Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2007. / Submitted by Kathryn Cardim Araujo (kathryn.cardim@gmail.com) on 2009-10-22T17:51:19Z No. of bitstreams: 1 Tese Simoneide.pdf: 6195850 bytes, checksum: bfd9d9f409c6a3957ff896fd765de757 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-10-25T13:20:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese Simoneide.pdf: 6195850 bytes, checksum: bfd9d9f409c6a3957ff896fd765de757 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-10-25T13:20:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Simoneide.pdf: 6195850 bytes, checksum: bfd9d9f409c6a3957ff896fd765de757 (MD5) Previous issue date: 2007-10-02 / Paracoccidioides brasiliensis e Histoplasma capsulatum são os agentes etiológicos da Paracoccidioidomicose e Histoplasmose, respectivamente. Paracoccidioides brasiliensis causa uma micose sistêmica em humanos com maior incidência na América Latina enquanto Histoplasma capsulatum pode ser encontrado principalmente nos Estados Unidos. A regulação gênica global de genes envolvidos na resposta inata contra estes fungos é pouco conhecida. No presente trabalho foi investigado o perfil transcricional de macrófagos infectados com P. brasiliensis e Histoplasma capsulatum. O RNA total de macrófagos infectados e não infectados foi extraído, hibridizado contra microarranjos de cDNA e analisados. A abordagem cinética usada neste trabalho para analisar o perfil transcricional de macrófagos murinos durante a interação tanto com P. brasiliensis quanto por H. capsulatum proporcionou um melhor entendimento dos eventos que culminam na ativação coordenada e temporal de moléculas de defesa durante esta interação. Os resultados encontrados neste trabalho indicam que as leveduras destes patógenos induzem nos macrófagos uma modulação gênica dinâmica de moléculas que podem favorecer inicialmente a sobrevivência destes fungos no interior dos fagócitos. Por outro lado, observou-se nesta interação que os macrófagos parecem responder induzindo genes relacionados a atividade fungicida, possivelmente na tentativa de conter a disseminação do fungo. Adicionalmente, considerando as análises simultâneas de expressão gênica diferencial para o P. brasiliensis, descrito por nosso grupo em trabalho anterior, após 6 horas de infecção, foi proposto um modelo de interação para o P. brasiliensis-macrófago. Dessa forma, a indução da expressão de genes pelo fungo importantes para sua adaptação no microambiente do macrófago aliado a indução de moléculas do macrófago relacionados a quimiotaxia e fagocitose sugere que a invasão de novas células pelo fungo pode ser uma estratégia favorável para esse patógeno se manter viável e se multiplicar no hospedeiro. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Paracoccidioides brasiliensis and Histoplasma capsulatum are the thermo-dimorphic fungi that cause the Paracoccidioidomycosis and Histoplasmose, respectively. Paracoccidioides brasiliensis causes a human systemic mycosis with high incidence in Latin America and Histoplasma capsulatum is specially found in the United States. Little is known about the global regulation of genes involved in the innate immune host response to this fungus. In the presente work was investigated the kinetic profile of peritoneal macrophage infected with P. brasiliensis and Histoplasma capsulatum. Total RNA from infected and non infected macrophages was extracted, hybridized onto arrays and analyzed. The results showed in this work to suggest which the pathogens have been induced in macrophages a dynamic gene modulation that can create favorable conditions for fungal persistence. By the other hand the macrophages to induced genes related with fungicide activity, probably in a tentative of elimination of the fungus. In addition, considering the simultaneous analyses of differential gene expression for the P. brasiliensis reported before by our group, at six hours post infection, was proposed a model at molecular level for the P. brasiliensis-macrophage early interaction. In this regard, the induction of gene expression by P. brasiliensis specially related which its adaptation in macrophage microenvironment of macrophage probably is a strategy developed by this fungus for its viability into the host cells.

Platynosomum fastosum (sin. P. illiciens, P. concinnum) is a digenean trematode of the family Dicrocoeliidae, that inhabits biliary tract of domestic and wild cats, whose infection goes from assymptomatic to letal. The prevalence of this trematode varies from 15 to 85% in tropical countries. In Brazil, available data is limited to case reports and few local epidemiological surveys. In CearÃ, it was never performed an epidemiological survey, but a case report was recently published. The objective of this study was to calculate the prevalence of the P. fastosum infection, characterizing the main lesions associated to its pathogenesis, in free roaming cats in the municipality of MaracanaÃ, CearÃ. It was performed an epidemiological pathological analitical cross-sectional survey about the P. fastosum infection in a sample of cats, received or captured by the Zoonosis Control Office of MaracanaÃ, between May/2014 and May/2015. This study was approved by the Animal Ethics ComitÃe of UFC (#40/2014). In a probabilist sample, 141 screened cats were euthanized by approved injection (CFMV, 2012) and submitted to necropsy. Livers and gallbladders were collected to recover trematodes and perform histopathology. Observed prevalence was 42,5% (60/141, IC95%=34,2 â 50,9). Fluke burden varied from 1 to 219. It was observed no difference in prevalence between males and females (p>0,05), but the adults were more frequently infected than the young ones (p<0,00001). Risk of cholangitis was at least three fold greater in infected ones (RP=3,23; IC95%=2,01-5,07; p<0,00001). Mononuclear infiltrates were the most frequent and significant findings, and the choledoco was the most affected site. Fibrosis, inflammation, glandular and mucosae hyperplasias were significantly different in choledocos of infected ones (p<0,01). Microscopic lesions considered precursors of cholangiocarcinoma were detected but no tumor was diagnosed. In summary, P. fastosum is present in the municipality of MaracanaÃ, CearÃ, in moderated prevalence, in free roaming cats. Control propositions should be designed by multidisciplinar teams, evaluating sanitary and ecological aspects. / A espÃcie Platynosomum fastosum (sin. P. illiciens, P. concinnum), digenÃtico da famÃlia Dicrocoeliidae, à um trematÃdeo do trato biliar de gatos domÃsticos e silvestres, cuja infecÃÃo varia de assintomÃtica à letal. A prevalÃncia da infecÃÃo pelo trematÃdeo varia entre 15 e 85% em paÃses tropicais. No Brasil, os dados se limitam a relatos de caso e a alguns inquÃritos epidemiolÃgicos locais. No CearÃ, nÃo existem estudos de prevalÃncia sobre esse trematÃdeo, mas recentemente um relato de caso foi publicado. O objetivo deste trabalho foi conhecer a prevalÃncia da infecÃÃo de P. fastosum, caracterizando as principais lesÃes associadas à sua patogÃnese, em gatos nÃo domiciliados do municÃpio de MaracanaÃ, CearÃ. Foi realizado um estudo epidemio-patolÃgico, transversal e analÃtico, sobre a infecÃÃo de P. fastosum em uma amostra de gatos (Felis catus) capturados pelo Centro de Controle de Zoonoses da cidade de MaracanaÃ, durante o perÃodo de Maio/2014 a Maio/2015. Este estudo foi aprovado pelo Comità de Ãtica em Pesquisa Animal da UFC, sob o n 40/2014. Conforme cÃlculo amostral e apÃs triagem, 141 gatos foram submetidos à eutanÃsia por mÃtodos Ãticos (CFMV, 2012) e submetidos à necrÃpsia. Foram colhidos o fÃgado e a vesÃcula biliar para recuperaÃÃo de trematÃdeos e anÃlise histopatolÃgica. A prevalÃncia observada foi de 42,5% (60/141, IC95% = 34,2 â 50,9). A carga parasitÃria recuperada variou de 1 a 219. NÃo houve diferenÃa de prevalÃncia entre machos e fÃmeas (p>0,05), mas os adultos foram mais infectados do que os jovens (p<0,00001). O risco de colangites foi trÃs vezes maior nos infectados (RP=3,23; IC95%=2,01-5,07; p<0,00001). Os infiltrados mononucleares foram os achados mais frequentes e significativos, e o colÃdoco foi o ÃrgÃo mais afetado. Foram detectadas 43,1% (25/58) de colangites crÃnicas nos infectados. Fibrose, inflamaÃÃo, hiperplasias glandular e mucosa tiveram diferenÃa significativa no colÃdoco de animais infectados (p<0,01). LesÃes microscÃpicas consideradas precursoras de colangiocarcinoma foram detectadas, mas nenhum tumor foi diagnosticado. Desta forma, observou-se que P. fastosum ocorre em prevalÃncia moderada em gatos nÃo domiciliados de MaracanaÃ, CearÃ. Plano de controle da infecÃÃo deve ser estruturado por equipe multidisciplinar, avaliando aspectos sanitÃrios e ecolÃgicos.

Orientadores : Jose Vassallo, Sergio Luiz de Faria / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-27T23:02:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Salome_LucianaGusmaodeAndradeLima_M.pdf: 14132329 bytes, checksum: 5490ed655e75a237f6dbcb4827b6a8b2 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: o presente trabalho é um estudo retrospectivo, que tem como objetivo avaliar a expressão de alguns marcadores imuno-histoquímicos- ER, CEA , vimentina, p53, cerbB-2 e bcl-2 - em casos de carcinoma mamário em relação ao seguimento clínico observado nas pacientes que compõem o grupo estudado, visando estabelecer o valor prognóstico de cada um destes marcadores, bem como uma possível relação entre suas expressões. Foram estudados 40 casos de carcinoma mamário, nos quais foi feita uma revisão do diagnóstico histopatológico e em seguida o estudo imuno-histoquímico, com classificação da reação segundo o percentual de células positivas. Para a análise estatística foram utilizados os testes Qui- quadrado, Kaplan- Meyer, regressão Cox e Cox- Mantel. Não houve relação estatisticamente significativa isolada de nenhum marcador com o prognóstico, apenas o C-erb-B2 mostrou uma tendência de associação entre sua expressão e melhor prognóstico (p= 0,09). Não houve em nosso estudo nenhuma associação significativa entre a expressão dos marcadores estudados, porém observou-se uma tendência de relação inversa entre a expressão de vimentina e ER (p=0,05). Observamos ainda, embora não tenha sido estatisticamente significativa, uma tendência de associação da expressão do p53 corri pior prognóstico, o que está em concordância com as conclusões observadas por outros autores / Abstract: The current work is a retrospective study, having as a goal to evaluate some immuno-histochemical markers' expression- ER, CEA, vimentin, p53, cerbB-2 and bcl-2 - in mammary carcinoma cases regarding the clinical follow-up observed in patients forming the studied group, aiming to establish the prognostic value of each one of these markers, as well as a possible connection between their expressions. 40 mammary carcinoma cases were studied, in which a review of the histopathologic diagnosis was made followed by the immuno-histochemical study, classifying the reactions according to the percentage of positive cells. For statistical analysis the Chi- square test, Kaplan- Meyer, Cox regression and Cox- Mantel were used. No statistical association was observed between immuno-histochemical markers and prognosis.Only the C-erb-b2 marker showed tendency to associate its positiveness to better prognosis (p= 0,09). There was no meaningful connection between the studied markers' expression in our study, however it was noticed an inverse correlation tendency between the expression of vimentin and ER (p=0,05). We have also observed, though it was not statistically meaningful, a trend for connection between p53 's expression and worse prognosis, what is according to the findings of other authors / Mestrado / Anatomia Patologica / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Lourenço Bozzo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-14T01:59:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barros_SilvanaPereira_M.pdf: 3281262 bytes, checksum: 53b45d9979524d7596816e7d54211759 (MD5) Previous issue date: 1991 / Resumo: A ultraestrutura do tecido conjuntivo gengival foi analisada em 12 pacientes portadores da Fibromatose Gengival Hereditária (F.G.H.) e comparada com biópsias de tecido gengival normal de 08 voluntários. Alguns fibroblastos com características de normalidade foram encontrados, mas a maioria destas células apresentava sinais de alteração e até mesmo desintegração. ~ principais alterações foram; 1) dilatação das cisternas do R.E.G. preenchidas por material flocoso; 2) vacuolização das mitocôndrias com perda definição de suas cristas e mitocôndrias com matriz eletrondensa; 3) vesículas com conteúdo eletrondenso ou material central eletrondenso; 4) fibroblastos exibindo perda de continuidade da membrana plasmática, liberando seu conteúdo para o meio extracelular. A matriz extracelular mostrou a predominância das fibras colágenas, em algumas áreas essas fibras apresentavam um curso tortuoso e/ou diâmetro variado. Espaços arredondados interfibrilares foram também observados. Fibras elásticas foram escassas e em algumas áreas registrou-se material flocular amorfo e debris celulares. Material amilóide não foi identificado e um aumento no número de fibras oxitalânicas foi observado. Estes resultados foram confirmados por observação em microscopia de luz em cortes histológicos de tecido gengival corados pelo vermelho congo para