SDS-PAGE did not show evident alterations, but the densitometric analyses of samples indicated degradation and denaturation, which could be associated with the reduction of biological activities. Our results indicate that freezing bristles for two months or longer decrease both procoagulant and phospholipase A2 activities of the extract. However, extracts prepared from frozen bristles can be used for antivenom production, since freezing affected neither the quantity nor quality of produced antibodies. Experiments will be accomplished to verify the effectiveness of these antibodies in vivo.

Resumo: Este projeto é parte do projeto temático "Conservation and Sustainable Use of the Plant Diversity from Cerrado and Atlantic Forest: Chemical Diversity and Prospecting for Potencial Drugs" - Biota/FAPESP e descreve o isolamento, purificação e caracterização de peptídeos cíclicos presentes em Jatropha curcas L. Este tema foi proposto para o projeto temático por tratar-se de um assunto atual e inédito no Brasil, sendo importante no que diz respeito da descoberta de novas classes de produtos naturais. A obtenção dos peptídeos foi realizada através da partição do látex com acetato de etila e da aplicação de técnicas cromatográficas para sua purificação. Este procedimento permitiu a obtenção de dois peptídeos cíclicos, posteriormente caracterizados por análise de aminoácidos e espectrometria de massas. O seqüenciamento dessas substâncias foi realizado por Ressonância Magnética Nuclear, e permitiu identificar o peptídeo cíclico Polianina A [c(Pro-Leu- Gly-Val-Leu-Leu-Tyr)], já descrito na literatura, e um peptídeo de estrutura inédita, denominado Jatrofidina I [c(Leu-Leu-Asn-Leu-Trp-Cly-Pro-Gly)]. Análogos lineares e cíclicos desses peptídeos foram obtidos pela metodologia da síntese peptídica em fase sólida, empregando a estratégia Fmoc/tBu. Os análogos obtidos bem como os peptídeos naturais foram submetidos a diversos ensaios biológicos. Por fim, foi feita uma avaliação mensal qualitativa e/ou quantitativa do perfil ciclopeptídico de espécimes cultivadas de Jatropha curcas L.(Euphorbiaceae), gossypifolia, para verificar se ocorrem alterações na produção destas moléculas em função da época do ano. Os resultados mostraram que as 2 espécies produzem os peptídeos cíclicos durante o ano todo. É interessante notar que as descrições de peptídeos cíclicos na literatura foram obtidas de espécies de Jatropha... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This project is part of the thematic project "Conservation and Sustainable Use of the Plant Diversity from Cerrado and Atlantic Forest: Chemical Diversity and Prospecting for Potencial Drugs" - Biota/FAPESP, and deals with the isolation, purification and characterization of cyclic peptides from Jatropha curcas L. This is a quite new natural product subject in Brazil, which is also important for discovery from our biodiversity. These compounds were obtained through partition of the latex with ethyl acetate, followed of HPLC chromatography for separation and purification. This procedure resulted in two cyclic peptides, which were characterized by amino acid analysis and mass spectrometry. The structures of these compounds were elucidated by 2D Nuclear Magnetic Resonance. One compound was identified as Pohlianin A [c(Pro-Leu-Gly-Val-Leu-Leu-Tyr)], a known cyclic peptide already isolated from XXX, and one novel which was named jatrophidin I [c(Leu-Leu-Asn- Leu-Trp-Cly-Pro-Gly)]. Linear and cyclic analogues of these peptides were obtained through solid phase synthesis methodology by using of Fmoc/tBu reagents. The linear peptides as well as synthetic cyclic peptides were submitted to several biological assays. Finally, the cyclopeptidic profile of Jatropha curcas and gossypifolia was evaluated. The results showed a continuing production of these compounds in both species all over the year. These results can be relevant for further chemotaxonomy and phylogeny studies of Jatropha species that occur in Latin America, and in special Brazil. Previously, all cyclic peptide in the literature search were isolated from African and Asian Jatropha species, and our results can be useful to map the chemical composition of other Brazilian Jatropha species. / Orientador: Vanderlan da Silva Bolzani / Coorientador: Eduardo Maffud Cilli / Banca: Mário Sérgio Palma / Banca: Adriano Defini Andricopulo / Mestre

