Objetivo: Avaliar in vivo a resposta tecidual de dentes de cães após perfuração de furca e recobrimento com Biodentine&trade;, em comparação ao MTA e à guta-percha, por meio de análise histopatológica, histoenzimológica, imunohistoquímica e por imunofluorescência. Métodos: Foram utilizados 30 dentes de 3 cães, divididos em 3 grupos: I - Biodentine; II - MTA; e III - Guta-Percha (controle). Após tratamento endodôntico e limpeza da câmara pulpar, perfurações no centro do assoalho foram realizadas intencionalmente em cada dente, as quais foram preenchidas com os diferentes materiais. Após 120 dias, os animais foram eutanasiados e as peças contendo os dentes e tecidos perirradiculares foram submetidas ao processamento histotécnico. Foram realizadas análises histopatológicas semi-quantitativas para avaliação da neoformação de tecido mineralizado e da reinserção de fibras, além de análise imunohistoquímica das proteínas osteopontina (OPN) e fosfatase alcalina (ALP) e imunofluorescência para proteína morfogenética óssea (BMP-2), proteína de adesão do cemento (CAP), sialoproteína óssea (BSP), osteocalcina (OCN) e proteína do cemento 1 (CEMP1) no tecido mineralizado neoformado e na região adjacente. Paralelamente, foi realizada a histoenzimologia para a atividade da TRAP e contagem dos osteoclastos. Os dados foram submetidos aos testes qui-quadrado e Kruskal-Wallis, com nível de significância de 5%. Resultados: Na avaliação do tecido mineralizado neoformado, o grupo controle foi significantemente diferente dos demais grupos (p<0,0001), sendo que não houve formação de tecido mineralizado em nenhum espécime desse grupo. Nos grupos tratados com MTA e Biodentine houve formação de tecido mineralizado em 88% e 92% dos espécimes, respectivamente, sem diferença entre eles (p>0,05). Ainda, o grupo controle apresentou fibras colágenas paralelas à perfuração. Nos grupos tratados com MTA ou Biodentine também houve fibras colágenas paralelas à perfuração, porém com algumas fibras reinseridas perpendicularmente em diferentes áreas do tecido mineralizado neoformado. Todos os tratamentos induziram a expressão de OPN e ALP, porém em menor intensidade no grupo controle e em maior intensidade no grupo tratado com MTA (p<0,05). Apenas o tecido mineralizado formado após o tratamento com MTA expressou BMP-2, BSP, OCN, CAP e CEMP1. Com relação à avaliação dos osteoclastos, não foi possível encontrar diferença estatística entre os grupos (p=0,97). Conclusão: Com base nos parâmetros analisados, pôde-se concluir que o MTA e a Biodentine apresentaram resposta tecidual satisfatória, com formação de tecido mineralizado e reinserção parcial de fibras, podendo ser indicados para o selamento de perfurações de furca. Além disso, o presente estudo elucidou alguns mecanismos de ação pelo quais o MTA e a Biodentine induzem a formação do tecido mineralizado, com expressão dos marcadores da mineralização ALP e OPN, sem interferência na quantidade de osteoclastos. Apenas o MTA estimulou a expressão de proteínas associadas à formação de tecido mineralizado semelhante ao cemento / Aim: This study evaluated in vivo tissue response in dogs teeth after sealing of furcation perforations with Biodentine&trade;, MTA and gutta-percha, by means of histopathological, histoenzymological, immunohistochemical and immunofluorescence analysis. Methods: Thirty teeth of 3 dogs were used, divided in 3 groups: I - Biodentine; II - MTA; and III - Guta-Percha (control). After endodontic treatment, perforations were made on the pulp chamber floor and filled with the different materials. The animals were euthanized after 120 days and the teeth and surrounding tissues were processed for histopathological analysis of new mineralized tissue formation and collagen fiber reinsertion, immunohistochemical analysis of osteopontin (OPN) and alkaline phosphatase (ALP) and immunofluorescence analysis for bone morphogenetic protein (BMP-2), cementum attachment protein (CAP), bone sialoprotein (BSP), osteocalcin (OCN) and cementum protein1 (CEMP1). Histoenzymology was performed for TRAP activity and osteoclast count. Data were submitted to chi-square and Kruskal-Wallis tests (=0.05). Results: Gutta-percha did not induce mineralized tissue formation. MTA and Biodentine formed mineralized tissue in 88% and 92% of specimens, respectively, with no significant difference (p>0.05). In addition, the control group had collagen fibers parallel to the perforation. In the groups treated with MTA or Biodentine there were also collagen fibers parallel to the perforation, but with some fibers reinserted perpendicularly in different areas of the neoformed mineralized tissue. All materials induced OPN and ALP expression, weakest for gutta-percha and strongest for MTA (p<0.05). Only MTA induced BMP-2, BSP, OCN, CAP and CEMP1 expression. Osteoclast count was similar in the groups (p=0.97). Conclusion: Thus, according to the parameters analyzed in this present study, MTA and Biodentine presented satisfactory tissue response, with formation of mineralized tissue and partial reinsertion of fibers, and could be indicated for sealing furcation perforations. In addition, the present study elucidated some mechanisms of action by which MTA and Biodentine induce the formation of mineralized tissue, with expression of ALP and OPN mineralization markers, without interference in number of osteoclasts. Only MTA stimulated the expression of proteins associated with the formation of a cement-like mineralized tissue