amilóide ou ácido peracético/aldeído fucsina para fibras oxitalânicas. Alguns desses achados ultraestruturais foram comparados com descrições na literatura relativas a várias doenças dermatológicas hereditárias caracterizadas por alterações do tecido conjuntivo / Abstract: The ultrastructure of the gingival connective tissue was analysed in 12 patients bearing Hereditary Gingival Fibromatosis (H.G.F.) and compared with normal gingival tis sue from biopsies of 08 volunteers. Some fibroblasts appeared as normal cells, but most of these cells showed minor to severe altered features, up to signs of cell desintegration the main alterations were: 1) enlarged R.E.R. cisternaes, filled with fine granular or flocular material; 2) vaeuolization of mitochondrias, loosing their internal structure and some filled with very dense material; 3)vesicles with dense content or with dense cores; 4) cells showing broken-off menbrane releasing their content into the extracellular matrix. The extracelular matrix showed a predominance of collagen fibers most of them with normal structure, but in some areas fibers with a tortuous cours,e and/or variable diameter were seen. Variable size of the interfiber space wàs also a common feature. Elastic fibers were scarce and in some areas, amorphus flocular material besides cells debris were predominant. Amyloid material was not identified and a increase in number of oxytalan fibers was showed. Both results were confirmed by light microscopy observations of gingival sections stained with either congo red for amyloid or peracetic acid and aldehyde-fuchsin for oxytalan fiber. Some of such ultrastructural features were comparable with the ones described in relation of various hereditary diseases characterized by skin connective tissue disorders / Mestrado / Mestre em Biologia e Patologia Buco-Dental

Orientador: Gilberto d'Assunção Fernandes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-14T12:02:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Boaventura_MiriamCampos_M.pdf: 974973 bytes, checksum: 5c79ba5a25149c40835ea4e86bc9720f (MD5) Previous issue date: 1981 / Resumo: Não informado / Abstract: Not informed. / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia e Patologia Buco-Dental

Orientador : Quivo S. Tahin / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-13T23:01:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Guimaraes_Fernando_M.pdf: 6409808 bytes, checksum: b00bbe4789b48d0d1db9bccfd6503ad3 (MD5) Previous issue date: 1990 / Resumo: O modelo experimental que utiliza a 7.12-dimetilbenzantraceno CDMBA) para induzir dose única do a tumorgênese mamária tem permitido confirmar a importância da ingestão de lipídios no desenvolvimento tumoral. Tem-se atribuido aos ácidos graxos constituintes dos lipídios dietários. Segundo a familia a qual pertencem. alterações observadas no tempo de aparecimento e o número de tumores mamários. após a indução química da tumor gênese. Dessa forma dietas ricas em ácidos graxos poliissaturados CAGPl) da familia n-6 são mais efetivos no crescimento tumoral do que ácidos graxos saturados CAGS) e há evidências de que os ácidos graxos poliinsaturados da familia n-3 teriam um efeito inibitório no crescimento tumoral. Foi objetivo deste pelos trabalho observar as possíveis alterações promovidas lipidios dietários e/ou agente cancerígeno. Afetando o desenvolvimento de ductos e estruturas terminais da glândula mamária, alterações nas populações de células epiteliais dos tipos escuras coe) e intermediárias ClC) é ainda nas populações de mastócitos e eosinófilos relacionados ao tecido mamário. Para Tanto ratas Sprague-Dawley foram alimentadas logo após o desmame com dietas semi-sintéticas. isocalóricas contendo 10% de lip1dios provenierites de diferentes fontes: 1) óleo de girassol COG). rico em ácidos graxos da fam11ia _-6; 2) óleo de sardinha (OS) rico em ácidos graxos n-3 e 3) óleo de coco COC) rico em ácidos graxos saturados. Foram administrados 20 mg de DMBA por intubação gástrica aos 45 dias de idade. Após o término do experimento Caos 60 dias de idade) a segunda glândula mamária toráxica direita foi retirada e processada de forma a se obter montagens totais das mesmas o que permitiu o exame anatómico da estrutura glandular. Em seguida as montagens totais foram desfeitas para inclusão em parafina e corne seriado das glândulas mamárias. Foi observado ao n1vel das montagens totais alterações morfológicas entre as glâdulas mamárias dos diferentes grupos. dietários. Nas glândulas mamárias das ratas alimentadas com a dieta OG ou OC foram obervados um maior número de alvéolos do que nódulos terminais. enquanto naquelas alimentadas com a dieta OS havia maior número de nódulos terminais que alvéolos. Estes resultados indicam graus de amadurecimento glandular diferentes entre os grupos dietários. As populações de De mostraram-se significativamente alteradas entre ratas tratadas com DMBA e seuS respectivos controles. nos ductos do grupo dietário OG (controles 14.69 :t2.34 e tratados com DMBA 13.61 :t2.34) e alvéolos dos rupos dietários OS (controles 15.15 :t2.13 e tratados com DMBA 13.42 :t1 . 