Submitted by Gisely Teixeira (gisely.teixeira@uniceub.br) on 2018-06-11T17:45:54Z No. of bitstreams: 1 51400302.pdf: 951474 bytes, checksum: 6859fc26e0890958836dfd821941fdf9 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-11T17:45:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 51400302.pdf: 951474 bytes, checksum: 6859fc26e0890958836dfd821941fdf9 (MD5) Previous issue date: 2018 / Neste trabalho, a variável metabólica analisada é a presença de lactato no sangue, ou melhor, a lactacidemia pré e pós - seção de treino de Jiu – Jitsu. O lactato é um sal, produto de via metabólica lática, ou seja, (não é produzido em qualquer circunstância pelo organismo humano). Geralmente, é produto de exercícios de alta intensidade que reflete a característica ácida em que se encontram os tecidos. O objetivo foi avaliar a resposta lactacidêmica em lutadores de Jiu Jitsu em função da suplementação de “Waxy Maize”. Fizeram parte deste estudo vinte (20) voluntários, na cidade de Brasília – DF, divididos aleatoriamente em dois grupos: Grupo Experimental (GE; 10 voluntários) e Grupo Controle (GC; 10 voluntários). Não houve diferença significativa entre os dois grupos na idade (p = 0,205), na massa corporal (p = 0,130), na estatura (p = 0,632), e no índice de massa corporal (p = 0,124). Notam – se diferenças significativas apenas no aumento da concentração de lactato pós – exercício em ambos os grupos quando comparado ao momento pré – treino analisados individualmente. Não se notou efeitos da suplementação “Waxy Maize” para a variação de lactato quando analisados GE e GC.

No seu hábitat, muitos organismos, entre eles os caracóis, estão expostos a um grande número de variáveis ambientais como temperatura, umidade, fotoperiodicidade e disponibilidade de alimento. O caracol Megalobulimus oblongus é um gastrópode terrestre que, durante épocas de estiagem, costuma permanecer enterrado no solo. Com esse comportamento o animal evita a perda de água durante o período de seca, embora nessa condição (enterrado no solo) o animal tenha que enfrentar uma situação de disponibilidade de oxigênio reduzida (hipóxia). O metabolismo dos gastrópodes terrestres está baseado na utilização de carboidratos e as reservas desse polissacarídeo são depletadas durante situações de hipóxia/anoxia. Estudos sobre o metabolismo de moluscos frente a essas condições ambientais adversas, como a própria anoxia, têm sido realizados apenas em tecidos de reserva. Trabalhos relacionando o metabolismo do sistema nervoso durante essa situação são escassos. Dessa forma, o presente trabalho teve como objetivo estudar o metabolismo de carboidratos do sistema nervoso central do caracol Megalobulimus oblongus submetido a diferentes períodos de anoxia e recuperação aeróbia pós-anoxia. Para isso, após o período experimental foram dosadas a concentração de glicogênio e a concentração de glicose livre nos gânglios do sistema nervoso central do animal, além da concentração de glicose hemolinfática. Juntamente com essa abordagem bioquímica, foi realizado um estudo histoquímico semiquantitativo com o objetivo de verificar a atividade da forma ativa da enzima glicogênio fosforilase (GFa) nos gânglios cerebrais dos caracóis submetidos aos períodos de anoxia e recuperação. Foi verificado um aumento da concentração de glicose hemolinfática após o período inicial de 1,5h de anoxia, que se manteve elevado ao longo de todo o período anóxico. A concentração de glicogênio estava significativamente reduzida às 12h de anoxia e a concentração de glicose livre permaneceu constante ao longo de todo o período anóxico, enquanto foi observada uma redução progressiva da GFa. Não foram verificadas mudanças significativas nesses metabólitos nos animais do grupo simulação (“sham”) quando comparados ao grupo controle basal. Durante o período de recuperação aeróbia após 3h de anoxia, os valores de glicose hemolinfática foram reduzidos, retornando aos valores basais após 3h de recuperação aeróbia. A atividade GFa, reduzida durante a anoxia, também retornou aos valores do grupo controle durante a fase de recuperação. A concentração de glicose livre teve uma queda significativa no tempo de 1,5h de recuperação e existiu uma tendência à redução do glicogênio do tecido nervoso às 3h de recuperação aeróbia. A enzima GFa retornou a sua atividade basal durante o período de recuperação. Os resultados sugerem que, em função da elevada concentração de glicose hemolinfática, outros tecidos possam estar fornecendo a glicose necessária para a manutenção do tecido nervoso de Megalobulimus oblongus durante a anoxia, enquanto a redução do glicogênio do tecido nervoso verificada às 12h de anoxia deva estar relacionada ao aumento de atividade do animal durante a escotofase (o grupo 12h de anoxia foi dissecado à noite) somado ao próprio efeito da anoxia. A redução da GFa ao longo do período anóxico pode indicar uma depressão metabólica no tecido nervoso. Durante o início da fase de recuperação aeróbia pós-anoxia, a queda da concentração de glicose livre e a tendência à redução na concentração de glicogênio podem estar relacionadas ao fornecimento da energia necessária para o restabelecimento dos estoques energéticos utilizados durante às 3h iniciais de anoxia, já que a glicose hemolinfática retornou à concentração basal. Como não foi verificada qualquer redução significativa durante às 3h iniciais de anoxia nas concentrações de glicose livre e de x glicogênio nos gânglios nervosos centrais de Megalobulimus oblongus, discute-se a possibilidade de que o tecido nervoso do caracol tenha utilizado reservas de fosfogênios e ATP para satisfazer suas demandas energéticas durante as 3h iniciais de ausência de oxigênio.