O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta dos tecidos perirradiculares após perfuração de furca intencional e selamento com Biodentine (BD), agregado trióxido mineral (MTA) ou guta percha. Foram utilizados pré-molares de 3 cães, num total de 30 dentes, distribuídos em 3 grupos: experimental BD (n= 14), controle negativo (MTA) (n= 10) e controle positivo (guta percha) (n= 6), por um período de 120 dias. Radiograficamente foi analisada a área correspondente à perfuração de furca. Na análise histopatológica qualitativa foi avaliada a presença, ou não de tecido mineralizado no local da perfuração de furca e adjacências. Na análise histopatológica semi-quantitativa foram atribuídos escores para os parâmetros: presença ou ausência de tecido mineralizado, intensidade do processo inflamatório e reabsorção dos tecidos mineralizados. Na análise histopatológica quantitativa foi medida a espessura de tecido mineralizado na área de perfuração de furca. Foram realizados ensaios de imuno-histoquímica para os marcadores de mineralização: RANKL e osteoprotegerina (OPG). Ensaio de imunofluorescência indireta avaliou a expressão Runx-2 para a síntese de proteínas de mineralização. Os dados foram avaliados pelos testes qui-quadrado, teste exato de Fisher e teste de Mann Whitney, utilizando o programa estatístico Graph Pad Prism 6.0. Os grupos foram comparados entre sí pelo Teste de Kruskal Wallis com pós-teste de Dunn. O nível de significância adotado para todas as análises foi de 5%. Na análise radiográfica a (BD) apresentou melhor desempenho em relação ao MTA, em todos os aspectos analisados. Histologicamente, tanto o MTA quanto a BD induziram a formação de tecido mineralizado, quando comparado à guta percha, que não induziu a formação de tecido mineralizado (p<.001). O selamento completo das perfurações de furca foi mais frequente com o MTA, que induziu a deposição de tecido mineralizado com área e espessura maiores. Tanto as amostras seladas com BD, quanto com MTA, não apresentaram reabsorção óssea em área de furca, apresentaram poucas células inflamatórias e maior intensidade do imunomarcador RUNX2 quando comparadas com a guta percha. A OPG esteve presente em amostras seladas com BD e com MTA. Embora o MTA tenha apresentado maior frequência de selamento completo e maior área e espessura de tecido mineralizado recém-formado, a BD também apresentou bons resultados histopatológicos e pode ser considerada como um adequado material de selamento de perfuração de furca. / The objective of this study was to evaluate the periradicular tissue response after intentional furcation and sealing with Biodentine (BD), mineral trioxide aggregate (MTA) or gutta percha. Pre-molars of 3 dogs were used, in a total of 30 teeth, distributed in 3 groups: experimental BD (n = 14), negative control (MTA) (n = 10) and positive control (gutta percha), for a period of 120 days. The area corresponding to furcation was analyzed radiographically. In the qualitative histopathological analysis, the presence or not of mineralized tissue at the furcation site and adjacent areas was evaluated. In the semi-quantitative histopathological analysis, scores were assigned to the parameters: presence or absence of mineralized tissue, intensity of the inflammatory process and reabsorption of mineralized tissues. In the quantitative histopathological analysis the thickness of mineralized tissue in the furcation area was measured. Immunohistochemical assays were performed for the mineralization markers: RANKL and osteoprotegerin (OPG). Indirect immunofluorescence assay evaluated RUNX-2 expression for the synthesis of mineralization proteins. Data were evaluated by chi-square test, Fisher exact test and Mann Whitney test using the Graph Pad Prism 6.0 statistical software. The groups were compared by the Kruskal Wallis test with Dunn\'s post-test. The level of significance adopted for all analyzes was 5%. In the radiographic analysis the (BD) presented better performance in relation to the MTA, in all aspects analyzed. Histologically, both MTA and BD induced the formation of mineralized tissue when compared to gutta percha, which did not induce the formation of mineralized tissue (p <.001). The complete sealing of furcation holes was more frequent with the MTA, which induced the deposition of mineralized tissue with a larger and thickness area. Both the BD and MTA sealed samples did not show bone resorption in the furcation area, showed few inflammatory cells and a greater intensity of the RUNX2 immunomarker when compared to the gutta percha. OPG was present in samples sealed with BD and with MTA. Although the MTA presented higher frequency of complete sealing and greater area and thickness of newly formed mineralized tissue, BD also presented good histopathological results and can be considered as a suitable furcation perforation sealing material.