94) eoc (controles 15.73 tl.62 e tratados com DMBA 14.05 :t1.93). os quais apresentaram uma redução no número destas células A população de IC mostrou-se significativamente aumentada nas ratas tratadas com DMBA em-relação as controles nogrupo dietário OG. afetando ductos(controles 1.33 :t0.35 e tratados com DMBA 2.31 :t1.44) e alvéolos (controles 1.06 :t0.42 e tratados com DMBA 2.43 :tl.09). Foram observados um menor número de e o sinófilos nas glándulas mamárias de ratas tratadas com DMBA em relação às controles nos grupos dietários ricos em AGPI (OG p< 0.0005 e OS p< 0.005). enquanto na dieta OC (rica em AGS) ocorreu o inverso (p< 0.05). De um modo geral as glândulas de ratas tratadas com DMBA apresentaram um maior número de mastócitos do que o das ratas controles. alteração significativa nas dietas OG Cp< 0.01). OS (p< 0.01) e OC (p< 0.0006). As alterações observadas ao nível das montagens totais :foram discutidas em :função do baixo conteúdo de ácido linoléico na dieta OS e possivel ação dos AGPI n-3. presentes nesta dieta sobre o metabolismo dos AGPI n-6. As alterações nas populações de células epiteliais. Principalmente IC. . sugerem tratar ¿se dos primeiros eventos observados durante acarcinogênese mamária experimental. As variações observadas nas populações de mastócitos e eosinófilos foram discut.idas tanto em termos de uma ação dos liídeos dietários como pela ação experimental associada ao DMBA / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Ciências Biológicas

Orientadores: Paulo Cesar Rodrigues Palma, Cassio Luis Zanettini Riccetto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T10:45:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barbosa_RuiNogueira_D.pdf: 1641986 bytes, checksum: 536d82504b168cc29ef0e0d3a332867e (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Introdução: A incontinência urinária na mulher pode ser causada por duas principais condições fisiopatológicas que não são mutuamente exclusivas, representadas pelas disfunções vesicais e pelas alterações do mecanismo esfincteriano uretral, sejam intrínsecas ou dos elementos de suporte do assoalho pélvico. As disfunções vesicais incluem a hiperatividade do detrusor e a complacência vesical reduzida. A Teoria Integral da Continência foi concebida com o objetivo de explicar de forma integrada os mecanismos fisiopatológicos envolvidos na incontinência urinária e nos sintomas associados. Ela postula, entre outras hipóteses, que alterações da tensão sobre a vagina, decorrentes dos prolapsos urogenitais, determinariam, também, ativação prematura do reflexo miccional, desencadeando contrações involuntárias do detrusor. Objetivo: Este estudo teve por objetivo analisar a relação entre distopia urogenital e a presença de hiperatividade do detrusor em mulheres com incontinência urinária de esforço. Materiais e Métodos: Avaliou-se, prospectivamente, 92 mulheres com diagnóstico clínico de incontinência urinária de esforço, que foram submetidas ao estudo urodinâmico. A idade variou entre 29 a 75 anos, com média de 48 ± 10 anos. Foi analisada a relação entre a presença das distopias urogenitais (cistocele, uretrocele e retocele), em seus variados graus, e a ocorrência de hiperatividade do detrusor. Resultados: De acordo com o exame clínico e o estudo urodinâmico foram observados os seguintes resultados: cistocele em 65 (70,6%) mulheres, uretrocele em 45 (48,9%), retocele em 31 (33,6%). A hiperatividade do detrusor estava presente em 13 das cistoceles (20%), em 9 das uretroceles (20%) e 6 das retoceles (19,3%). Não se observou diferença significante em nenhuma das distopias examinadas em relação à presença de hiperatividade detrusora: cistocele (p=0,1639), uretrocele (p=0,2044) e retocele (p=0,1849). Conclusão: As distopias urogenitais, em seus diferentes graus, não se relacionam com a incidência de hiperatividade do detrusor em mulheres com incontinência urinária de esforço / Abstract: Introduction: Urinary incontinence in women may be caused by two physiopathologic principal conditions which are not mutually excluding, represented both by vesical disfunctions and alterations in the urethral sphincteral mechanism, either the intrinsic or the ones occurring in the supporting elements