ANDRADE, Francisco Regivânio Nascimento. Caracterização e atividade antibiofilme de polissacarídeos sulfatados extraídos da alga marinha verde Enteromorpha sp. cultivada em laboratório. 2017. 72 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia de Recursos Naturais)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Coordenação PPGBiotec (ppgbiotec@ufc.br) on 2017-11-21T18:16:19Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_frnandrade.pdf: 2150209 bytes, checksum: c1f0991392b2cb6567d8aa327466fdbc (MD5) / Approved for entry into archive by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-11-22T21:11:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_frnandrade.pdf: 2150209 bytes, checksum: c1f0991392b2cb6567d8aa327466fdbc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-22T21:11:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_frnandrade.pdf: 2150209 bytes, checksum: c1f0991392b2cb6567d8aa327466fdbc (MD5) Previous issue date: 2017 / Rampant harvesting of algae for extraction of its by products causes a huge environmental problem, one solution to lessening that impact would be to grow it. As green algae became an important source of bioactive compounds, among them the sulfated polysaccharides, the objective was to cultivate the green marine macroalgae Enteromorpha sp. in the laboratory, from the isolation of their spores obtained in nature, and extract, purify, characterize these macromolecules and evaluate their effect against bacterial biofilm formation. The algae were grown in Guillard f / 2 medium and the total sulfated polysaccharides (PST) were extracted by enzymatic digestion with papain and fractionated by ion exchange chromatography DEAE- Cellulose using a stepwise salt gradient with increasing concentrations NaCl (0.5 - 2.0 M). The most metachromatic major fraction was produced in a preparative column, isolated from the others, dialysed and lyophilized. For a better characterization of the extracted polysaccharides, a high efficiency chromatography (HPLC) analysis was performed on a DEAE-Cellulose ion exchange column, eluted by linear NaCl gradient (0 - 3.0M). The PST fractions isolated in the chromatograms were submitted to agarose and polyacrylamide gel electrophoresis. The determination of total sugars, uronic acids and sulfate were by phenol-sulfuric acid, carbazole-sulfuric acid and barium gelatine, respectively. The monosaccharide composition was obtained by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS). The activities of the sulfated polysaccharides on the planktonic growth of bacteria Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa, as well as their action under the formation of biofilms, were analyzed. The algae grew 4 cm high after 70 days of cultivation. The yield of its PST corresponded to 10.8% of its biomass. In the fractionation of PST in DEAE-Cellulose ion exchange chromatography, stepwise, five fractions were obtained (0.7,0.9, 1.2, 1.6, 1.8 M) and the highest metachromatic activity evidenced in the F1.2 M fraction. In the HPLC system, three fractions were isolated from the PST and a single peak from the F1.2 M fraction. The electrophoretic analysis showed a similar mobility, homogenous bands and high molecular weight of samples. The PST and the fractions presented significant amounts of total sugar, varied uronic acid content and high sulfation. The polysaccharide presented monomers of rhamnose (41.49%), xylose (17.35%), glucose (9.51%) and galactose (5.50%), 3-methyl hexauronic acid (6.91%) and 3-methyl hexose (2.81%). In the bacterial assay, a significant decrease in planktonic growth was observed and in relation to biofilm formation the results showed a statistically significant reduction for all concentrations of polysaccharides tested in both bacteria. It is possible to cultivate the green marine macroalgae Enteromorpha sp., in the laboratory from its spores and using colorimetric, turbidimetric, electrophoretic and chromatographic methods, together with mass spectrometry it is possible to fractionate, purify and chemically analyze its structure, in this work it was also concluded. That these molecules are efficient in decreasing the formation of bacterial biofilms. / A colheita desenfreada de algas para extração de seus derivados causa um enorme problema ambiental, uma solução para diminuição desse impacto seria cultivá-las. Visto que as algas verdes se tornaram uma importante fonte de compostos bioativos, dentre eles os polissacarídeos sulfatados, objetivou-se cultivar a macroalga marinha verde Enteromorpha sp. em laboratório, a partir do isolamento de seus esporos obtidos na natureza, e dela extrair, purificar, caracterizar essas macromoléculas e avaliar seu efeito frente a formação de biofilme bacteriano. A alga foi cultivada em meio Guillard f/2 e os polissacarídeos sulfatados totais (PST) foram extraídos por digestão enzimática com papaína e fracionados em cromatografia de troca iônica DEAE-Celulose usando um gradiente salino do tipo “stepwise” com concentrações crescentes de NaCl (0,5 - 2,0 M). A fração majoritária mais metacromática foi produzida em coluna preparativa, isolada das demais, dialisada e liofilizada. Para melhor caracterização dos polissacarídeos extraídos, realizou-se uma análise por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) em uma coluna de troca iônica DEAE-Celulose, eluída por gradiente linear de NaCl (0 - 3,0 M). As frações de PST isoladas nas cromatografias, foram submetidos à eletroforese em gel de agarose e poliacrilamida. A determinação de açúcares totais, ácidos urônicos e sulfato foram pelos métodos fenol-ácido sulfúrico, carbazol-ácido sulfúrico e gelatina bário, respectivamente. A composição monossacarídica foi obtida por cromatografia em fase gasosa acoplada a espectrometria de massa (CG-EM). Foram analisadas as atividades dos polissacarídeos sulfatados sobre o crescimento planctônico das bactérias Staphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa, bem como a sua ação sob a formação de biofilmes. A alga cresceu 4 cm de altura após 70 dias de cultivo. O rendimento de seu PST correspondeu a 10,8% de sua biomassa. No fracionamento do PST em cromatografia de troca iônica DEAE-Celulose, do tipo “stepwise”, foram obtidas cinco frações (0,7; 0,9; 1,2; 1,6 e 1,8 M) e a maior atividade metacromática evidenciada na fração F1,2M. Em sistema CLAE foram isoladas três frações a partir dos PST e um único pico a partir da fração F1,2M. A análise eletroforética revelou uma mobilidade bastante semelhante, bandas homogenias e alto peso molecular das amostras. O PST e as frações apresentaram quantidades significativas de açúcar total, variado teor de ácidos urônicos e alta sulfatação. O polissacarídeo apresentou em sua composição monômeros de ramnose (41,49%), xilose (17,35%), glicose (9,51%) e galactose (5,50%), 3-metil-ácido hexaurônico (6,91%) e 3-metil-hexose (2,81%). No ensaio bacteriano, observou-se uma diminuição significativa do crescimento planctônico e em relação a formação do biofilme os resultados mostraram redução estatisticamente significativa para todas as concentrações de polissacarídeos testadas, em ambas as bactérias. É possível cultivar a macroalga marinha verde Enteromorpha sp., em laboratório a partir de seus esporos e utilizando métodos colorimétricos, turbidimétricos, eletroforéticos e cromatográficos, aliado a espectrometria de massa é possível fracionar, purificar e analisar quimicamente sua estrutura, nesse trabalho concluiu-se também que essas moléculas são eficientes em diminuir a formação de biofilmes bacterianos.

No seu hábitat, muitos organismos, entre eles os caracóis, estão expostos a um grande número de variáveis ambientais como temperatura, umidade, fotoperiodicidade e disponibilidade de alimento. O caracol Megalobulimus oblongus é um gastrópode terrestre que, durante épocas de estiagem, costuma permanecer enterrado no solo. Com esse comportamento o animal evita a perda de água durante o período de seca, embora nessa condição (enterrado no solo) o animal tenha que enfrentar uma situação de disponibilidade de oxigênio reduzida (hipóxia). O metabolismo dos gastrópodes terrestres está baseado na utilização de carboidratos e as reservas desse polissacarídeo são depletadas durante situações de hipóxia/anoxia. Estudos sobre o metabolismo de moluscos frente a essas condições ambientais adversas, como a própria anoxia, têm sido realizados apenas em tecidos de reserva. Trabalhos relacionando o metabolismo do sistema nervoso durante essa situação são escassos. Dessa forma, o presente trabalho teve como objetivo estudar o metabolismo de carboidratos do sistema nervoso central do caracol Megalobulimus oblongus submetido a diferentes períodos de anoxia e recuperação aeróbia pós-anoxia. Para isso, após o período experimental foram dosadas a concentração de glicogênio e a concentração de glicose livre nos gânglios do sistema nervoso central do animal, além da concentração de glicose hemolinfática. Juntamente com essa abordagem bioquímica, foi realizado um estudo histoquímico semiquantitativo com o objetivo de verificar a atividade da forma ativa da enzima glicogênio fosforilase (GFa) nos gânglios cerebrais dos caracóis submetidos aos períodos de anoxia e recuperação. Foi verificado um aumento da concentração de glicose hemolinfática após o período inicial de 1,5h de anoxia, que se manteve elevado ao longo de todo o período anóxico. A concentração de glicogênio estava significativamente reduzida às 12h de anoxia e a concentração de glicose livre permaneceu constante ao longo de todo o período anóxico, enquanto foi observada uma redução progressiva da GFa. Não foram verificadas mudanças significativas nesses metabólitos nos animais do grupo simulação (“sham”) quando comparados ao grupo controle basal. Durante o período de recuperação aeróbia após 3h de anoxia, os valores de glicose hemolinfática foram reduzidos, retornando aos valores basais após 3h de recuperação aeróbia. A atividade GFa, reduzida durante a anoxia, também retornou aos valores do grupo controle durante a fase de recuperação. A concentração de glicose livre teve uma queda significativa no tempo de 1,5h de recuperação e existiu uma tendência à redução do glicogênio do tecido nervoso às 3h de recuperação aeróbia. A enzima GFa retornou a sua atividade basal durante o período de recuperação. Os resultados sugerem que, em função da elevada concentração de glicose hemolinfática, outros tecidos possam estar fornecendo a glicose necessária para a manutenção do tecido nervoso de Megalobulimus oblongus durante a anoxia, enquanto a redução do glicogênio do tecido nervoso verificada às 12h de anoxia deva estar relacionada ao aumento de atividade do animal durante a escotofase (o grupo 12h de anoxia foi dissecado à noite) somado ao próprio efeito da anoxia. A redução da GFa ao longo do período anóxico pode indicar uma depressão metabólica no tecido nervoso. Durante o início da fase de recuperação aeróbia pós-anoxia, a queda da concentração de glicose livre e a tendência à redução na concentração de glicogênio podem estar relacionadas ao fornecimento da energia necessária para o restabelecimento dos estoques energéticos utilizados durante às 3h iniciais de anoxia, já que a glicose hemolinfática retornou à concentração basal. Como não foi verificada qualquer redução significativa durante às 3h iniciais de anoxia nas concentrações de glicose livre e de x glicogênio nos gânglios nervosos centrais de Megalobulimus oblongus, discute-se a possibilidade de que o tecido nervoso do caracol tenha utilizado reservas de fosfogênios e ATP para satisfazer suas demandas energéticas durante as 3h iniciais de ausência de oxigênio.

No seu hábitat, muitos organismos, entre eles os caracóis, estão expostos a um grande número de variáveis ambientais como temperatura, umidade, fotoperiodicidade e disponibilidade de alimento. O caracol Megalobulimus oblongus é um gastrópode terrestre que, durante épocas de estiagem, costuma permanecer enterrado no solo. Com esse comportamento o animal evita a perda de água durante o período de seca, embora nessa condição (enterrado no solo) o animal tenha que enfrentar uma situação de disponibilidade de oxigênio reduzida (hipóxia). O metabolismo dos gastrópodes terrestres está baseado na utilização de carboidratos e as reservas desse polissacarídeo são depletadas durante situações de hipóxia/anoxia. Estudos sobre o metabolismo de moluscos frente a essas condições ambientais adversas, como a própria anoxia, têm sido realizados apenas em tecidos de reserva. Trabalhos relacionando o metabolismo do sistema nervoso durante essa situação são escassos. Dessa forma, o presente trabalho teve como objetivo estudar o metabolismo de carboidratos do sistema nervoso central do caracol Megalobulimus oblongus submetido a diferentes períodos de anoxia e recuperação aeróbia pós-anoxia. Para isso, após o período experimental foram dosadas a concentração de glicogênio e a concentração de glicose livre nos gânglios do sistema nervoso central do animal, além da concentração de glicose hemolinfática. Juntamente com essa abordagem bioquímica, foi realizado um estudo histoquímico semiquantitativo com o objetivo de verificar a atividade da forma ativa da enzima glicogênio fosforilase (GFa) nos gânglios cerebrais dos caracóis submetidos aos períodos de anoxia e recuperação. Foi verificado um aumento da concentração de glicose hemolinfática após o período inicial de 1,5h de anoxia, que se manteve elevado ao longo de todo o período anóxico. A concentração de glicogênio estava significativamente reduzida às 12h de anoxia e a concentração de glicose livre permaneceu constante ao longo de todo o período anóxico, enquanto foi observada uma redução progressiva da GFa. Não foram verificadas mudanças significativas nesses metabólitos nos animais do grupo simulação (“sham”) quando comparados ao grupo controle basal. Durante o período de recuperação aeróbia após 3h de anoxia, os valores de glicose hemolinfática foram reduzidos, retornando aos valores basais após 3h de recuperação aeróbia. A atividade GFa, reduzida durante a anoxia, também retornou aos valores do grupo controle durante a fase de recuperação. A concentração de glicose livre teve uma queda significativa no tempo de 1,5h de recuperação e existiu uma tendência à redução do glicogênio do tecido nervoso às 3h de recuperação aeróbia. A enzima GFa retornou a sua atividade basal durante o período de recuperação. Os resultados sugerem que, em função da elevada concentração de glicose hemolinfática, outros tecidos possam estar fornecendo