O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta dos tecidos perirradiculares após perfuração de furca intencional e selamento com Biodentine (BD), agregado trióxido mineral (MTA) ou guta percha. Foram utilizados pré-molares de 3 cães, num total de 30 dentes, distribuídos em 3 grupos: experimental BD (n= 14), controle negativo (MTA) (n= 10) e controle positivo (guta percha) (n= 6), por um período de 120 dias. Radiograficamente foi analisada a área correspondente à perfuração de furca. Na análise histopatológica qualitativa foi avaliada a presença, ou não de tecido mineralizado no local da perfuração de furca e adjacências. Na análise histopatológica semi-quantitativa foram atribuídos escores para os parâmetros: presença ou ausência de tecido mineralizado, intensidade do processo inflamatório e reabsorção dos tecidos mineralizados. Na análise histopatológica quantitativa foi medida a espessura de tecido mineralizado na área de perfuração de furca. Foram realizados ensaios de imuno-histoquímica para os marcadores de mineralização: RANKL e osteoprotegerina (OPG). Ensaio de imunofluorescência indireta avaliou a expressão Runx-2 para a síntese de proteínas de mineralização. Os dados foram avaliados pelos testes qui-quadrado, teste exato de Fisher e teste de Mann Whitney, utilizando o programa estatístico Graph Pad Prism 6.0. Os grupos foram comparados entre sí pelo Teste de Kruskal Wallis com pós-teste de Dunn. O nível de significância adotado para todas as análises foi de 5%. Na análise radiográfica a (BD) apresentou melhor desempenho em relação ao MTA, em todos os aspectos analisados. Histologicamente, tanto o MTA quanto a BD induziram a formação de tecido mineralizado, quando comparado à guta percha, que não induziu a formação de tecido mineralizado (p<.001). O selamento completo das perfurações de furca foi mais frequente com o MTA, que induziu a deposição de tecido mineralizado com área e espessura maiores. Tanto as amostras seladas com BD, quanto com MTA, não apresentaram reabsorção óssea em área de furca, apresentaram poucas células inflamatórias e maior intensidade do imunomarcador RUNX2 quando comparadas com a guta percha. A OPG esteve presente em amostras seladas com BD e com MTA. Embora o MTA tenha apresentado maior frequência de selamento completo e maior área e espessura de tecido mineralizado recém-formado, a BD também apresentou bons resultados histopatológicos e pode ser considerada como um adequado material de selamento de perfuração de furca. / The objective of this study was to evaluate the periradicular tissue response after intentional furcation and sealing with Biodentine (BD), mineral trioxide aggregate (MTA) or gutta percha. Pre-molars of 3 dogs were used, in a total of 30 teeth, distributed in 3 groups: experimental BD (n = 14), negative control (MTA) (n = 10) and positive control (gutta percha), for a period of 120 days. The area corresponding to furcation was analyzed radiographically. In the qualitative histopathological analysis, the presence or not of mineralized tissue at the furcation site and adjacent areas was evaluated. In the semi-quantitative histopathological analysis, scores were assigned to the parameters: presence or absence of mineralized tissue, intensity of the inflammatory process and reabsorption of mineralized tissues. In the quantitative histopathological analysis the thickness of mineralized tissue in the furcation area was measured. Immunohistochemical assays were performed for the mineralization markers: RANKL and osteoprotegerin (OPG). Indirect immunofluorescence assay evaluated RUNX-2 expression for the synthesis of mineralization proteins. Data were evaluated by chi-square test, Fisher exact test and Mann Whitney test using the Graph Pad Prism 6.0 statistical software. The groups were compared by the Kruskal Wallis test with Dunn\'s post-test. The level of significance adopted for all analyzes was 5%. In the radiographic analysis the (BD) presented better performance in relation to the MTA, in all aspects analyzed. Histologically, both MTA and BD induced the formation of mineralized tissue when compared to gutta percha, which did not induce the formation of mineralized tissue (p <.001). The complete sealing of furcation holes was more frequent with the MTA, which induced the deposition of mineralized tissue with a larger and thickness area. Both the BD and MTA sealed samples did not show bone resorption in the furcation area, showed few inflammatory cells and a greater intensity of the RUNX2 immunomarker when compared to the gutta percha. OPG was present in samples sealed with BD and with MTA. Although the MTA presented higher frequency of complete sealing and greater area and thickness of newly formed mineralized tissue, BD also presented good histopathological results and can be considered as a suitable furcation perforation sealing material.