of the pelvic floor. Vesical disfunctions include the detrusor overactivity and low compliance. The Integral Theory has been conceived aiming at fully explaining the physiopathologic mechanisms involved in urinary incontinence and its associated symptoms. It postulates, among other hypotheses, that the alterations on the tension of the vagina, resulting from urogenital prolapses also determines a premature activation of the mictional reflex, triggering detrusor involuntary contractions. Objective: The study herein has aimed at analysing the relation between urogenital dystopia and the presence of detrusor overactivity in women suffering from stress urinary incontinence. Methods and materials - Ninety-two women with clinical diagnosis of stress urinary incontinence who had been submitted to urodynamics, were prospectively assessed. They ages ranged from 29 to 75 years old, with a 48 + 10 years average. The relationship between the presence and level of urogentital dystopias (cystocele, urethrocele, rectocele) and the occurrence of detrusor overactivity have been analysed. Results ¿ According to the clinical examination and the urodynamic study, the following results were observed: cystocele in 65 (70,6%) women, urethrocele in 45 (48,9%), rectocele in 31 (33,6%). Detrusor overactivity were found in 13 (20%) of the cystocele cases, in 9 (20%) of the urethrocele cases and in 6 (19,3%) of the rectocele cases. We weren't observed significant difference in neither of dystopias in relation to presence of detrusor overactivity: cystocele (p=0,1639), urethrocele (p=0,2044) and rectocele (p=0,1849). Conclusion ¿ Urogenital dystopias, in their different levels, have shown no relationship with the frequency of detrusor overactivity in women with stress urinary incontinence / Doutorado / Cirurgia / Doutor em Cirurgia

Introduzione: Le catene N-linked associate al principale sito di N-glicosilazione (Asn297) delle IgG sono di tipo bi-antennario e presentano una grande microeterogeneità in quanto una o entrambe le antenne possono terminare con uno o due residui di acido sialico, galattosio o N-acetilglucosammina ed essere core-fucosilate. Nell’invecchiamento e in malattie infiammatorie aumenta la percentuale di glicani associati alle catene pesanti delle IgG privi del galattosio terminale (IgG-G0). La glicosilazione enzimatica delle proteine è classicamente un processo intracellulare, sebbene recenti studi abbiano messo in evidenza la possibilità di una glicosilazione ecto-cellulare in quanto le piastrine sono ottimi donatori di nucleotidi-zuccheri. Scopo: Misurare le attività delle glicosiltrasferasi ST6Gal1 e B4GalT plasmatiche (potenzialmente responsabili della glicosilazione di proteine plasmatiche) in soggetti di entrambi i sessi e di età compresa tra 5 e 105 anni e correlarle con lo stato di glicosilazione di IgG circolanti (analizzato mediante lectin-blot) e il GlycoAge test, un noto marcatore di invecchiamento, espresso come il logaritmo del rapporto tra gli N-glicani agalattosilati e di-galattosilati associati a glicoproteine plasmatiche. Risultati e conclusioni: I dati ottenuti indicano che: 1) l’attività B4GalT si propone come nuovo marcatore di invecchiamento perché aumenta linearmente con l’età; 2) la ST6Gal1 è maggiormente espressa solo nei bambini e negli over 80; 3) le attività delle due glicosilatransferasi non risultano correlate in modo significativo né tra loro né con il GlycoAge test, indicando che questi tre marcatori siano espressioni di diversi quadri fisio-patologici legati all’invecchiamento; 4) con l’età si ha una predominanza di glicoforme di IgG pro-infiammatorie, ovvero prive dell’acido sialico, del galattosio terminali e del core fucose; 5) l’attività della ST6Gal1 e B4GalT risultano in controtendenza con il grado di sialilazione e galattosilazione delle IgG, indicando quindi che la loro glicosilazione non avviene a livello extracellulare. / Background: The N-linked chains associated with the main N- glycosylation site (Asn297) of IgG are bi- antennary type and present a great microheterogeneity because one or both antennas may end with one or two residues of sialic acid , galactose or N -acetilglucosammine and can be core – fucosilated. In aging and inflammatory diseases the percentage of glycans associated with heavy chains of IgG that lack terminal galactose (IgG - G0) increases. The enzymatic glycosylation of proteins is classically an intracellular process although recent studies have highlighted the possibility of extracellular glycosylation because the platelets are an excellent source of the sugar nucleotide – donors. Aim of study: To measure the activities of plasma glycosyltransferases