a glicose necessária para a manutenção do tecido nervoso de Megalobulimus oblongus durante a anoxia, enquanto a redução do glicogênio do tecido nervoso verificada às 12h de anoxia deva estar relacionada ao aumento de atividade do animal durante a escotofase (o grupo 12h de anoxia foi dissecado à noite) somado ao próprio efeito da anoxia. A redução da GFa ao longo do período anóxico pode indicar uma depressão metabólica no tecido nervoso. Durante o início da fase de recuperação aeróbia pós-anoxia, a queda da concentração de glicose livre e a tendência à redução na concentração de glicogênio podem estar relacionadas ao fornecimento da energia necessária para o restabelecimento dos estoques energéticos utilizados durante às 3h iniciais de anoxia, já que a glicose hemolinfática retornou à concentração basal. Como não foi verificada qualquer redução significativa durante às 3h iniciais de anoxia nas concentrações de glicose livre e de x glicogênio nos gânglios nervosos centrais de Megalobulimus oblongus, discute-se a possibilidade de que o tecido nervoso do caracol tenha utilizado reservas de fosfogênios e ATP para satisfazer suas demandas energéticas durante as 3h iniciais de ausência de oxigênio.

Submitted by Gisely Teixeira (gisely.teixeira@uniceub.br) on 2018-06-11T17:45:54Z No. of bitstreams: 1 51400302.pdf: 951474 bytes, checksum: 6859fc26e0890958836dfd821941fdf9 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-11T17:45:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 51400302.pdf: 951474 bytes, checksum: 6859fc26e0890958836dfd821941fdf9 (MD5) Previous issue date: 2018 / Neste trabalho, a variável metabólica analisada é a presença de lactato no sangue, ou melhor, a lactacidemia pré e pós - seção de treino de Jiu – Jitsu. O lactato é um sal, produto de via metabólica lática, ou seja, (não é produzido em qualquer circunstância pelo organismo humano). Geralmente, é produto de exercícios de alta intensidade que reflete a característica ácida em que se encontram os tecidos. O objetivo foi avaliar a resposta lactacidêmica em lutadores de Jiu Jitsu em função da suplementação de “Waxy Maize”. Fizeram parte deste estudo vinte (20) voluntários, na cidade de Brasília – DF, divididos aleatoriamente em dois grupos: Grupo Experimental (GE; 10 voluntários) e Grupo Controle (GC; 10 voluntários). Não houve diferença significativa entre os dois grupos na idade (p = 0,205), na massa corporal (p = 0,130), na estatura (p = 0,632), e no índice de massa corporal (p = 0,124). Notam – se diferenças significativas apenas no aumento da concentração de lactato pós – exercício em ambos os grupos quando comparado ao momento pré – treino analisados individualmente. Não se notou efeitos da suplementação “Waxy Maize” para a variação de lactato quando analisados GE e GC.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:36:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_6615_Jose Arcanjo Nunes.pdf: 808121 bytes, checksum: 5388986520723a2d9254b75dde7fd51a (MD5) Previous issue date: 2013-12-17 / Foram realizados dois experimentos com os objetivos de avaliar os efeitos de diferentes concentrações de sacarose no crescimento in vitro de mudas de Vanilla planifolia, e analisar as variáveis morfológicas de mudas de V. planifolia cultivadas em diferentes recipientes e diferentes substratos. Para isso, no experimento 1, mudas provenientes da proliferação de gemas axilares foram cultivadas in vitro em cinco concentrações de sacarose (0, 15, 30, 45 e 60 g L-1), com quatro repetições de dez mudas, em delineamento inteiramente casualizado. Variáveis morfológicas, fluorescência da clorofila a, teor de amido, taxa de perda de água e o pH do meio de cultura foram avaliados 60 dias após a inoculação das mudas. As diferentes concentrações de sacarose influenciaram todas as características morfológicas e os parâmetros fisiológicos estudados. Os dados relativos aos aspectos morfofisiológicos de mudas de V. planifolia provenientes de micropropagação sugerem a viabilidade técnica para a propagação em larga escala de mudas dessa espécie. No experimento 2, estudou-se as variáveis morfológicas de mudas de V. planifolia provenientes da proliferação de gemas axilares e da propagação seminífera in vitro, cultivadas em diferentes recipientes e diferentes substratos. O experimento foi realizado em esquema de parcelas subsubdivididas, constituídas pelas combinações entre os fatores: recipiente (sacola e bandeja), substrato (preparado I e preparado II) e muda (micropropagada e plântula), num delineamento inteiramente casualizado, com quatro repetições de oito mudas. A combinação de recipiente sacola, substrato II (solo, areia, esterco de galinha e serrapilheira de mata) e muda micropropagada de gema axilar pode ser usada na produção de mudas de V. planifolia. Palavras-chave: Vanilla planifolia. Carboidrato. Gema axilar. Substrato.