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, 2016. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-06-08T15:04:33Z No. of bitstreams: 1 2016_FlaviaAugustaDiasGalarza.pdf: 8605816 bytes, checksum: b8ec02ef81f9f2c92381d2d602f2a612 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2016-08-09T12:00:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_FlaviaAugustaDiasGalarza.pdf: 8605816 bytes, checksum: b8ec02ef81f9f2c92381d2d602f2a612 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-09T12:00:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_FlaviaAugustaDiasGalarza.pdf: 8605816 bytes, checksum: b8ec02ef81f9f2c92381d2d602f2a612 (MD5) / O presente trabalho descreve uma metodologia sintética para a obtenção da naftotectona bioativa nas formas racêmica e quiral. A naftotectona é uma quinona isolada do extrato das folhas da Tectona grandis. É uma naftoquinona prenilada biologicamente ativa, com potente atividade alelopática. A estratégia sintética utilizada consistiu no acoplamento do núcleo naftoquinona a uma cadeia lateral por meio da reação de Heck. A síntese enantiosseletiva partiu de um diol alílico quiral, que foi obtido através de uma alquilação alílica assimétrica de um epóxido alílico, catalisada por paládio em presença de um ligante de Trost. O núcleo naftoquinona do produto final foi obtido por eletro-oxidação, ocorrendo duas etapas num sistema “one-pot”. A síntese enantiosseletiva da (S)-naftotectona foi realizada em 5 etapas, a partir da leuconaftazarina, com rendimento global de 36% e excesso enantiomérico de 80%. A (S)-naftotectona e dois intermediários racêmicos foram submetidos a ensaios de viabilidade celular, in vitro, com quatro linhagens de células tumorais (HeLa, IGROV-1-(ovário), SK-MEL-28-(pele), PANC-1-(pâncreas)). A uma concentração de 100 μM os três compostos apresentaram redução de viabilidade em células HeLa. Sobre as linhagens celulares testadas, a (S)-naftotectona teve excelente atividade, a baixas concentrações, sobre células tumorais de ovário, seguido de pele e, num período de 48 h, manifestou visível processo de apoptose em células de pâncreas. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / This work describes a synthetic method for obtaining bioactive naphthotectone, in its racemic and chiral forms. Naphthotectone is a quinone isolated from the teak leave extracts of Tectona grandis. It is a biologically active prenilated naphthoquinone with potent allelopathic activity. The synthetic strategy is based on the coupling of the side chain of the naphthoquinone through a Heck reaction. The enantioselective synthesis started from a chiral allylic diol, which was obtained by a palladium catalyzed asymmetric allylic alkylation of an allylic epoxide using the Trost ligand. The synthetic route involved a last stage one-pot anodic electro-oxidation and demethylation process to access the naphthoquinone nucleus. The enantioselective synthesis of (S)-naphthotectone was obtained in 5 steps from leuconaphthazarin with an overall yield of 36% and an enantiomeric excess of 80%. (S)-Naphthotectone and two racemic intermediates were subjected to cell viability assays, in vitro, with four tumor cell lines: (HeLa, IGROV-1-ovary, SK-MEL-28-skin, PANC-1-pancreas). At a concentration of 100 μM all three compounds showed a good activity in HeLa cells. About the cell lines tested, (S)-naphthotectone had an excellent activity, on low concentrations, over ovarian cells, followed by skin cells and, over 48 h, expressed visible apoptosis in pancreatic cells.

Orientador: Luciana Francisco Fleuri / Resumo: Os resíduos agroindustriais são o destaque deste trabalho. Resíduos de laranja, uma cultura de extrema importância no Brasil, foram utilizados devido ao seu descarte abundante e pelo potencial em conter diversas moléculas de interesse biotecnológico. O objetivo foi avaliar os descartes do processamento de suco de laranja das principais variedades comerciais Hamlin, Pêra, Valência e Natal quanto à presença de enzimas e compostos bioativos. As lipases se mostraram presentes em todas as variedades de laranjas estudadas. Nas variedades Hamlin, Valência e Natal é a primeira vez que lipases são documentadas. As lipases do bagaço e polpa de Hamlin apresentaram 27,45 U/g e 31,13 U/g de atividade lipolítica, respectivamente. As proteases não foram encontradas a partir dos métodos utilizados, deixando em aberto a possibilidade de testar novas metodologias, como critério de caracterização e contribuição literária. O perfil químico dos compostos fenólicos existentes nos resíduos de laranja foi determinado e apresentou cerca de 80% de flavanonas no geral. Além disso, foi detectado alto teor de hesperidina (em mg/100 g) nos resíduos da variedade Pêra (3294,6); Hamlin (2903,2); Natal (2885,9) e Valência (2880,2). Atividades biológicas como antioxidante, antimicrobiana e sobre a viabilidade celular também foram abordadas, sendo que os resíduos apresentaram capacidade de redução do radical DPPH em torno de 70%. No entanto, não apresentaram potencial antimicrobiano frente às bactérias e fungos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre