Orientador: Alexandre Ninhaus Silveira / Banca: George Shigueki Yasui / Banca: Danilo Pedro Streit Junior / Resumo: A criopreservação é uma ferramenta biotecnológica que permite congelar e estocar, por longos períodos células, tecidos, órgãos e embriões; contudo, o sucesso desta tecnologia, para peixes, é bem estabelecida apenas para as células germinativas masculinas, conservando assim, parcialmente material genético de uma população. Desta forma objetivou-se estabelecer um eficaz protocolo de crioconservação para embriões de peixes neotropicais, visando à preservação total da bagagem genética da espécie. Utilizou-se como modelo biológico embriões de Prochilodus lineatus, que foram avaliados quanto a sua sensibilidade ao frio, à toxicidade dos crioprotetores dimetil formamida, dimetil sulfóxido, propileno glicol e glicerol, aos protocolos de resfriamento nos estágios de gastrulação e organogênese com seis e vinte somitos e a vitrificação nos estágios de organogênese com seis e vinte somitos. As amostras foram fixadas em solução de paraformaldeído a 4% e glutaraldeído a 2% em tampão fosfato Sorensen 0,2 M pH 7,2, incluídos em metacrilato glicol, seccionados a 3 e 5 µm de espessura e corados com hematoxilina-eosina, azul de toluidína, P.A.S. e metanil yellow. A fase embrionária de organogênese com 20 somitos foi a mais resistente ao frio e a toxicidade dos crioprotetores. Apesar das altas taxas de larvas vivas nos tratamento de resfriamento, em nenhum dos protocolos propostos obteve-se êxito na preservação das estruturas embrionárias, sendo verificado graves danos morfológicos como corpo reduzido e com sinuosidades, nadadeiras com crescimento desordenado das células, alta concentração de células necróticas na região do encéfalo, má-formação das vesículas ópticas e óticas, má-formação das narinas, fusão desordenada dos mioblastos, retração do vitelo, espaços entre as células provocadas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cryopreservation is a biotechnological tool that allows you to freeze and store cells, tissues, organs and embryos for long periods; however, the success of this technology, to the fish, it is established only from the male germ cells, preserving, partly the material of a population. Therefore the purpose was to establish an effective protocol of cryopreservation to embryos of neotropical fish, in order to preserv all the genetic load of the species. As biological model of this research it was used Prochilodus lineatus type of embryos, which were evaluated regarding to their sensibility to cold temperatures, the toxicity of cryoprotectants dimethyl formamide, dimethyl sulfoxide, propylene glycol and glycerol, also the protocols of cooling down on the gastrulation and organogenesis stages with six and twenty somites, and the vitrification on the organogenesis stages with six and twenty somites. The samples were fixed in solutions with 4% of paraformaldehyde and 2% of glutaraldehyde, Sorensen phosphate with 0.2 M pH 7.2, included in glycol methacrylate, sectioned at 3 and 5 µm of thickness and stained with hematoxylin-eosin, Blue toluidine, PAS and Metanil Yellow. The embryonic phase of organogenesis with 20 somites was the most resistant to cold and toxicity of cryoprotectants. Despite of the high rates of alived larvae founded in the cooling treatment, none of the proposed protocols succedded in the preservation of the embryonic structures, it could be seen severe morphological damages as reduction in the body and sinuous in the forms, with fins disorderly cell growth, high concentration of necrotic cells on region of the brain, malformation of the ear and eyes vesicle, malformation of the nostrils, disorderly fusion of the myoblasts, retraction of the yolk, spaces between cells caused by the formation of ice crystals... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-05Bitstream added on 2014-06-13T19:08:35Z : No. of bitstreams: 1 costa_rs_me_sjrp.pdf: 2335330 bytes, checksum: a362b3c9ff0199411e65f245cbed8903 (MD5) / A criopreservação é uma ferramenta biotecnológica que permite congelar e estocar, por longos períodos células, tecidos, órgãos e embriões; contudo, o sucesso desta tecnologia, para peixes, é bem estabelecida apenas para as células germinativas masculinas, conservando assim, parcialmente material genético de uma população. Desta forma objetivou-se estabelecer um eficaz protocolo de crioconservação para embriões de peixes neotropicais, visando à preservação total da bagagem genética da espécie. Utilizou-se como modelo biológico embriões de Prochilodus lineatus, que foram avaliados quanto a sua sensibilidade ao frio, à toxicidade dos crioprotetores dimetil formamida, dimetil sulfóxido, propileno glicol e glicerol, aos protocolos de resfriamento nos estágios de gastrulação e organogênese com seis e vinte somitos e a vitrificação nos estágios de organogênese com seis e vinte somitos. As amostras foram fixadas em solução de paraformaldeído a 4% e glutaraldeído a 2% em tampão fosfato Sorensen 0,2 M pH 7,2, incluídos em metacrilato glicol, seccionados a 3 e 5 µm de espessura e corados com hematoxilina-eosina, azul de toluidína, P.A.S. e metanil yellow. A fase embrionária de organogênese com 20 somitos foi a mais resistente ao frio e a toxicidade dos crioprotetores. Apesar das altas taxas de larvas vivas nos tratamento de resfriamento, em nenhum dos protocolos propostos obteve-se êxito na preservação das estruturas embrionárias, sendo verificado graves danos morfológicos como corpo reduzido e com sinuosidades, nadadeiras com crescimento desordenado das células, alta concentração de células necróticas na região do encéfalo, má-formação das vesículas ópticas e óticas, má-formação das narinas, fusão desordenada dos mioblastos, retração do vitelo, espaços entre as células provocadas... / Cryopreservation is a biotechnological tool that allows you to freeze and store cells, tissues, organs and embryos for long periods; however, the success of this technology, to the fish, it is established only from the male germ cells, preserving, partly the material of a population. Therefore the purpose was to establish an effective protocol of cryopreservation to embryos of neotropical fish, in order to preserv all the genetic load of the species. As biological model of this research it was used Prochilodus lineatus type of embryos, which were evaluated regarding to their sensibility to cold temperatures, the toxicity of cryoprotectants dimethyl formamide, dimethyl sulfoxide, propylene glycol and glycerol, also the protocols of cooling down on the gastrulation and organogenesis stages with six and twenty somites, and the vitrification on the organogenesis stages with six and twenty somites. The samples were fixed in solutions with 4% of paraformaldehyde and 2% of glutaraldehyde, Sorensen phosphate with 0.2 M pH 7.2, included in glycol methacrylate, sectioned at 3 and 5 µm of thickness and stained with hematoxylin-eosin, Blue toluidine, PAS and Metanil Yellow. The embryonic phase of organogenesis with 20 somites was the most resistant to cold and toxicity of cryoprotectants. Despite of the high rates of alived larvae founded in the cooling treatment, none of the proposed protocols succedded in the preservation of the embryonic structures, it could be seen severe morphological damages as reduction in the body and sinuous in the forms, with fins disorderly cell growth, high concentration of necrotic cells on region of the brain, malformation of the ear and eyes vesicle, malformation of the nostrils, disorderly fusion of the myoblasts, retraction of the yolk, spaces between cells caused by the formation of ice crystals... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Fausto Foresti / Banca: Claudio de Oliveira / Banca: Luiz Edivaldo Pezzato / Banca: Alexandre Wagner Silva Hilsdorf / Banca: Newton Castagnolli / Resumo: O gênero Pseudoplatystoma pode ser encontrado nas principais bacias hidrográficas da América do Sul e é formado por algumas das espécies de maior porte da família Pimelodidae. O "pintado", Pseuplatystoma corruscans, tem função ecológica muito importante em seu habitat, agindo como predador voraz. É espécie muito apreciada na pesca esportiva e atinge alto valor comercial, pela qualidade de sua carne, o que leva ao desenvolvimento de grandes esforços na elaboração de programas de reprodução em cultivo intensivo em escala industrial. Considerando que os microssatélites constituem um dos marcadores moleculares mais importantes e apropriados para o estudo de populações e visando a avaliação e preservação da variabilidade genética da espécie, o presente trabalho teve como objetivos testar esses marcadores moleculares e avaliar a estrutura e os níveis de diversidade genética das populações naturais do pintado. Foram coletadas nove populações de pintado pertencentes a rios tributários da Bacia do Paraguai, no Pantanal Mato-grossense e mais três populações da Bacia do Alto paraná. As amostras tiveram seu DNA total extraído usando a resina Chelex@. Sete primers microssatélites desenvolvidos para a espécie foram testados e utilizados nas análises. Os locos foram amplificados por PCR e submetidos à eletroforese em gel de poliacrilamida a 6%. Posteriormente foram corados com nitrato de prata e fotodocumentados. O tamanho dos fragmentos foi estimado por comparação com o marcador Ladder de 10 bp (Invitrogen) por meio do programa computacional Kodak Digital Science lD. As análises populacionais foram realizadas através dos programas PopGen 1.32, Arlequin 3.11, GeneClass2.0 e Structure 2.2. Os locos microssatélites mostraram-se...