A ocorrência de frutanos em espécies de Asteraceae foi amplamente documentada para a flora da região de cerrado da Reserva Biológica e Estação Experimental de Moji Guaçu. Dentre estas espécies destaca-se Vernonia herbacea, uma planta perene que apresenta órgãos subterrâneos de reserva, denominados rizóforos, que acumulam altos teores de frutanos do tipo inulina. Seu crescimento sazonal é caracterizado pela brotação das gemas existentes nos rizóforos, na primavera, seguida de floração e crescimento vegetativo intenso no verão e dormência no inverno. O conteúdo de frutanos diminui durante a brotação e floração, pois este carboidrato parece ser utilizado para a regeneração dos ramos aéreos que ocorre nesta fase. Estudos preliminares mostraram que a FEH, responsável pela mobilização dos frutanos, apresenta atividade elevada apenas durante a brotação; a despolimerização dos frutanos nos rizóforos de V. herbacea nesta fase foi evidenciada pelo aumento de açúcar redutor, especialmente frutose. O presente estudo teve como objetivo principal a análise da atividade das enzimas envolvidas no metabolismo de frutanos e análise do conteúdo e da composição de frutanos em rizóforos de V. herbacea induzidas à brotação. A brotação foi induzida pela remoção dos ramos aéreos e as atividades das enzimas FEH , SST, FFT e INV foram determinadas a cada quatro dias durante um mês após a poda. Um aumento na atividade da FEH foi observado entre os dias 13 e 20 após a poda, o que coincidiu com o início da brotação dos novos ramos que ocorreu no 13º dia. Este resultado sugere que a despolimerização de frutanos e a brotação são processos concomitantes em V. herbacea, que ocorrem naturalmente durante o ciclo fenológico, mas que também podem ser induzidos em outras fases do ciclo fenológico pela remoção dos ramos aéreos. A FFT parece atuar junto à FEH na diminuição do tamanho das cadeias de frutanos durante a rebrota, enquanto a SST é inibida devido, possivelmente, à interrupção do fornecimento de sacarose aos rizóforos pelos órgãos aéreos. Para a caracterização e purificação parcial da FEH de rizóforos de V. herbacea foram utilizados rizóforos de plantas induzidas à brotação através da remoção dos ramos aéreos. O extrato bruto apresentou, para atividade de FEH, pH ótimo de 4,5, temperatura ótima em 30 ºC e curva sigmoidal de concentração de substrato, sugerindo tratar-se de uma enzima alostérica. Esta enzima também apresentou maior especificidade por ligações do tipo b-2,1 do que sobre ligações b-2,6, e maior afinidade por frutanos de cadeias curtas quando comparadas com frutanos de cadeias longas. Utilizando precipitação com sulfato de amônia, cromatografia de afinidade e cromatografias de troca aniônica e catiônica, quatro frações com atividade de FEH foram purificadas. Destas quatro frações, duas foram submetidas à cromatografia de exclusão molecular, sendo que os pesos moleculares estimados para uma delas foi de 21 kDa e para outra, esta medida situou-se entre 155 e 39 kDa, devido à ampla faixa de exclusão da coluna utilizada. Os pesos moleculares das outras duas frações foram estimados por SDS-PAGE, sendo que as bandas visualizadas corresponderam a 81,3 e 57,5 kDa para uma e 57,5 kDa para a outra fração. / The occurrence of fructans has been reported in native species of a cerrado area of Reserva Biológica e Estação Experimental de Moji Guaçu. Vernonia herbacea, one of these species, presents underground organs named rhizophores which accumulate fructans of the inulin type as reserve carbohydrate. The seasonal growth pattern exhibited by plants of V. herbacea includes sprouting of buds from the rhizophores in spring, followed by a period of flower development and vegetative growth in summer, and dormancy in winter. The fructan content decreases during sprouting and flowering due to mobilization of this carbohydrate during the regeneration of the new shoots. Preliminary studies showed that FEH, the enzyme responsible for the mobilization of fructan, shows high activity only during sprouting. Fructan mobilization was detected by the increase in the amount of reducing sugar released, namely fructose. The aim of this work was to analyze the activities of the enzymes of fructan metabolism, FEH, SST, FFT and invertase and the fructan contents in rhizophores of plants induced to sprouting by defoliation. The enzyme activities were measured every 4 th day for a month after defoliation. Sprouting of new shoots started around the 13 th day, while an increase in FEH activity was detected between 13 and 20 days after defoliation. The results suggest that fructan depolimerization and sprouting are concomitant processes in V. herbacea that occur naturally during the phenological