ST6Gal1 and B4GalT (potentially responsible for the glycosylation of plasma proteins ) in individuals of both sexes and aged between 5 and 105 years, and correlate them with the state of glycosylation of circulating IgG (determined by lectin immunoblot analysis) and GlycoAge test, a know marker of aging that is the logarithm of the ratio between agalactosylated and di-galactosylated N-linked chains associated to plasma glycoprotein. Results and conclusions: Own results indicated that: 1) B4GalT acitvity is a new marker of aging because it increase linearly with age ; 2) ST6Gal1 activity is mostly expressed only in children and over 80; 3) The activity of the two glycosyltransferases does not relate each other and with the GlycoAge test indicating that all three of these markers are expressions of different physio- pathological frameworks related to aging; 4) during aging there is an abundance of pro-inflammatory glycoforms of IgG; 5) the activity of the ST6Gal1 and B4GalT are in contrast with the degree of sialylation and galactosylation of IgG , indicating that their glycosylation does not occur at the extracellular level .

Ribosome-inactivating proteins (RIPs) are a family of plant toxic enzymes that permanently damage ribosomes and possibly other cellular substrates, thus causing cell death involving different and still not completely understood pathways. The high cytotoxic activity showed by many RIPs makes them ideal candidates for the production of immunotoxins (ITs), chimeric proteins designed for the selective elimination of unwanted or malignant cells. Saporin-S6, a type 1 RIP extracted from Saponaria officinalis L. seeds, has been extensively employed to construct anticancer conjugates because of its high enzymatic activity, stability and resistance to conjugation procedures, resulting in the efficient killing of target cells. Here we investigated the anticancer properties of two saporin-based ITs, anti-CD20 RTX/S6 and anti-CD22 OM124/S6, designed for the experimental treatment of B-cell NHLs. Both ITs showed high cytotoxicity towards CD20-positive B-cells, and their antitumor efficacy was enhanced synergistically by a combined treatment with proteasome inhibitors or fludarabine. Furthermore, the two ITs showed differencies in potency and ability to activate effector caspases, and a different behavior in the presence of the ROS scavenger catalase. Taken together, these results suggest that the different carriers employed to target saporin might influence saporin intracellular routing and saporin-induced cell death mechanisms. We also investigated the early cellular response to stenodactylin, a recently discovered highly toxic type 2 RIP representing an interesting candidate for the design and production of a new IT for the experimental treatment of cancer.

Aging is characterized by a chronic, low-grade inflammatory state called “inflammaging”. Mitochondria are the main source of reactive oxygen species (ROS), which trigger the production of pro-inflammatory molecules. We are interested in studying the age-related modifications of the mitochondrial DNA (mtDNA), which can be affected by the lifelong exposure to ROS and are responsible of mitochondrial dysfunction. Moreover, increasing evidences show that telomere shortening, naturally occurring with aging, is involved in mtDNA damage processes and thus in the pathogenesis of age-related disorders. Thus the primary aim of this thesis was the analysis of mtDNA copy number, deletion level and integrity in different-age human biopsies from liver, vastus lateralis skeletal muscle of healthy subjects and patients with limited mobility of lower limbs (LMLL), as well as adipose tissue. The telomere length and the expression of nuclear genes related to mitobiogenesis, fusion and fission, mitophagy, mitochondrial protein quality control system, hypoxia, production and protection from ROS were also evaluated. In liver the decrease in mtDNA integrity with age is accompanied with an increase in mtDNA copy number, suggesting the existence of a “compensatory mechanism” able to maintain the functionality of this organ. Different is the case of vastus lateralis muscle, where any “compensatory pathway” is activated and mtDNA integrity and copy number decrease with age, both in healthy subjects and in patients. Interestingly, mtDNA rearrangements do not incur in adipose tissue with advancing age. Finally, in all tissues a marked gender difference appears, suggesting that aging and also gender diversely affect mtDNA rearrangements and telomere length in the three human tissues considered, likely depending on their different metabolic needs and inflammatory status.