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The genus Pseudoplatystoma can be found in ali major river basins of South America and is composed by some of the largest species of fish of the Pimelodidae. family The "pintado", P. corruscans, has a very important ecological role in their habitat acting mainly as a voracious predator. This species is highly appreciated in sport fishing reaching high commercial value due the quality of their meat, which leads to the development of huge efforts in the preparation and development of breeding programs for enhancing juvenile production to meet the demand of the industrial scale. Whereas the microsatellites are one of the most usefull molecular markers for populations studies in order to evaluate and conserve the genetic variability of the species, this work aimed to use these molecular markers in evaluating the structure and levels of genetic diversity of natural populations of the pintado. Nine sample belonging to tributaries of the Paraguay River Basin in the Pantanal Region Mato Grosso and three from Parana River Basin were coleted. Total DNA was extracted using the resin Chelex @. Seven microsatellites primers developed for the species were used in the analyses. The loci were amplified by PCR and submitted to the 6% polyacrylamide gel electrophoresis. Subsequently the gels were stained with silver nitrate and fotodocumented. The size of the fragments were estimated by comparison with the label Ladder of 10 bp (Invitrogen) by the computer program Kodak Digital Science 1D. The analyses were performed with softwares PopGen 1.32, Arlequin 3.11, GeneClass2.0 and Structure 2.2. The microsatellites locis have proved highly polymorphics with the identification of 119 allels (average of 17 per site). The observed heterozygosity (HO) ranged from 0.0370 to 0.9231. The populations showed significant deviation from Hardy-Weinberg equilibrium (HWE) for most of the loci, ...(Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-07-18Bitstream added on 2014-06-13T20:00:49Z : No. of bitstreams: 1 benites_c_dr_jabo.pdf: 848323 bytes, checksum: ca29ce04035d67ac212ab4464b01781b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O gênero Pseudoplatystoma pode ser encontrado nas principais bacias hidrográficas da América do Sul e é formado por algumas das espécies de maior porte da família Pimelodidae. O pintado, Pseuplatystoma corruscans, tem função ecológica muito importante em seu habitat, agindo como predador voraz. É espécie muito apreciada na pesca esportiva e atinge alto valor comercial, pela qualidade de sua carne, o que leva ao desenvolvimento de grandes esforços na elaboração de programas de reprodução em cultivo intensivo em escala industrial. Considerando que os microssatélites constituem um dos marcadores moleculares mais importantes e apropriados para o estudo de populações e visando a avaliação e preservação da variabilidade genética da espécie, o presente trabalho teve como objetivos testar esses marcadores moleculares e avaliar a estrutura e os níveis de diversidade genética das populações naturais do pintado. Foram coletadas nove populações de pintado pertencentes a rios tributários da Bacia do Paraguai, no Pantanal Mato-grossense e mais três populações da Bacia do Alto paraná. As amostras tiveram seu DNA total extraído usando a resina Chelex@. Sete primers microssatélites desenvolvidos para a espécie foram testados e utilizados nas análises. Os locos foram amplificados por PCR e submetidos à eletroforese em gel de poliacrilamida a 6%. Posteriormente foram corados com nitrato de prata e fotodocumentados. O tamanho dos fragmentos foi estimado por comparação com o marcador Ladder de 10 bp (Invitrogen) por meio do programa computacional Kodak Digital Science lD. As análises populacionais foram realizadas através dos programas PopGen 1.32, Arlequin 3.11, GeneClass2.0 e Structure 2.2. Os locos microssatélites mostraram-se... / The genus Pseudoplatystoma can be found in ali major river basins of South America and is composed by some of the largest species of fish of the Pimelodidae. family The pintado, P. corruscans, has a very important ecological role in their habitat acting mainly as a voracious predator. This species is highly appreciated in sport fishing reaching high commercial value due the quality of their meat, which leads to the development of huge efforts in the preparation and development of breeding programs for enhancing juvenile production to meet the demand of the industrial scale. Whereas the microsatellites are one of the most usefull molecular markers for populations studies in order to evaluate and conserve the genetic variability of the species, this work aimed to use these molecular markers in evaluating the structure and levels of genetic diversity of natural populations of the pintado. Nine sample belonging to tributaries of the Paraguay River Basin in the Pantanal Region Mato Grosso and three from Parana River Basin were coleted. Total DNA was extracted using the resin Chelex @. Seven microsatellites primers developed for the species were used in the analyses. The loci were amplified by PCR and submitted to the 6% polyacrylamide gel electrophoresis. Subsequently the gels were stained with silver nitrate and fotodocumented. The size of the fragments were estimated by comparison with the label Ladder of 10 bp (Invitrogen) by the computer program Kodak Digital Science 1D. The analyses were performed with softwares PopGen 1.32, Arlequin 3.11, GeneClass2.0 and Structure 2.2. The microsatellites locis have proved highly polymorphics with the identification of 119 allels (average of 17 per site). The observed heterozygosity (HO) ranged from 0.0370 to 0.9231. The populations showed significant deviation from Hardy-Weinberg equilibrium (HWE) for most of the loci, ...(Complete abstract click electronic access below)