cycle; however, these processes can also be induced by defoliation during other stages of the phenological cycle. FFT seems to act together with FEH by catalyzing the decrease in fructan chain size during shoot regrowth, while SST was inhibited, possibly, due to interruption of sucrose supply to rhizophores from the aerial organs. The characterization and partial purification of FEH were done using rhizophores from plants which were induced to sprouting by defoliation. The optimal pH and temperature for FEH activity were pH4,5 and 30ºC, respectively. The substrate concentration curve exhibited a sigmoid shape, suggesting that FEH of V. herbacea is an alosteric enzyme. Additionally, this enzyme shows more specificity to b-2,1 than to b-2,6 linked fructan and higher affinity for short chain when compared to long chain fructans. Four fractions presenting FEH activity were partially purified by a combination of ammonium sulfate precipitation, affinity chromatography, and anion and cation exchange chromatographies. Two of these were submitted to size exclusion chromatography and the apparent molecular size for one of them was 21 kDa and for the other it was estimated to be between 39 and 155 kDa, due to the wide exclusion limit of the column used. The molecular size of the next two fractions were estimated by SDS- PAGE and the visualized bands corresponded to 81.3 and 57.5 kDa for the first fraction and to 57.5 kDa for the second one.

A ocorrência de frutanos em espécies de Asteraceae foi amplamente documentada para a flora da região de cerrado da Reserva Biológica e Estação Experimental de Moji Guaçu. Dentre estas espécies destaca-se Vernonia herbacea, uma planta perene que apresenta órgãos subterrâneos de reserva, denominados rizóforos, que acumulam altos teores de frutanos do tipo inulina. Seu crescimento sazonal é caracterizado pela brotação das gemas existentes nos rizóforos, na primavera, seguida de floração e crescimento vegetativo intenso no verão e dormência no inverno. O conteúdo de frutanos diminui durante a brotação e floração, pois este carboidrato parece ser utilizado para a regeneração dos ramos aéreos que ocorre nesta fase. Estudos preliminares mostraram que a FEH, responsável pela mobilização dos frutanos, apresenta atividade elevada apenas durante a brotação; a despolimerização dos frutanos nos rizóforos de V. herbacea nesta fase foi evidenciada pelo aumento de açúcar redutor, especialmente frutose. O presente estudo teve como objetivo principal a análise da atividade das enzimas envolvidas no metabolismo de frutanos e análise do conteúdo e da composição de frutanos em rizóforos de V. herbacea induzidas à brotação. A brotação foi induzida pela remoção dos ramos aéreos e as atividades das enzimas FEH , SST, FFT e INV foram determinadas a cada quatro dias durante um mês após a poda. Um aumento na atividade da FEH foi observado entre os dias 13 e 20 após a poda, o que coincidiu com o início da brotação dos novos ramos que ocorreu no 13º dia. Este resultado sugere que a despolimerização de frutanos e a brotação são processos concomitantes em V. herbacea, que ocorrem naturalmente durante o ciclo fenológico, mas que também podem ser induzidos em outras fases do ciclo fenológico pela remoção dos ramos aéreos. A FFT parece atuar junto à FEH na diminuição do tamanho das cadeias de frutanos durante a rebrota, enquanto a SST é inibida devido, possivelmente, à interrupção do fornecimento de sacarose aos rizóforos pelos órgãos aéreos. Para a caracterização e purificação parcial da FEH de rizóforos de V. herbacea foram utilizados rizóforos de plantas induzidas à brotação através da remoção dos ramos aéreos. O extrato bruto apresentou, para atividade de FEH, pH ótimo de 4,5, temperatura ótima em 30 ºC e curva sigmoidal de concentração de substrato, sugerindo tratar-se de uma enzima alostérica. Esta enzima também apresentou maior especificidade por ligações do tipo b-2,1 do que sobre ligações b-2,6, e maior afinidade por frutanos de cadeias curtas quando comparadas com frutanos de cadeias longas. Utilizando precipitação com sulfato de amônia, cromatografia de afinidade e cromatografias de troca aniônica e catiônica, quatro frações com atividade de FEH foram purificadas. Destas quatro frações, duas foram submetidas à cromatografia de exclusão molecular, sendo que os pesos moleculares estimados para uma delas foi de 21 kDa e para outra, esta medida situou-se entre 155 e 39 kDa, devido à ampla faixa de exclusão da coluna utilizada. Os pesos moleculares das outras duas frações foram estimados por SDS-PAGE, sendo que as bandas visualizadas corresponderam a 81,3 e 57,5 kDa para uma e 57,5 kDa para a outra fração. / The occurrence of fructans has been reported in native species of a cerrado area of Reserva Biológica e Estação Experimental de Moji Guaçu. Vernonia herbacea, one of these species, presents underground organs named rhizophores which accumulate fructans of the inulin type as reserve carbohydrate. The seasonal growth pattern exhibited by plants of V. herbacea includes sprouting of buds from the rhizophores in spring, followed by a period of flower development and vegetative growth in summer, and dormancy in winter. The fructan content decreases during sprouting and flowering due to mobilization of this carbohydrate during the regeneration of the new shoots. Preliminary studies showed that FEH, the enzyme responsible for the mobilization of fructan, shows high activity only during sprouting. Fructan mobilization was detected by the increase in the amount of reducing sugar released, namely fructose. The aim of this work was to analyze the activities of the enzymes of fructan metabolism, FEH, SST, FFT and invertase and the fructan contents in rhizophores of plants induced to sprouting by defoliation. The enzyme activities were measured every 4 th day for a month after defoliation. Sprouting of new shoots started around the 13 th day, while an increase in FEH activity was detected between 13 and 20 days after defoliation. The results suggest that fructan depolimerization and sprouting are concomitant processes in V. herbacea that occur naturally during the phenological cycle; however, these processes can also be induced by defoliation during other stages of the phenological cycle. FFT seems to act together with FEH by catalyzing the decrease in fructan chain size during shoot regrowth, while SST was inhibited, possibly, due to interruption of sucrose supply to rhizophores from the aerial organs. The characterization and partial purification of FEH were done using rhizophores from plants which were induced to sprouting by defoliation. The optimal pH and temperature for FEH activity were pH4,5 and 30ºC, respectively. The substrate concentration curve exhibited a sigmoid shape, suggesting that FEH of V. herbacea is an alosteric enzyme. Additionally, this enzyme shows more specificity to b-2,1 than to b-2,6 linked fructan and higher affinity for short chain when compared to long chain fructans. Four fractions presenting FEH activity were partially purified by a combination of ammonium sulfate precipitation, affinity chromatography, and anion and cation exchange chromatographies. Two of these were submitted to size exclusion chromatography and the apparent molecular size for one of them was 21 kDa and for the other it was estimated to be between 39 and 155 kDa, due to the wide exclusion limit of the column used. The molecular size of the next two fractions were estimated by SDS- PAGE and the visualized bands corresponded to 81.3 and 57.5 kDa for the first fraction and to 57.5 kDa for the second one.

A análise de fluxos metabólicos para a produção de PHAMCL por Pseudomonas sp. LFM046 revelou que a baixa eficiência de conversão de carboidratos em PHA (60-70% do valor máximo teórico) deve estar associada à utilização principal da via das pentoses (VP) para o metabolismo de carboidratos. Eficiências significativamente maiores poderiam ser obtidas se uma parcela maior da glicose fosse metabolizada pela via Entner-Doudoroff (ED). Assim, neste trabalho foi realizada a análise de fluxos metabólicos utilizando glicose marcada (C13) e o melhoramento genético de Pseudomonas sp. LFM046 utilizando estratégia de engenharia metabólica. Experimentos com glicose marcada confirmaram um maior fluxo de carboidratos pela VP em relação a ED. A superexpressão de genes específicos de ED em Pseudomonas sp. LFM046 demonstrou apenas pequenos aumentos na eficiência de conversão de carboidratos em PHA pelas linhagens recombinantes. / The metabolic flux analysis for PHAMCL production by Pseudomonas sp. LFM046 revealed that the low efficiency of carbohydrates conversion into PHA (60-70% of the maximum theoretical value) should be associated with the main use of pentose phosphate pathway (PP) for the carbohydrate metabolism. Significantly higher efficiencies could be obtained if a larger portion of the glucose was metabolized via the Entner-Doudoroff (ED). Therefore, the metabolic fluxes analysis was performed in this work using labeled glucose (13C) and the genetic improvement of Pseudomonas sp. LFM046 by using metabolic engineering approach. Experiments with labeled glucose confirmed an increased flow of carbohydrates by PP compared to ED. The overexpression of specific genes from ED in Pseudomonas sp. LFM046 showed only small increases in the efficiency of carbohydrates conversion into PHA by recombinant strains.